表没食子儿茶素没食子酸酯对人大肠癌株SW620增殖的抑制及与PAK1基因表达的相关性研究

目的 观测表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人大肠癌SW620细胞增殖及SW620细胞表达PAK1的影响.方法 用终浓度为40 μmol/L、60 μmol/L和80 ixmo1/L的EGCG干预人大肠癌细胞株SW620,在0、24、48和72 h不同时间点上用噻唑蓝(MTT)比色法检测EGCG对SW620细胞生长的影响;并以SW620细胞空白组为对照,用蛋白免疫印迹(Westerm blot)检测不同EGCG作用48 h时SW620细胞PAK1的表达水平变化.结果 EGCG对大肠癌SW620细胞增殖有显著的抑制作用,而且与SW620细胞空白对照组相比.EGCG处理组细胞的PAK1蛋白表达受到显著抑制.结论 EGCG抑制大肠癌SW620细胞增殖的机制可能与EGCG通过调控大肠癌细胞的PAK1表达相关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of epigallocatechin-3-gallate (EGCG) on the proliferation of SW620 cells and the expression of PAK1 gene. Methods Human colonic cancer cell line SW620 was treated with EGCG at 40, 60 and 80 μmol/L and cultured in RPMI 1640 medium for 0, 24, 48 and 72 h. The proliferation of SW620 cells was observed by MTT assay before and after EGCG treatment, and the expression of PAK1 protein was observed by Western blotting. Results SW620 cells treated with EGCG displayed a slowed growth in comparison with the control cells, and the growth rate decreased with the increase of EGCG concentration. PAK1 protein expression was lowered in SW62Q, cells after EGCG treatment for 48 h. Conclusion EGCG can inhibit the proliferation and partially reduce the expression of PAK1 protein in SW620 cells.     

麦冬皂苷B对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨麦冬皂苷B(OPB)对人结肠癌SW620细胞增殖、凋亡及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路的影响。方法采用含100 k U·L-1青霉素、100 mg·L-1链霉素、体积分数10%胎牛血清的RMPI-1640培养液体外培养结肠癌SW620细胞,取对数生长期细胞接种于96孔板中,细胞培养24 h后分为空白对照组、OPB低剂量组(5μmol·L-1)、OPB中剂量组(10μmol·L-1)和OPB高剂量组(20μmol·L-1),然后将各组细胞培养板移入培养箱中继续培养。取各组培养24、48、72 h的SW620细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SW620的细胞抑制率。取各组培养48 h的SW620细胞,采用流式细胞术检测SW620细胞周期及凋亡情况,酶联免疫吸附试验法检测SW620细胞中TGF-β1蛋白的表达,Western blot法检测SW620细胞中磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad4及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达。结果 OPB低、中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于空白对照组(P <0. 05),OPB中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB低剂量组(P <0. 05),OPB高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB中剂量组(P <0. 05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组G2/M期SW620细胞比例下降,G0/G1和S期SW620细胞比例升高(P <0. 05)。与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组G2/M期SW620细胞比例降低,G0/G1和S期SW620细胞比例升高(P <0. 05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组G2/M期SW620细胞比例降低,G0/G1和S期SW620细胞比例升高(P <0. 05)。OPB低、中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于空白对照组(P <0. 05),OPB中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB低剂量组(P <0. 05),OPB高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB中剂量组(P <0. 05)。OPB低、中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于空白对照组(P <0. 05),OPB中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB低剂量组(P <0. 05); OPB高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB中剂量组(P <0. 05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05);与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。结论OPB可明显抑制人结肠癌SW620细胞增殖,其机制可能与OPB阻滞TGF-β1/Smad信号通路有关。     

原苏木素B抗结肠癌细胞的作用及机制

目的：研究原苏木素B(PSB)对人结肠癌SW620、SW480细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响，并探讨其抗结肠癌细胞的作用及机制。方法：实验1:将SW620、SW480细胞各分为7组，分别为对照组(不加药物经DMSO处理)和PSB-1～PSB-6组(分别给予6.25μg/ml、12.50μg/ml、25.00μg/ml、50.00μg/ml、100.00μg/ml和200.00μg/ml PSB),并分别处理24 h、48 h、72 h和96 h。实验2:将结肠癌SW620、SW480细胞各分为4组：对照组(不加药物经DMSO处理)、PSB-7～PSB-9组(分别给予17.5μg/ml、35.0μg/ml和70.0μg/ml PSB处理24 h);另外SW620细胞中又分为实验1组(25.0 ng/ml IGF-1处理24 h)、实验2组(25.0 ng/ml IGF-1+35.0μg/ml PSB处理24 h)、实验3组(1μmol/L AZD2858处理24 h)和实验4组(1μmol/L AZD2858+35.0μg/ml PSB处理24 h)。检测SW620、SW480细胞增...     

