锌指转录因子Snail在结直肠癌中的表达及其意义

目的 确定锌指转录因子Snail与结直肠癌发生发展及演进的相关性.方法 应用免疫细胞化学及免疫荧光细胞化学方法分析Snail在结直肠癌细胞株SW480与SW620内的表达情况,同时以结直肠癌组织68例及对应癌旁组织68例、腺瘤组织33例、淋巴结转移癌35例为研究对象,运用免疫组织化学方法分析Snail在这些组织中的表达情况.结果 Snail在结直肠癌细胞株SW620、SW480中的表达较强,Snail定位在结直肠癌细胞株SW620、SW480的细胞核里;Snail在正常结直肠粘膜、腺瘤、癌及淋巴结转移癌组织中的表达明显不同(X2=92.852,P=0.000);两两比较发现,腺瘤Snail表达比正常结直肠黏膜组织强(P＜0.01),淋巴结转移灶中癌组织Snail表达比原发结直肠癌组织强(P＜0.01),而原发结直肠癌组织Snail表达比腺瘤组织强(P＜0.01).结论 锌指转录因子Snail与结直肠癌发生、演进及转移相关.     

氟伐他汀钠通过下调lncRNA PTPRG-AS1表达对结直肠癌SW620细胞增殖凋亡的影响

目的:探究氟伐他汀钠对结直肠癌SW620细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法:体外培养SW620细胞、正常结直肠上皮FHC细胞,qRT-PCR法检测细胞中lncRNA PTPRG-AS1表达。SW620细胞分为对照组、氟伐他汀钠-低、中、高组、si-PTPRG-AS1组、si-NC组、氟伐他汀钠+pcDNA-PTPRG-AS1组、氟伐他汀钠+pcDNA组。CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术分别检测细胞活性、克隆形成数、凋亡率,Western blot法检测凋亡相关蛋白(cleaved-caspase3、cleaved-caspase9)表达。结果:结直肠癌SW620细胞中lncRNA PTPRG-AS1表达量高于FHC细胞(4.38±0.31 vs 1.00±0.00,P<0.05);氟伐他汀钠-低、中、高组细胞活性、克隆形成数均低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率、蛋白(cleaved-caspase3、cleaved-caspase9)表达均高于对照组(P<0.05),且lncRNA PTPRG-AS1表达量低于对照组(P<0.05);si-PTPRG...     

长链非编码RNA LINC01977在结直肠癌中的表达及临床意义

目的 研究长链非编码RNA LINC01977对结直肠癌(CRC)及细胞系增殖的影响,分析与病理特征之间的关系,探讨LINC01977对结直肠癌的临床意义。方法 收集2020年6月-2022年6月在郑州市中心医院首次确诊为CRC的50例患者的组织标本及临床病理资料,实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CRC组织和正常组织中LINC01977的表达情况;检测LINC01977在结肠正常上皮细胞系NCM460和CRC细胞系Caco2、HCT8、HT29、SW620、HCT116、SW480中表达水平。分析LINC01977与患者临床病例特征之间的相关性。通过特异性siRNA敲低HCT116、SW480靶基因表达,将细胞分为对照组(si-NC组)和实验组(si-LINC01977组),检测敲低效率,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、克隆形成与EdU试验检测细胞增殖情况。结果 LINC01977在CRC组织中表达为5.582(0.190,10.714),正常组织为2.151(0.022,6.076),差异有统计学意义(P<0.05)。LINC01977在HCT116中的表达量5.2...     

