丙型肝炎病毒结构基因转基因小鼠模型的建立

目的建立丙型肝炎病毒(HCV)转基因小鼠模型，探讨丙型肝炎发病机制，研究HCV结构蛋白编码基因的功能与致病作用。方法采用长片段聚合酶链反应技术扩增HCV结构基因，构建稳定表达与诱导表达两种真核细胞表达重组体，经体外细胞转染后，将具有表达功能的线性化表达元件采用显微注射法，直接导入1736枚小鼠受精卵，先后移入69只假孕母鼠输卵管。结果妊娠受体25只，产仔105只，成活57只。注射卵成仔率仅3．28％。经聚合酶链反应扩增、测序、酶切及Southern杂交鉴定，获阳性首建鼠26只，注射卵首建鼠成功率仅1．50％。其中稳定表达型10只，诱导表达型16只。经与正常鼠交配，获F1阳性杂合鼠分别38只、20只。一个纯合子品系。结论研究建立了稳定表达与诱导表达两类HCV结构基因转基因小鼠，为进一步研究HCV致病机制，HCV基因功能奠定了基础。     

应用氯化锶对小鼠卵母细胞孤雌活化的研究

根据弓形虫P30基因序列设计二对引物分别进行了PCR一次扩增和套式扩增，结果这两对引物在一次扩增和套式扩增中分别出现预期的扩增片段914bp,522bp和522bp；套式扩增出现的条带比一产供销扩增出现的条带亮度明显增强，提示套式扩增比一次扩增具有更高的敏感性，用外引物进行扩增后，最低可以检测到1pg的弓形虫DNA，说明所建立的反应体系具有高度的敏感性。用内引物对人工感染弓形虫的ICR小鼠血液，组织进行弓形虫DNA的检测，结果均扩增出522bp的扩增带。根据B1基因序列设计的弓物进行PCR一次扩增和半套式扩增。结果均出现预期的扩增片段619bp,362bp和362bp；用半套式扩增检测感染弓形虫形虫的ICR小鼠血液，组织时可扩增出522bp的619bp,362bp和362bp；用半套式扩增检测感染弓形虫的ICR小鼠血液，组织时可扩增出522bp的扩增带，半套式扩增比一次扩增更敏感。     

突变靶基因xylE转基因小鼠

本研究以ｐＥＳｎｘ穿梭质粒为载体，选用恶臭假单孢杆菌ＴＯＬ质粒上的ｘｙｌＥ基因作为突变靶基因组构建的重组构件，经微注射导入ＩＣＲ小鼠５４９枚受精卵雄原核，将存活的３５２枚卵移入２４只假孕鼠输卵管内，７只妊娠，共产仔４１只，其中７只死胎，出生后死亡４只，３０只存活。注射卵存活率为６４％（３５２／５４９），出生率为１１．６％（４１／３５２）。存活鼠经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测，整合率为５７％（１７／３０）。在整合阳性鼠中选择了杂交信号较强的２只当代公鼠，通过回收载体和转化试验，结果表明整合基因完整，具有转化的功能，由此，建立了突变靶基因ｘｙｌＥ转基因小鼠模型。     

阿托品对房颤冷冻消融患者迷走反射的预防作用

目的 探讨阿托品对房颤冷冻消融患者术中及术后血管迷走反射的预防作用.方法 回顾性分析2016年1月至2017年1月在我院行经皮心脏冷冻消融术患者240例的临床资料,根据术中有无应用阿托品分为阿托品组(n=153)和非阿托品组(n=87),比较两组迷走反射发生率.结果 阿托品组发生血管迷走反射3例((发生率2%),非阿托品组发生10例(发生率11.4%).两组迷走反射的发生率差异有显著性(χ2=9.839,P<0.05).结论 术中静脉应用阿托品对迷走反射发生有明显的预防作用,能有效减少术中及术后血管迷走反射发生率.     

苯对健康危害研究的若干动态

苯对人体健康危害的研究一直是职业卫生工作者长期关注的课题 ,本文拟对近年来有关苯对人体健康危害的研究某些动态作一简要介绍。1　苯毒性易感体质的研究虽然苯是强的血液毒性物质和致癌物 ,但在同等浓度接触的情况下 ,接触者对苯毒性的反应不一[1-3 ] 。Ｒｏｔｈｍａｎ应用病例-对照研究方法 ,选择了职业性苯中毒患者 5 0例及对照者 5 0例 ,检测他们对苯及其代谢物的某些激活酶 (如ＣＹＰ2ＥＩ和ＮＯＩ)的个体差异。他用ＰＣＲ ＲＥＬＰ确定ＣＰＰ2ＥＩＮＱＯＩ的基因型用Ｃｈｌｏｒｚｏｘａｚｏｎｅ的间歇型分泌速率ｆｅｂ ｃｈ来估计Ｌ…     

乙型肝炎病毒X基因转基因小鼠的初步建立

HBx基因为HBV基因组上的一个开放读框,可编码具有转录反式激活作用的蛋白(HBxAg).已证实在体外HBxAg可使哺乳细胞株发生恶性转化[1].为了探索在体内HBxAg转化细胞的作用,国外数个实验室已相继建立了HBx转基因鼠模型[2,3].为研究HBx基因在肝细胞癌变过程中的确切作用提供有效的动物模型,我们初步建立了携带乙型肝炎病毒X基因的转基因小鼠,现报道如下.     

