粘蛋白1串联重复区自身抗体检测ELISA方法的建立及其在癌症检测中的应用

目的:探讨粘蛋白1（mucin 1,MUC-1）的串联重复区（variable number tandem repeat,VNTR）自身抗体检测在癌症中的临床意义。方法:选择粘蛋白1分子中的串联重复区作为检测靶标,构建间接ELISA法检测体系,检测若干健康人群血清和192例各类癌症患者血清中的抗VNTR自身抗体。结果:结果表明,该检测方法的癌症检出灵敏度达76.1%,特异性达93.8%。结论:检测MUC-1蛋白的VNTR 抗体具有癌症临床诊断意义,可以成为血清MUC-1蛋白检测夹心ELISA方法的有效补充,进一步提高该方法在癌症临床诊断中的精确度。     

EVI1表达与食管癌细胞放疗敏感性的关系及机制

【摘要】目的 探讨异位病毒整合位点1( EVI1)对食管癌细胞放疗敏感性的影响及作用机制。方法 选择在我院接受放射治疗的食管癌患者组织标本67例,qRT-PCR检测EVI1在食管癌组织中的表达水平,Spearman等级相关分析EVI1的表达与放疗敏感性的相关性。常规培养ECA109细胞,采用分次放疗递增法诱导建立放射抵抗型细胞株ECA109（ECA109R）,MTS检测ECA109和ECA109R细胞48 h的放射剂量IC50值,western blotting检测ECA109和ECA109R细胞中的EVI1表达。ECA109R细胞分为对照组（si-NC组）和干扰EVI1表达组（si-EVI1组）并进行siRNA转染,采用western blotting检测各组细胞中EVI1的表达,MTS检测各组细胞48 h的放射剂量IC50值。si-NC组和si-EVI1组细胞经辐射后,平板克隆检测各组细胞平板克隆形成率,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,western blotting检测各组细胞中凋亡相关蛋白活化caspase 3、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 EVI1在放疗抵抗食管癌组织中的表达高于其在放疗敏感食管癌组织中的表达(P＜0.05),EVI1的表达与食管癌患者分化程度和临床分期相关(P＜0.05),EVI1的表达与放疗敏感性呈负相关(P＜0.05)。与ECA109细胞相比,ECA109R细胞48 h的放射剂量IC50值和EVI1的表达增加(P＜0.05)。siRNA转染ECA109R细胞后,与si-NC组相比,si-EVI1组细胞中EVI1的表达降低和放射剂量IC50值降低(P＜0.05)。与辐射si-NC组相比,辐射si-EVI1组细胞平板克隆形成率降低,细胞凋亡率增加(P＜0.05)。与辐射si-NC组相比,辐射si-EVI1组细胞中活化caspase 3和Bax蛋白的表达均增加,Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05)。结论 EVI1可能通过调控凋亡相关蛋白增加食管癌细胞放疗敏感性,是治疗食管癌的潜在靶标。     

干扰lncRNA DANCR的表达增强直肠癌细胞放疗敏感性的作用研究

探讨长链非编码RNA分化拮抗非蛋白质编码RNA(lncRNA DANCR)对直肠癌细胞放疗抵抗的影响及其作用的可能机制。方法 选择在我院新辅助治疗的直肠癌患者标本90例,qRT-PCR检测DANCR在直肠癌和癌旁组织中的表达水平,统计学分析DANCR的表达与患者放疗抵抗及临床病理参数的关系,生存分析DANCR的表达对患者预后的影响。常规培养HT29细胞,采用分次放射剂量递增建立HT29放射抵抗细胞株（HT29-R）,MTS检测HT29和HT29-R细胞的放疗敏感性,qRT-PCR检测DANCR在HT29和HT29-R细胞中的表达。HT29-R细胞分为对照组（si-NC组）和干扰DANCR表达组（si-DANCR组）并进行相应siRNA转染,MTS检测干扰DANCR对HT29-R细胞放疗敏感性的影响。si-NC组和si-DANCR组细胞于辐射作用下,平板克隆检测各组细胞平板克隆形成能力,流式细胞仪检测各组细胞周期和细胞凋亡率,western blot检测各组细胞中周期相关蛋白cyclinD1、CDK4、CDK6和凋亡相关蛋白caspase 3、Bcl-2、Bax的表达。〖HTH〗结果 DANCR在直肠癌组织中的表达显著高于在癌旁组织中的表达,DANCR的表达与直肠癌患者TNM分期和放疗敏感性相关(P＜0.05),DANCR高表达的患者预后较差(P＜0.05)。与HT29细胞相比,HT29-R细胞的放射抵抗性增加(P＜0.05),HT29-R细胞中DANCR表达增加(P＜0.05)。干扰DANCR增强HT29-R细胞的放疗敏感性(P＜0.05)。在放射作用下,与si-NC组相比,si-DANCR组HT29-R细胞平板克隆形成能力降低(P＜0.05),细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡率增加(P＜0.05),细胞中周期相关蛋白cyclinD1、CDK4、CDK6表达降低和凋亡相关蛋白caspase 3、Bax表达增加,Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05)。结论 DANCR通过调控细胞周期及凋亡相关蛋白增加直肠癌细胞放疗敏感性,是治疗直肠癌的潜在靶标。     