罗哌卡因通过线粒体通路诱导人结直肠癌SW620细胞株凋亡的实验研究

目的探究罗哌卡因通过线粒体通路诱导人结直肠癌SW620细胞株凋亡的机制。方法体外培养人结直肠SW620细胞,使用罗哌卡因处理人结直肠SW620细胞,采用CCK-8实验检测癌细胞活力。将结直肠癌SW620细胞分为:结直肠癌细胞组、低剂量罗哌卡因组、中剂量罗哌卡因组和高剂量罗哌卡因组;参考CCK-8实验结果,分别使用20,50和100μg/mL浓度的罗哌卡因处理低、中、高罗哌卡因组的结直肠癌细胞;采用流式细胞仪检测各组细胞线粒体膜电位;使用蛋白质印迹检测凋亡蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3和Caspase-9表达情况;采用流式细胞仪检测结直肠SW620细胞周期及凋亡情况。结果 CCK-8结果显示随着使用罗哌卡因剂量的增加,人结直肠SW620细胞的抑制率显著升高,半数致死浓度约为:69.36μg/mL。结直肠癌细胞组细胞凋亡率为(1.52±0.11)%显著低于低、中、高剂量罗哌卡因组[(35.91±5.69)%、(46.27±6.57)%、(69.36±8.01)%; F=559.203,P0.001];相比结直肠癌细胞组,使用罗哌卡因处理各组线粒体膜电位、G2/M期细胞比例、S期细胞比例、Bax蛋白相对表达水平均显著降低,且呈剂量依赖性(P0.001);相比结直肠癌细胞组,使用罗哌卡因处理各组G0/G1期细胞比例、Bcl-2蛋白、Caspase-3蛋白和Caspase-9蛋白相对表达水平显著升高,且呈剂量依赖性(P0.001)。结论罗哌卡因可以通过线粒体途径促进人结直肠SW620细胞的凋亡,其作用机制可能与Caspase-3及Bcl-2信号传导相关。     

miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的探究miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用qRT-PCR检测miR-28-5p在正常结肠细胞NCM460与结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620中表达量的差异。将HCT116、SW480、SW620各分为三组:对照组,过表达组,沉默组。对照组不予特殊处理,其余两组分别转染miR-28-5p mimic和miR-28-5p inhibitor,采用qRT-PCR验证转染效率,采用CCK8法检测三组细胞的增殖能力,采用划痕实验检测三组细胞的的迁移能力。结果miR-28-5p在结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620中低表达,与正常结肠细胞NCM460比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,过表达组细胞增殖和迁移能力均降低(P<0.05),沉默组细胞增殖和迁移能力均增强(P<0.05)。结论miR-28-5p在结肠癌细胞中低表达且有调控结肠癌细胞增殖和迁移的作用。     

盐酸石蒜碱通过调控circSEPT9/miR-654-5p影响结直肠癌SW620细胞增殖及凋亡的机制

目的 探讨盐酸石蒜碱(lycoline hydrochloride,LH)对人结直肠癌细胞SW620细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 不同剂量的L H处理SW620细胞(L H-L组、L H-M组、L H-H组),同时将正常培养的SW620细胞记为Con组;实验分组:si-NC组、si-circSEPT9组...     

DIAPH3与上皮和间质标记物在结直肠癌组织中的表达及意义

目的：探讨结直肠癌中Diaphanous相关成蛋白家族成员之一DIAPH3的表达与结直肠癌上皮间质转化的关系。方法用免疫组织化学法检测结直肠癌及应用荧光定量PCR检测结直肠癌细胞株SW620、SW480、HT29中DIAPH3、E－钙黏蛋白（E－cadherin）、细胞角蛋白（CK）及波形蛋白（vimentin）的表达。结果 DIAPH3、E－cadherin与CK在结直肠正常组织中表达高于癌组织（P＜0.05）,且与结直肠癌分化程度有关（P＜0.05）。 vi-mentin在结直肠癌中的表达高于正常组织（P＜0.05）,且与分化程度有关（P＜0.05）。 DIAPH3与E－cadherin、CK表达呈正相关,与vimentin表达呈负相关。结论 DIAPH3与结直肠癌分化与转移有关,其可能抑制结直肠癌转移及上皮间质转化的发生。     