As_2O_3联合丹参酮ⅡA对SW620细胞侵袭转移能力的影响

目的:探讨As_2O_3(arsenic trioxide,As_2O_3)联合运用丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对结肠癌SW620细胞迁移和侵袭的影响,并探讨联合用药与单独用药的差异。方法:应用MTT法检测不同浓度As_2O_3、TanⅡA及两药的联合用药对人结肠癌SW620细胞的增殖抑制作用,确定最佳联合用药浓度;分别用As_2O_3和TanⅡA以及两药联合处理结肠癌SW620细胞,同时以未经药物处理的SW620细胞作为空白对照,5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)处理组为阳性对照组。应用Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:MTT试验结果表明,As_2O_3(2.5μg/m L)联合TanⅡA(10μg/m L)为最佳联合用药浓度。经As_2O_3和TanⅡA联合干预后,SW620细胞的迁移和侵袭能力比空白对照及单药组明显降低(P0.01)。结论:As_2O_3联合TanⅡA作用能够明显抑制人结肠癌SW620细胞的侵袭转移能力。     

蟾皮华蟾毒配基组分体外对肿瘤及正常细胞株的抑制作用

[目的]测定蟾皮第18组分(F18)的化学成分并考察其体外对不同细胞株的抑制作用。[方法]通过质谱法对已分离的F18进行测定,采用噻唑蓝法(MTT法)检测F18对人SW480、SW620、BGC823肿瘤细胞株、人L02、CIK正常细胞株及鼠C26、CT26、4T1肿瘤细胞株的抑制作用,CCK-8法检测F18对SW620、L02、CIK在不同时间点的细胞存活率,最后流式细胞术检测F18对SW620细胞周期的影响。[结果]经鉴定蟾皮F18的主要成分为华蟾毒配基,故将蟾皮F18命名蟾皮华蟾毒配基组分(CFSB)。CFSB对SW480、SW620、BGC823、L02、CIK、C26、CT26、4T1细胞的IC_(50)值分别为1.10、1.15、1.55、4.85、2.63、21.22、31.39、20.75 mg/L,对SW620、L02、CIK细胞存活率呈时间依赖性。流式细胞术测定浓度在2 mg/L的CFSB干预SW620细胞24 h后其S期、G_2/M期细胞比例分别由36.41%增至55.73%、10.89%增至16.95%。[结论]CFSB对肿瘤细胞和正常细胞的增殖均有抑制作用,可使SW620细胞周期阻滞在S期和G_2/M期。     

趋化因子受体CXCR4小干扰RNA对人大肠癌细胞株迁移的抑制作用

目的:探讨趋化因子受体CXCR4小干扰RNA(siRNA)对人大肠癌细胞株迁移的抑制作用.方法:采用RT-PCR、Western印迹和体外迁移实验检测趋化因子受体CXCR4在大肠癌细胞株SW480、SW620、LoVo 细胞的表达及迁移能力.将与CXCR4 mRNA互补的 siRNA及非抑制性双链RNA(Non-silencing dsRNA),在脂质体介导下以150 nmol/L终浓度转染大肠癌细胞SW480,以RT-PCR和Western印迹法检测CXCR4表达的变化,Transwell迁移实验检测大肠癌细胞SW480迁移的变化.结果:大肠癌细胞SW480高表达CXCR4,大肠癌细胞LoVo低表达CXCR4,SW620的CXCR4表达水平介于二者之间.与LoVo 细胞相比,SW480和SW620迁移细胞明显增多(P＜0.01).与对照组、脂质体组和Non-silencing dsRNA组相比,siRNA组SW480细胞内CXCR4 mRNA和蛋白均明显降低,细胞迁移被明显抑制 (P＜0.01).结论:CXCR4 siRNA可通过下调CXCR4的表达抑制人大肠癌细胞SW480的迁移.     