miR-495 对食管癌细胞株Eca109 在不同放射剂量和顺铂浓度作用的影响及机制研究

目的 探讨微小核糖核酸(microRNA,miR) -495 对食管癌细胞株Eca109 在不同放射剂量和顺铂浓度作用下的影响及机制。方法 采用分次放疗递增法诱导建立放射抵抗型细胞株Eca109（Eca109-RAD）及分次顺铂递增法诱导建立顺铂耐药型细胞株Eca109（Eca109-DDP）,实时荧光定量聚合酶链反应 (qRT-PCR) 检测miR-495 在Eca109-RAD 及Eca109-DDP 细胞中的表达。Eca109-RAD 及Eca109-DDP 分为NC 组和miR-495 mimic 组,转染后qRT-PCR 检测各组细胞中miR-495 的表达,CCK8 检测不同放射剂量对Eca109-RAD 细胞和Eca109 细胞存活能力的影响,及不同浓度的顺铂对Eca109-DDP 细胞和Eca109 细胞存活能力的影响,NC 组和miR-495 mimic 组经放射及顺铂处理后,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,Western blot 检测各组细胞中凋亡相关蛋白caspase 3,Bax 和Bcl-2 蛋白的表达。结果 与Eca109 细胞（0.99±0.01）相比,Eca109-RAD 细胞中miR-495 的表达（0.48±0.03 ）及Eca109-DDP 细胞中miR-495的表达（0.52±0.05）均降低,差异有统计学意义(t=27.930,15.970, 均P=0.000)。与NC 组细胞相比,miR-495 mimic组Eca109-RAD 细胞中miR-495 的表达（4.82±0.48 vs 1.00±0.03）及Eca109-DDP 细胞中miR-495 的表达（5.68±0.54vs 1.00±0.01）均显著增加,差异有统计学意义(t=13.760,15.100, 均P=0.000)。与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞对放疗敏感度增加,差异均有统计学意义(t=6.780 ～ 18.860,P = 0.000 ～ 0.001);与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-DDP 细胞对顺铂敏感度增加,差异均有统计学意义(t=7.510 ～ 21.630,均P=0.000)。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞平板克隆形成能力（46.33±5.69 个vs 93.33±4.51 个）及Eca109-DDP（34.67±2.52 个vs 89.00±4.03 个）细胞平板克隆形成能力显著降低(t=11.210,19.800, 均P=0.000) 。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞凋亡率（25.66%±2.41% vs 8.39%±0.82%）及Eca109-DDP 细胞凋亡率（21.05%±5.37% vs 8.67%±1.15%）均显著增加(t=11.750,10.030,P=0.000,0.001)。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞及Eca109-DDP 细胞中Bcl-2 蛋白表达均降低(t=4.650,7.450,P=0.006,0.001),Bax 和caspase 3 蛋白的表达均增加(t= 7.100 ～ 14.290, P=0.000 ～ 0.001)。结论 MiR-495 可能通过调控凋亡相关蛋白促进食管癌细胞放化疗敏感度。     