干扰lncRNA DANCR的表达增强直肠癌细胞放疗敏感性的作用研究

探讨长链非编码RNA分化拮抗非蛋白质编码RNA(lncRNA DANCR)对直肠癌细胞放疗抵抗的影响及其作用的可能机制。方法 选择在我院新辅助治疗的直肠癌患者标本90例,qRT-PCR检测DANCR在直肠癌和癌旁组织中的表达水平,统计学分析DANCR的表达与患者放疗抵抗及临床病理参数的关系,生存分析DANCR的表达对患者预后的影响。常规培养HT29细胞,采用分次放射剂量递增建立HT29放射抵抗细胞株（HT29-R）,MTS检测HT29和HT29-R细胞的放疗敏感性,qRT-PCR检测DANCR在HT29和HT29-R细胞中的表达。HT29-R细胞分为对照组（si-NC组）和干扰DANCR表达组（si-DANCR组）并进行相应siRNA转染,MTS检测干扰DANCR对HT29-R细胞放疗敏感性的影响。si-NC组和si-DANCR组细胞于辐射作用下,平板克隆检测各组细胞平板克隆形成能力,流式细胞仪检测各组细胞周期和细胞凋亡率,western blot检测各组细胞中周期相关蛋白cyclinD1、CDK4、CDK6和凋亡相关蛋白caspase 3、Bcl-2、Bax的表达。〖HTH〗结果 DANCR在直肠癌组织中的表达显著高于在癌旁组织中的表达,DANCR的表达与直肠癌患者TNM分期和放疗敏感性相关(P＜0.05),DANCR高表达的患者预后较差(P＜0.05)。与HT29细胞相比,HT29-R细胞的放射抵抗性增加(P＜0.05),HT29-R细胞中DANCR表达增加(P＜0.05)。干扰DANCR增强HT29-R细胞的放疗敏感性(P＜0.05)。在放射作用下,与si-NC组相比,si-DANCR组HT29-R细胞平板克隆形成能力降低(P＜0.05),细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡率增加(P＜0.05),细胞中周期相关蛋白cyclinD1、CDK4、CDK6表达降低和凋亡相关蛋白caspase 3、Bax表达增加,Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05)。结论 DANCR通过调控细胞周期及凋亡相关蛋白增加直肠癌细胞放疗敏感性,是治疗直肠癌的潜在靶标。     

干扰FUT8的表达抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的作用及机制

目的研究岩藻糖基转移酶8 (fucosyltransferase 8,FUT8)对结直肠癌细胞增殖和转移能力的影响,并探讨其发挥作用的分子机制。方法采用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)数据库分析FUT8在结直肠癌组织中的表达水平;常规培养结直肠癌细胞系SW480,分为si-NC组和si-FUT8组,分别转染NC si RNA和FUT8 si RNA;Western blot检测FUT8 si RNA干扰效果; CCK8检测干扰FUT8对SW480细胞增殖能力的影响; Boyden小室检测干扰FUT8对SW480细胞侵袭能力的影响; Akt信号通路激活剂SC79分别处理si-NC组和si-FUT8组SW480细胞,分为si-NC组、si-FUT8组、si-NC+SC79组和si-FUT8+SC79组,CCK8和Boyden小室分别检测各组细胞的增殖和侵袭能力; Western blot检测各组细胞中AKT、p AKT和β-catenin蛋白的表达。结果 GEPIA数据库分析结果显示FUT8在结直肠癌组织中的表达显著高于在正常结直肠组织中的表达。与si-NC组相比,si-FUT8组细胞中FUT8的表达降低(P0.05)。与si-NC组和si-NC+SC79组相比,si-FUT8组和si-NC+SC79组细胞的增殖和侵袭能力均降低,细胞中p AKT和β-catenin蛋白的表达减少;与si-FUT8组相比,si-NC+SC79组细胞的增殖和侵袭能力均增加,细胞中p AKT和β-catenin蛋白的表达增加。结论干扰FUT8可能通过调控AKT/β-catenin信号通路抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭能力。     