miR-101 对结直肠癌细胞SW620 生物学特性的影响

目的探讨miR-101对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法利用CCK8法、平板克隆形成实验、细 胞周期、细胞凋亡方法分别检测SW620、GV209-SW620、mir101-SW620 3组细胞的生物学特性。结果CCK8比色法结果显示 SW620各组细胞生长时间水平差异具有显著性（F=4152,P<0.001）,细胞增殖能力组间有显著性差异（F=10220,P<0.001）。平 板克隆实验的结果为SW620 空白对照组、GV209-SW620 对照组和mir101-SW620 组的克隆形成率分别为：44.33%、48.17%、 35.17%。SW620 3组细胞间的克隆形成能力差异具有统计学意义（F=73.015,P<0.001）。细胞周期分析发现SW620各组细胞 间其G1、S、G2/M 期存在着统计学差异（F=45.974,P=0.019;F=122.139,P=0.000;F=115.171,P=0.000）。除了SW620 和 GV209-SW620 的G2 期分布无统计学差异外（P=0.441）,其余各组G1、G2/M 期均有统计学差异（P<0.01）;与SW620 和 GV209-SW620相比,mir101-SW620组出现了明显的G1和G2/M期周期阻滞。细胞凋亡实验发现SW620细胞各组细胞凋亡率 差异有统计学意义（F=6115,P<0.001）,各组进行两两比较,均有统计学差异（P<0.01）。与SW620空白细胞组、GV209-SW620 对照组相比,miR-101过表达组细胞凋亡率增加（P<0.05）。结论miR-101能够抑制结直肠癌细胞SW620的增殖,细胞G1和G2/ M期周期阻滞及促进细胞凋亡。     

精脒对SW620细胞增殖及糖酵解的影响

目的 探讨精脒对人结肠癌SW620细胞增殖及糖酵解的影响.方法 以SW620细胞为研究对象,用0.625～2.5 μmoL/L精脒(SPD)作用于细胞,细胞密度以104个/mL接种于96孔培养板,分别培养24 h后,MTT法检测细胞增殖情况;同时,取6孔板培养24 h的细胞上清液,用试剂盒检测SW620细胞葡萄糖消耗及乳酸水平;细胞密度以1.2× 105个/mL接种于6孔培养板中,培养24 h后加入不同浓度SPD,继续培养24 h后,Western blot检测缺氧诱导因子(HIF-1)、乳酸脱氢酶(LDHA)及葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的变化.结果 与对照组比较,精脒各浓度组均能促进SW620细胞的增殖(P＜0.01),且促进作用呈剂量依赖性;精脒各浓度组作用后SW620细胞内葡萄糖的消耗及乳酸含量明显增多(P＜0.01),呈剂量依赖性;与对照组比较,LDHA、HIF-1及GLUT1蛋白表达水平随着精脒浓度的升高而增加(P＜0.01),且呈剂量依赖性.结论 精脒具有促进人结肠癌SW620细胞增殖及糖酵解的作用.     

人参皂苷Rh2对人结肠癌细胞株SW620和LOVO生长的抑制作用

目的:探讨人参皂苷Rh2对人结肠癌细胞株SW620和LOVO生长的抑制作用。方法:体外培养人结肠癌细胞株SW620和LOVO,加入终浓度分别为20～100μmol/L的人参皂苷Rh2。采用MTT法测定药物对细胞的的增殖抑制率(IR),并计算半数抑制浓度(IC50)。倒置显微镜观察细胞形态。结果:人参皂苷Rh2作用SW620和LOVO24小时IC50分别为36μmol/l和40μmol/L;显微镜观察,药物作用后细胞出现明显的凋亡形态。结论:人参皂苷Rh2对SW620和LOVO细胞的生长具有抑制作用,且呈时间剂量依赖性。     