介入放射学诊疗技术准入的基本要求

介入放射学是指在X线透视指导下，经皮针穿刺或导入导管进行抽吸注射、引流或对管腔、血管等做成型、灌注、栓塞等以诊断与治疗疾病的技术。介入放射学的出现给人们带来了巨大的效益，但其操作过程中会对医生和患者造成辐射危害。为了实现使用该项医用辐射的正当化和实践的最优化，降低辐射危害，笔者受卫生部委托于2006年8月立项，2008年8月完成了此项基本要求的编制工作。现对基本要求中介入放射学场所的要求以及介入X射线设备的要求这两个重要部分的标准内容做一介绍。     

LINC01503 调控ERK 磷酸化促进食管鳞状细胞癌放疗抵抗的机制研究

目的 探究长链非编码核糖核酸 (LncRNA) LINC01503调控细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）通路磷酸化促进食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）放疗抵抗的作用机制。方法 收集 2014年 6月～2017年 12月内蒙古自治区人民医院 ESCC患者癌组织及癌旁组织标本 79例,采用实时荧光定量 PCR检测 LINC01503在 ESCC组织中的表达水平,分析 LINC01503与 ESCC患者临床病理参数、放疗敏感性及预后的关系。构建 ESCC放疗抵抗细胞株 KYSE150R,检测 KYSE150R细胞中 LINC01503的表达;转染 siRNA下调 KYSE150R中 LINC01503的表达。 CCK8实验检测各组细胞放疗敏感性;流式细胞试验检测各组细胞周期和细胞凋亡;Western blot检测各组细胞中 ERK1/2,PERK1/2,细胞周期蛋白 D1（cyclin D1）,细胞周期素依赖性激酶 4（cyclin dependent kinase 4,CDK4）,凋亡蛋白 Bcl-2和 Bax蛋白表达。结果 与癌旁组织相比, LINC01503在 ESCC组织中表达上调（4.15±1.21 vs 0.96±0.43）,差异有统计学意义（t=22.083,P<0.001）。LINC01503高表达与患者 T分期、淋巴结转移、 TNM分期、放疗抵抗有关,差异均有统计学意义（t=2.322～2.939,均 P<0.05）。LINC01503预测预后的曲线下面积为 0.780（95%CI:0.676～0.884）,灵敏度和特异度分别为 81.58%,67.05%。LINC01503高表达组 5年生存率低于 LINC01503低表达组 [41.86%（18/43）vs 63.89%（23/36）],差异有统计学意义（χ2=4.430,P=0.035）。与 si-NC组相比, si-LINC01503组 KYSE150R细胞的放疗敏感性增加,差异均有统计学意义（t=17.391～33.692,均 P<0.001）;si-LINC01503组 KYSE150R细胞周期阻滞在 G0/G1期（61.47%±3.60% vs 52.15%±2.11%）,细胞凋亡增加（31.95%±2.40% vs 3.68%±0.47%）,差异均有统计学意义（t=4.602,20.022;P=0.004, 0.002）;PERK1/2（0.24±0.03 vs 1.25±0.09）,cyclin D1（0.18±0.06 vs 1.40±0.14）,CDK4（0.87±0.09 vs 1.37±0.16）和 Bcl-2（0.16±0.03 vs 0.85±0.07）蛋白表达降低, Bax蛋白表达增加（0.69±0.06 vs 0.22±0.05）,差异均有统计学意义（t=4.718～18.440,均 P<0.05）。结论 LINC01503通过促进 ERK磷酸化调控细胞周期和凋亡促进 ESCC细胞放疗抵抗,是逆转 ESCC放疗抵抗的潜在分子靶点。     

某化工厂加氢裂化装置职业卫生学调查分析

目的：识别、评价、控制生产过程中产生的职业病危害因素。方法：依据《建设项目职业病危害评价规范》,采用现场调查法、检查表法和检测检验法对该厂的职业病危害因素及防护效果进行评价。结果：该厂作业场所主要存在硫化氢、石油气、汽油、噪声等职业病危害因素。各岗位硫化氢〈0．03mg／m^3,液化石油气最高值〈663mg／m^3,汽油最高值〈131mg／m^3,噪声介于61．0～88．6dB（A）之间。结论：该厂职业病有害因素职业病防护设施合理,各岗位职业病有害因素浓（强）度均符合国家标准要求。