趋化因子CCL19在结直肠癌中的表达和作用

目的 观察趋化因子CCL19在结直肠癌组织中的表达,探讨其对结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力的影响。 方法 收集确诊为结直肠恶性肿瘤并手术切除患者（n=85）的肿瘤组织及癌旁正常组织,运用实时定量PCR和组织微阵列免疫组化技术检测CCL19的表达水平;以实时定量PCR、蛋白质印迹技术筛选高表达CCL19受体CCR7的人结直肠癌细胞株SW620细胞作为研究对象,并给予重组人CCL19（rh-CCL19）刺激,通过细胞增殖实验、划痕实验、Transwell实验来检测SW620细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化。 结果 结直肠癌组织中的CCL19表达要明显低于癌旁正常组织（P<0.05）,且CCL19表达量与肿瘤大小和浸润深度有关（P<0.01）。在CCR7高表达的SW620细胞中,加入rh-CCL19后,其细胞增殖、迁移及侵袭能力下降（P<0.05）。 结论 CCL19在结直肠癌组织中的表达量低于癌旁正常组织,且与肿瘤大小和浸润深度有关;CCL19可抑制人结直肠癌细胞株SW620细胞增殖、迁移和侵袭能力,提示CCL19具有抑制结直肠癌的作用。     

miR-372-5p促进结直肠癌细胞的转移：通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路

目的 探讨miR-372-5p通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路对结直肠癌细胞迁移能力的影响及机制。 方法 qRT-RCR检测miR-372-5p在结直肠癌和癌旁组织及结直肠癌细胞和正常肠上皮细胞中的表达;生物信息学和双荧光素酶实验验证miR-372-5p与PTEN的靶向关系;Western blotting检测转染inhibitor-NC/mimics-NC（miR-372-5p抑制剂/类似物的阴性对照）、miR-inhibitor（miR-372-5p抑制剂）、miR-mimics（miR-372-5p类似物）以及共转染miR-inhibitor+si-PTEN（PTEN干扰）、miR-mimics+PI3K抑制剂对PTEN、CXCL12表达和PI3K/AKT信号通路激活水平的影响;Transwell实验、划痕实验检测以上各组、共转染miR-mimics+si-CXCL12（CXCL12干扰）以及转染mimics-NC、miR-mimics后的HCT116条件培养基对细胞迁移能力的影响。结果 结直肠癌组织中miR-372-5p较癌旁组织表达升高,相对于NCM460,HCT116较SW620中miR-372-5p表达上调更显著（P<0.01）;双荧光素酶实验证实PTEN是miR-372-5p的潜在靶基因（P<0.05）。相较于NC组,miR-mimics可降低PTEN蛋白表达水平,增加CXCL12蛋白表达水平和AKT磷酸化水平,提高HCT116迁移能力;而miR-inhibitor则导致相反的结果（P<0.05）,si-PTEN可中和miR-inhibitor的作用（P<0.01）;PI3K抑制剂可降低CXCL12的蛋白表达水平,并抑制HCT116迁移能力（P<0.05）,而miR-mimics可中和这一作用（P<0.01）;miR-mimics转染HCT116的条件培养基可提高NCM460的迁移能力（P<0.01）,联合si-CXCL12可逆转miR-mimics对HCT116转移的促进作用（P<0.01）。结论 miR-372-5p通过靶向PTEN激活PI3K/AKT信号通路,上调CXCL12的表达,从而促进结直肠癌细胞的迁移能力。     

长链非编码RNA-ROR对结直肠癌SW620细胞增殖的影响

目的了解长链非编码RNA-ROR（LncRNA-ROR）在结直肠癌SW620细胞增殖中的作用。方法选择40例结直肠癌组织及相应正常组织（距肿瘤切缘5cm以外）,首先采用qRT-PCR技术检测LncRNA-ROR在结直肠癌组织中的表达情况,并分析其表达与病人临床病理因素的相关性。构建慢病毒载体LV5-ROR、LV5-Vector转染到结直肠癌细胞SW620中,验证LncRNA-ROR的表达,分析LncRNA-ROR过表达对结直肠癌细胞CCK-8功能及SW620平板克隆形成的影响。结果与正常组织比较,LncRNA-ROR在结直肠癌组织中低表达（P < 0.01）,其表达水平与TNM分期具有相关性（P < 0.05）。经转染筛选后,qRT-PCR检测证实SW620中的LncRNA-ROR表达增加,其高表达导致SW620增殖能力的下降（P < 0.01）。结论LncRNA-ROR的过表达抑制了结直肠癌细胞SW620的增殖。     