lncRNA JPX靶向miR-378参与丹参酮Ⅱ A对结肠癌SW620细胞增殖、克隆、凋亡的影响

目的 研究lncRNA JPX靶向miR-378参与丹参酮Ⅱ A对结肠癌SW620细胞增殖、克隆、凋亡的影响及机制.方法 结肠癌SW620细胞分成对照组、丹参酮Ⅱ A组(丹参酮Ⅱ A处理)、vector组(转染阴性对照载体)、JPX组(转染pcDNA-JPX)、丹参酮Ⅱ A+vector组(转染阴性对照载体,然后给予丹参酮Ⅱ A处理)、丹参酮Ⅱ A+JPX组(转染pcDNA-JPX,然后给予丹参酮Ⅱ A处理)、丹参酮Ⅱ A+JPX+miR-NC组(共转染pcDNA-JPX、mimics control,然后给予丹参酮Ⅱ A处理)、丹参酮Ⅱ A+JPX+miR-378组(共转染pcDNA-JPX、miR-378 mimics,然后给予丹参酮Ⅱ A处理)、丹参酮ⅡA+Anti-NC组(转染inhibitor control,然后给予丹参酮Ⅱ A处理)、丹参酮Ⅱ A+Anti-miR-378组(转染miR-378 inhibitor,然后给予丹参酮Ⅱ A处理).CCK-8检测细胞增殖,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡.荧光素酶报告系统检测定JPX和miR-378的靶向关系.结果 与对照组比较,丹参酮Ⅱ A组结肠癌SW620细胞存活率、克隆形成数目均降低,凋亡率升高(P＜0.05).与vector组比较,JPX组结肠癌SW620细胞存活率、克隆形成数目均升高,凋亡率降低(P＜0.05).与丹参酮Ⅱ A+vector组比较,丹参酮Ⅱ A+JPX组结肠癌SW620细胞存活率、克隆形成数目均升高,凋亡率降低(P＜0.05).与丹参酮Ⅱ A+Anti-NC组比较,丹参酮Ⅱ A+Anti-miR-378组结肠癌SW620细胞存活率、克隆形成数目均升高,凋亡率降低(P＜0.05).与丹参酮Ⅱ A+ JPX+ miR-NC组比较,丹参酮Ⅱ A+JPX+ miR-378组结肠癌SW620细胞存活率、克隆形成数目均降低,细胞凋亡率升高(P＜0.05).JPX靶向促进miR-378表达.结论 丹参酮Ⅱ A通过下调JPX靶向miR-378诱导结肠癌SW620细胞凋亡.     

骨科固定及植入器材的应用与发展

介绍了常用骨科固定及植入器材,并对其发展历史、作用及特点作简要概述.     

方药离合今论

通过对方剂配伍规律的研究,阐述了配伍在遣药组方及方中药性发挥中的重要作用,指出如配伍得当,可选择发挥方中之药的某一药性,可使方剂直达病位,亦可解毒增效,体现了方药离合之妙。     

基于"毛脉合精"与"毛脉失和"探讨脉的功能实现与脉病机理证治

脉是气血运行的通道.痰浊、瘀血等有形实邪停聚脉道,气血运行失常,脉道结构因而改变甚则闭塞不通,引起所支配脏腑失去气血濡养的一系列疾病称为"脉病"."毛脉合精"是脉通行气血、濡养脏腑官窍的重要前提,"毛脉失和"是脉病发生发展的初始阶段.论述从以下方面进行:首先,结合《黄帝内经》相关条文,拓展"毛脉合精"理论内涵,论证了其结构应包括皮毛、腠理、分肉、三焦等,功能应包含通行营卫、津液和调、津血渗化等核心内容;其次,在"毛脉合精"基础上结合玄府学说,论证了玄府通利是"毛脉合精"的重要条件;最后,探讨在"毛脉失和"的影响下,脉病痰瘀证之痰浊、痰结、痰瘀病机演变过程,为继承和发展中医脉病理论提供新的思路.     

增强法律意识 加强病案质量监控

病案作为重要的医学信息源,不仅可为医疗、教学、科研提供宝贵资料,而且在法律、保险和医院管理等方面发挥着重要作用。尤其是在解决医疗纠纷、进行医疗事故鉴定、判定医务人员和医疗活动有无医疗过错等方面是一个最具法律效力的书证。为确保病案质量的正确性、可靠性和完整性,防止医疗纠纷的发生,增强法律意识,加强病案质量监控尤为重要。     