利用五特征转基因小鼠制备全人源血管内皮生长因子165单克隆抗体

目的： 利用转入人免疫球蛋白基因的五特征小鼠制备全人源血管内皮生长因子165（VEGF_165）单克隆抗体,并初步探讨该单抗的抗肿瘤活性。方法： 采用常规杂交瘤细胞融合技术,利用间接ELISA效价测定方法筛选能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株;比较了五特征小鼠和BALB/c小鼠的免疫效果;亲和色谱法从腹水中纯化单抗;利用分泌VEGF的人膀胱癌细胞系T24细胞考察单抗的体外抗肿瘤活性。结果： 成功获得了4株能稳定分泌表达单抗的杂交瘤细胞株（V₂,V₅₀,V₇₁,V₇₅）,建立了间接ELISA效价测定方法,发现同样方法免疫的BALB/c鼠血清效价约为五特征小鼠的10倍。采用甘露糖结合蛋白（MBP）亲和色谱柱从腹水中获得了纯化的单抗样品,经SDS-PAGE和Western blotting检测,证实该单抗为全人源VEGF₁₆₅IgM单抗。体外抗肿瘤活性结果显示,V₂、V₇₅单抗对人类膀胱癌细胞系T24细胞的增殖有较好的抑制作用。结论： 可利用五特征小鼠制备全人源抗VEGF₁₆₅单抗,该单抗具有潜在的抗肿瘤活性。     

肝细胞生长因子/转化生长因子-β1对人心房成纤维细胞增殖的作用

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)在体外培养的人心房成纤维细胞增殖中的作用,观察HGF对人心房成纤维细胞TGF-β_1表达的影响。方法入选福建省立医院心血管外科接受换瓣手术的风湿性心脏病(RHD)患者20例,其中窦性心律(SR)者和慢性心房颤动(CAF)者各10例,分别作为SR组和CAF组。记录患者左心房内径(LAD)。换瓣术中无菌条件下取适量右心耳组织,人心房成纤维细胞原代培养。水溶性磷酸化四唑盐-1(WST-1)比色法检测HGF和TGF-β_1在不同浓度(HGF:25,50,100,200 ng/ml;TGF-β_1:0.1,1,10,100 ng/ml)和不同时间(12,24,48,72h)对人心房成纤维细胞增殖的影响。检测HGF/TGF-β_1对人心房成纤维细胞增殖的影响。半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测心房成纤维细胞TGF-β_1 mRNA水平,分为3组:SR组、CAF组和HGF干预组(CAF组中再加入100 ng/ml HGF干预48 h)。采用SPSS 19.0软件进行数据处理。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果 CAF组患者的LAD显著高于SR组[(5.76±1.37)vs(4.43±0.77)cm]。HGF和TGF-β_1对人心房成纤维细胞的增殖分别具有抑制和促进作用,且与剂量(r_(HGF)=-0.686;r_(TGF-β_1)=0.655)和时间(r_(HGF)=0.557;r_(TGF-β_1)=0.840)显著相关(P0.05),其中:100 ng/ml HGF作用48 h抑制作用最显著;10 ng/ml TGF-β_1作用48 h促进作用最显著。HGF/TGF-β_1对人心房成纤维细胞增殖具有抑制作用。与CAF组相比(1.78±0.98),SR组(0.92±0.66)和HGF干预组(0.67±0.64)的TGF-β_1 mRNA表达水平均显著减少,差异具有统计学意义(P0.01)。结论 CAF患者LAD增大,TGF-β_1分泌增多。HGF能够抑制人心房成纤维细胞TGF-β_1的生成,部分拮抗TGF-β_1促增殖作用。     

携带xylE的转基因小鼠的制备

建立了一种新的转基因小鼠致突变检测模型．选用ｘｙｌＥ基因作为诱变的靶基因,以ｐＥＳｎｘ穿梭质粒作为载体,通过显微注射法将线状ｐＥＳｎｘ导入ＩＣＲ小鼠制备Ｇ０小鼠．将显微注射后存活的３５２／５４９枚受精卵分别移入２４只受体雌鼠的输卵管中,共产生４１只仔鼠,存活３０只（Ｇ０）,经过整合检测,检测出转基因小鼠１７只,阳性率为５７％．从中筛选出２只完整整合了ｐＥＳｎｘ的转基因小鼠作为首建鼠（ｆｏｕｎｄｅｒｍｏｕｓｅ）进行繁育,目前已繁殖到第三代（Ｇ３）．经过逐代整合检测,证明转入的基因可稳定地遗传．上述结果表明已成功地制备了在基因组中整合了ｐＥＳｎｘ质粒携带ｘｙｌＥ的转基因小鼠．