miR-30b-5p抑制胆固醇合成和结直肠癌细胞增殖

目的 探索 miR-30b-5p 在结直肠癌中的作用及机制.方法 收集结直肠癌患者的癌及癌旁组织、患者及正常人血清,提取RNA,实时荧光定量 PCR检测 miR-30b-5p表达.将miR-30b-5p的inhibitors转入HT-29 细胞中;将miR-30b-5p的mimics转入 HCT-116 细胞中;CCK-8 试剂盒检测细胞活力;胆固醇试剂盒检测细胞中胆固醇含量;实时荧光定量PCR检测低密度脂蛋白受体( LDLR)的表达,Western blot检测 LDLR 蛋白表达;在转入 miR-30b-5p inhibitors 的HT-29细胞中应用siRNA敲低LDLR,检测LDLR蛋白表达、细胞胆固醇含量及细胞增殖.结果 与正常人相比,miR-30b-5p在结直肠癌患者组织及血清中表达降低,且其在结直肠癌细胞系HT-29、Caco-2及HCT-116中的表达量低于正常结直肠细胞系NCM460;在HT-29细胞中转入miR-30b-5p的inhibitors,细胞增殖加快,胆固醇含量增加,LDLR表达上调;在HCT-116细胞中转入miR-30b-5p的mimics,细胞增殖减慢,胆固醇降低,LDLR表达被抑制;此外,在miR-30b-5p沉默的HT-29细胞中敲低LDLR,胆固醇含量减少,细胞增殖减慢.结论 miR-30b-5p在结直肠癌中是一种抑癌microRNA,它通过抑制LDLR和胆固醇合成抑制结直肠癌细胞增殖.     

Hsa-miR-186在结肠癌细胞中的表达及作用

目的检测hsa-miR-186在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨hsa-mir-186对结肠癌细胞生物学特性的影响及作用。方法
应用实时荧光定量PCR 检测了miR-186 在12 对配对的结肠癌组织、癌旁组织和5 株结肠癌细胞中的表达情况;扩增包含
miR-186前体序列在内的基因片段,并将其克隆至PLVTHM载体,将PLVTHM- miR186质粒转染SW620细胞,流式分选慢病
毒感染的SW620细胞;CCK-8法、划痕实验和Transwell检测细胞检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。Western Blot检测靶基因
YY1 蛋白水平的表达。结果与癌组织相比,12 例癌组织中miR-186 的平均表达量为0.0024±0.0027,显著低于癌旁组织的
0.066±0.068,P=0.008;miR-186 在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620 和LOVO相对表达量分别为0.118±0.138 和0.157±
0.001,与在低转移潜能HT-29 细胞中表达量1.000 ± 0.00,差异具有统计学意义P<0.05;质粒双酶切及测序鉴定
PLVTHM-hsa-miR186重组质粒构建成功;荧光定量PCR表明稳定过表达miR-186的结肠癌细胞株SW620构建成功,且过表达
miR-186后降低了细胞的增殖、迁移及侵袭能力,差异均具有统计学意义P<0.05。稳定过表达miR-186的细胞中,miR-186的表
达明显高于对照组和未处理组,YY1蛋白质水平有所下降。结论hsa-miR-186在结肠癌组织以及在高转移潜能的人结肠癌细
胞SW620、LOVO中低表达,具有类似抑癌基因的作用;成功构建PLVTHM-miR186慢病毒重组质粒,并稳定转染结肠癌细胞
SW620,抑制了细胞的增殖、迁移和侵袭能力。miR-186调控YY1表达可能是抑制结直肠癌生物特性的重要机制之一。
     