文学消费与中国古代小说、戏剧的盛衰

任何文学样式的产生、发展、流变和盛衰，都与其本身所具有的消费功能有着直接的关系。中国古代小说从产生时的“不登大雅之堂”到逐渐成为人们文学消费的主体，在这一过程中，读者的消费需求起着相当大的作用。中国古代戏剧也经历了从幼稚到成熟的过程，但由于其自身形式的局限，戏剧的消费群体随着社会的发展而逐渐萎缩，戏剧走向衰微。从文学消费角度看中国古代小说与戏剧的盛衰趋势是明显的。     

英语词义与语境的关系及词义教学的方法

词汇是语言的建筑材料，词汇教学是英语教学的重要内容之一。而词义教学是词汇教学的核心。传统的词汇教学往往简单罗列词义。强调词的字面意义。而忽视词在实际使用中的意义。主要通过翻译和对比的方法进行。难以达到理想的效果。为了探讨更有效的词义教学方法。采取讨论词义理解与语境的关系。及以语境理论和深层认知优势为指导的情景法和推断法进行词义教学，认为词义的理解与语境密切相关，依据语境才能正确理解和掌握词义。语境理论指导下的情景法和推断法发挥了深层认知的优势。是词汇教学的有效方法。     

病案影像存储与传输系统的设计与实现

传统纸质病案的数字化是整个医院信息化进程中的重要步骤。本文针对病案数字化采集和管理的需求特点,介绍了一个实用的病案影像存储服务系统的设计和实现。该系统实现了对扫描得到的病案影像的存储、传输、浏览、打印和管理。且有界面友好、可靠性高、易于现有医疗信息系统集成等特点。通过较长时间的实际使用,该系统运行稳定,有效发挥了病案在医、教、研方面的真正价值和作用。     

知母皂苷元对成骨细胞活性和破骨细胞分化及功能的影响

目的： 考察知母皂苷元(SAR)对体外培养成骨细胞活性和破骨细胞分化及功能的影响。方法： 培养小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1,分别采用MTT法、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测及茜素红染色法观察SAR对MC3T3-E1细胞增殖、ALP活性及矿化结节形成的影响;分别采用皮质骨来源破骨细胞分离及骨髓间充质干细胞诱导破骨细胞形成两种方法培养破骨细胞,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)阳性细胞计数及骨吸收陷窝计数来观察不同浓度SAR对成熟破骨细胞活性及破骨细胞诱导分化的影响。结果： 与对照组相比,各质量浓度SAR(0.01,0.1,1 μg/mL)对MC3T3-E1细胞均具有明显的促增殖作用(P<0.05,P<0.01);处于快速增殖的MC3T3-E1细胞给药处理后各组间ALP活性未见明显差异,但对于增殖晚期MC3T3-E1细胞,不同浓度SAR均可使ALP活性增高,其中1 μg/mL组效应最强,与对照组相比差异非常显著(P<0.01);连续给药处理细胞15 d,SAR各组矿化结节形成数量与对照组相比均有增多趋势。此外,各浓度SAR对成熟破骨细胞数量及骨吸收能力均无明显影响,但均能抑制骨髓细胞分化形成破骨细胞。结论： SAR能促进体外培养的成骨细胞的增殖与分化成熟;SAR对分化成熟的破骨细胞无明显影响,但可抑制骨髓细胞向破骨细胞的分化,从而减少破骨细胞的产生。     

肝硬化门静脉高压症大鼠脾切除术后高凝状态与血小板数量和功能的变化

目的 研究肝硬化门脉高压症脾切除术后血小数量和功能的变化,探讨术后高凝状态原因。方法 以四氯化碳所致肝硬化门脉高压症大鼠模型为研究对象,随机分为9组：P组为术前对照组;a、b、c、d组行部分大网膜切除术,相应于术后第3、7、14、21天采血检测;A、B、C、D组行脾切除术,也于术后第3、7、14、21天采血检测。检测项目包括：D-二聚体浓度、血小板计数、血小板聚集率（PAgT）、α颗粒膜蛋白-140（GMP-140）血浆浓度等。结果 ①脾切除术组D-二聚体含量术后即显著上升,至术后第14天显著高于对照组,至术后第21天仍未见下降;②脾切除术组血小板计数、GMP-140含量术后长时间维持在高水平,至术后第21天仍显著高于术前和对照组,而PAgT手术前后无显著变化。结论 肝硬化门脉高压症大鼠脾切除术后血液处于高凝状态,血小板持续增多和功能活跃可能是重要原因之一。