LncRNA-BLACAT1调节CyclinD1/CDKN2B轴对非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制

目的：探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者癌组织和癌细胞中长链非编码RNA（LncRNAs）BLACAT1的表达特征及其调控机制,阐明BLACAT1在NSCLC发生发展中的作用和临床意义。方法：高通量基因表达数据库（GEO数据库）分析BLACAT1在NSCLC组织的表达特征,Kmplot网站分析BLACAT1表达与NSCLC患者生存预后的联系。qRT-PCR法检测BLACAT1在25例NSCLC患者癌组织和癌旁组织及NSCLC细胞系中的表达情况。将si-NC（阴性对照）和si-BLACAT1（抑制物）转染入NSCLC A549细胞作为si-NC组和si-BLACAT1组,qRT-PCR法分别检测各组A549细胞中BLACAT1 mRNA表达水平,流式细胞术检测各组细胞不同细胞周期细胞百分率,细胞集落生成实验检测各组细胞克隆形成能力,CCK8实验检测各组细胞增殖活性,qRT-PCR和Western blotting法检测各组A549细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B（CDKN2B）mRNA和蛋白表达水平。结果：GEO数据库的NSCLC数据集GSE18842和GSE19804、qRT-PCR法检测以及Kmplot分析,与癌旁组织比较,NSCLC患者癌组织中BLACAT1表达水平明显升高（P< 0.01）;NSCLC患者癌组织中BLACAT1低表达患者的存活时间明显高于BLACAT1高表达患者（P=0.011）。与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞中BLACAT1 mRNA表达水平明显降低（P< 0.05）;与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞周期G₁期细胞百分率增加（P< 0.05）,S期细胞百分率降低（P< 0.05）,细胞克隆形成能力和细胞增殖活性均降低（P< 0.05或P<0.01）;与si-NC组比较,si-BLACAT1组A549细胞中CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P< 0.05）,而CDKN2B mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P< 0.05或P<0.01）。结论：LncRNA-BLACAT1在NSCLC患者癌组织和癌细胞中表达升高,下调BLACAT1表达可通过调节CyclinD1/CDKN2B轴从而抑制NSCLC A549细胞增殖,BLACAT1可作为NSCLC患者的潜在治疗靶点。     

Wnt拮抗因子SFRP1在结直肠癌发病机制中的作用

目的 检测结直肠癌中Wnt拮抗因子分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)基因的甲基化及表达状态,探讨SFRP1在结直肠癌发病中的作用.方法 选自中国医科大学盛京医院的结直肠癌组织标本及相应的癌旁组织标本各35例,利用逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)和即时定量聚合酶链反应(real-time PCR)技术检测在结直肠癌组织和相应的癌旁组织中SFRP1的表达状态.利用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP-PCR)技术检测结直肠癌组织和相应的癌旁组织中SFRP1的甲基化状态.利用RT-PCR和Western blot技术检测结直肠癌细胞中SFRP1的表达状态.结果 SFRP1 mRNA的表达水平在结直肠癌组织中明显低于癌旁组织(P＜0.01).SFRP1的甲基化频率结直肠癌组织(68.6％)明显高于癌旁组织(11.4％)( x2=21.49,P＜0.01).在结肠癌细胞HCT116、SW480和SW620中SFRP1未见表达,SFRP1存在甲基化,而在HT-29中SFRP1有表达,SFRP1无甲基化.对HCT116、SW480和SW620使用去甲基化试剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(DAC)处理后,SFRP1出现表达.结论 SFRP1甲基化是引起SFRP1在结直肠癌中表达下调的重要原因之一.SFRP1甲基化及其所致表达下调可能在部分结直肠癌的发病过程中起重要作用.     

microRNA-622调控DYRK2在结肠癌中表达并促进结肠癌细胞SW1116侵袭转移

目的 探讨微小RNA622(microRNA-622,miR-622)及双重特异性酪氨酸调节激酶2(DYRK2)在结肠癌组织及结肠细胞系SW1116、SW480中的表达情况并研究其对SW1116侵袭转移能力的影响.方法 选取82例结肠癌及癌旁组织标本,培养结肠癌细胞系SW1116、SW480及正常结肠上皮细胞系NCM460细胞.Real time PCR检测组织及细胞中miR-622的表达,Real time PCR、免疫组织化学、Western blot检测DYRK2基因及蛋白的表达并行Pearson相关性分析.在SW1116中转染miR-622 mimics上调miR-622表达,同时对照(NC)组转染阴性序列并验证,Real time PCR及Western blot进一步检测上调miR-622后SW1116中DYRK2基因及蛋白表达水平,同时用Transwell法检测SW1116细胞侵袭转移能力的变化.结果 Real time PCR及Western blot结果显示,相比于癌旁组织和正常结肠上皮细胞系NCM460,结肠癌组织及结肠癌细胞SW1116中miR-622 mRNA呈高表达而DYRK2 mRNA及蛋白呈低表达,两者表达呈明显负相关(r=0.916,P＜0.01).转染miR-622 mimics后,Real time PCR及Western blot结果显示,相比于NC组,miR-622 mimics组DYRK2 mRNA及蛋白表达水平减低(P＜0.01).相应的,Transwell结果显示,相比于NC组,SW1116细胞转染miR-622 mimics后侵袭转移能力明显增强(P＜0.01).结论 结肠癌中miR-622呈高表达而DYRK2呈低表达,上调miR-622可负性调控DYRK2表达并促进SW1116细胞侵袭转移.     

LINC01285促进结直肠癌细胞的增殖和转移

目的 探究长链非编码RNA LINC01285在结直肠癌（CRC）中的表达特点及临床意义,阐明潜在的生物学功能及调控机制。方法 基于Starbase生物数据库检索LINC01285在CRC及癌旁组织中的表达量;收集本单位结直肠癌患者的CRC样本及周围正常样本各70例,分组为肿瘤组与非肿瘤组;利用荧光定量PCR实验（RT-qPCR）验证本中心CRC队列、肿瘤细胞中LINC01285的表达量,并分析其与患者临床病理参数及无瘤生存时间的关系。采用脂质体转染技术构建LINC01285低表达细胞株并分为si-Control（对照组）、si-LINC01285-1（敲低组1）、si-LINC01285-2（敲低组2）3个组,采用CCK-8实验、流式细胞学、Transwell 法及蛋白印迹法检测 LINC01285 对结直肠癌细胞的增殖、凋亡及转移能力的影响及潜在的调控机制。结果Starbasev3.0 公共数据库获取 TCGA-COAD 转录组测序数据发现 LINC01285 在癌组织中的表达量明显高于正常组织（P=0.00016）;RT-qPCR结果显示：与非肿瘤组相比,LINC01285在肿瘤组表达水平显著上调（P=0.0002）,其表达量与肿瘤组织学分化程度（P=0.036）、T分期（P=0.000）、淋巴结转移（P=0.001）、TNM分期（P=0.000）、Duke分期（P=0.009）和无瘤生存时间（P=0.0102）密切相关。相比于正常结直肠粘膜细胞,CRC细胞（尤其在SW620和HT-29）内LINC01285的表达水显著高表达（P<0.001）。相比于 si-Control 组,脂质体转染的细胞（si-LINC01285-1、si-LINC01285-2）内 LINC01285 表达量显著下降（P<0.001）。同时相比于si-Control组,LINC01285敲低CRC细胞组的增殖能力明显降低（P<0.001）、早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡率明显升高（P<0.05）。相比于si-Control组,LINC01285敲低组的CRC细胞迁移和侵袭能力显著下降（P<0.001）,且上皮-间质转化相关通路的E-钙粘蛋白表达量显著升高（P<0.001、N-钙粘蛋白显著下调（P<0.001）。结论 LINC01285的表达与CRC的预后高度相关,可调节上皮-间质转化通路影响CRC细胞的增殖、凋亡与转移能力。