TSC1基因对调节性T细胞发育分化的免疫调控作用

【目的】 本研究利用TSC1的T细胞特异缺失小鼠探讨TSC1对T细胞尤其是调节性T细胞(Treg)发育的免疫调控效应。 【方法】 主要应用T细胞特异性TSC1基因敲除小鼠(Lck-cre; TSC1loxp/loxp)及细胞分子免疫学技术, 阐明TSC1基因对CD4⁺ Treg发育分化及其免疫功能的重要调控作用和规律。 【结果】 (1)TSC1基因缺失小鼠,其胸腺CD4⁺CD8^-T (CD4SP),CD8⁺CD4^-T(CD8SP),CD4^-CD8^-T(DN)和CD4⁺CD8⁺T(DP)细胞百分率无显著差异;(2)TSC1基因缺失小鼠CD4⁺Foxp3⁺Tregs百分率和细胞绝对数均明显增加;(3)小鼠外周免疫器官(脾脏)的CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺T细胞百分率和绝对数均无显著差异;(4)小鼠胸腺中CD4⁺CD25⁺Foxp3^-T细胞百分率和绝对数有下降的趋势;(5)小鼠胸腺中Treg其他亚型如CTLA-4以及GITR型均有所增加。 【结论】 TSC1缺失可以影响nTreg的发育和分化,而对iTreg发育和分化无明显影响,并且TSC1对于nTreg的调节可能是通过调控其前体发育分化而实现的。     

人参皂苷Rg1对Aβ1-40致AD模型大鼠行为学及caspase-3表达的影响

【目的】 观察人参皂苷Rg1对Aβ-淀粉样蛋白1-40致阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠学习记忆能力的影响及对caspase-3表达的调控作用,探究人参皂苷Rg1对海马CA1区神经元凋亡的防护作用。 【方法】 选取3个月龄健康SD大鼠75只,随机分为青年组、假手术组、模型组、人参皂苷Rg1干预组[模型+人参皂苷Rg1 20 mg/(kg·d)剂量组和模型+人参皂苷Rg1 40 mg/(kg·d)剂量组],每组15只。D-半乳糖50 mg/kg大鼠腹腔注射,连续注射6周后,依照Paxions《大鼠脑立体定位图谱》,在海马区注入凝聚态Aβ1-40溶液1 μL制作AD模型。造模成功后,人参皂苷Rg1干预组分别给予人参皂苷Rg1 20、40 mg/(kg·d)灌胃,其它三组以等量生理盐水灌胃(1次/d),连续30 d后利用Morris水迷宫观察人参皂苷Rg1对AD大鼠学习记忆能力的影响;断头取海马,应用H-E染色法观察海马CA1区病理学改变;应用RT-PCR、免疫组化(SABC)和蛋白质印迹法检测caspase-3基因及蛋白表达情况。 【结果】 (1)人参皂苷Rg1干预组大鼠的学习记忆成绩优于模型组(P<0.05);(2)模型组海马CA1区神经元排列欠规则,可见肿胀的细胞,出现核固缩,锥体细胞较少,可见凋亡小体。人参皂苷Rg1干预组可见细胞排列基本规则,明显坏死的锥体细胞较少;(3)与青年组比较,模型组大鼠海马组织caspase-3基因及蛋白表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,Rg1干预组大鼠的caspase-3基因及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。 【结论】 人参皂苷Rg1通过抑制caspase-3的表达,从而抑制Aβ1-40致AD模型大鼠神经元凋亡,进而改善AD大鼠学习记忆能力,达到防治AD的目的。     

黄芪多糖干预环磷酰胺所致免疫抑制小鼠的免疫功能

目的 探讨黄芪多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用,并建立一套可行的多糖类物质免疫调控指标与评价体系。方法 运用黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)分别处理正常及环磷酰胺(Cytoxan,CTX)致免疫抑制模型小鼠,通过测定其胸腺和脾脏指数、腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数,并对小鼠胸腺和脾脏的组织发育情况进行观察;结合流式细胞术检测了各组小鼠外周血T淋巴细胞亚群(CD3⁺、CD4⁺和CD8⁺)百分含量的变化。结果 黄芪多糖能显著促进正常小鼠及免疫抑制小鼠的免疫器官增重,增大其脾脏和胸腺器官指数;组织学观察结果也显示黄芪多糖可以促进正常小鼠脾脏和胸腺的组织发育,并能改善CTX所致的小鼠脾脏和胸腺组织发育损伤。黄芪多糖可提高正常小鼠及免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率及吞噬指数,并可明显提高正常及免疫抑制小鼠外周血血清中CD3⁺、CD4⁺和CD4⁺/CD8⁺比值,降低CD8⁺百分含量(P<0.05或P<0.01)。结论 黄芪多糖可提高小鼠机体的免疫机能,并建立了较为全面的多糖类物质免疫调控评价指标。     

扶正胶囊提取物对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠免疫调节作用研究

[目的] 探讨扶正胶囊提取物对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用。[方法] 将60只昆明小鼠进行随机分组,每组10只,分为空白组、模型组、阳性对照组以及扶正胶囊提取物低、中、高剂量组。采用环磷酰胺腹腔注射建立小鼠免疫功能低下模型,检测各组小鼠的胸腺指数和脾脏指数、单核细胞吞噬能力、血清中白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素10（IL-10）、白细胞介素-17（IL-17）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）水平和脾T淋巴细胞亚群CD3⁺T淋巴细胞（CD3⁺）、CD4⁺T淋巴细胞（CD4⁺）、CD8⁺T淋巴细胞（CD8⁺）的分布与比例。[结果] 扶正胶囊提取物能提升由环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠的胸腺指数和脾脏指数,增强单核细胞吞噬功能,显著提高小鼠细胞免疫因子IL-4、IL-10、IFN-γ含量,降低IL-17、TNF-α含量,上调脾淋巴细胞亚群CD3⁺CD4⁺的表达程度和提升CD3⁺CD4⁺/CD3⁺CD8⁺比值。[结论] 扶正胶囊提取物能够提升环磷酰胺所致的免疫抑制小鼠的免疫功能。     

自体DC-CIK细胞治疗晚期肺癌患者前后T淋巴细胞亚群表面分子的表达

目的 探讨自体DC-CIK细胞治疗晚期肺癌患者前后T淋巴细胞亚群表面分子表达情况.方法 抽取63例肺癌晚期患者的外周血分离获得外周血单个核细胞(PBMC),将与患者病理分类相同的肺癌细胞株经反复冻融处理获得可溶性抗原,制备肿瘤相关抗原肽负载DC-CIK细胞,并进行质量控制后回输.应用流式细胞术检测DC-CIK细胞治疗晚期肺癌患者前后T淋巴细胞表面CD3⁺HLA-DR⁺、CD3⁺CD25⁺、CD3⁺CD4⁺CD25⁺、CD3⁺CD8⁺HLA-DR⁺、CD3⁺CD8⁺CD38⁺细胞百分比及对比治疗前后表达情况.结果 成功获得成熟DC细胞,流式细胞术检测证实DC细胞成熟的标志分子CD11c、CD83、CD86及HLA-DR的表达均较高,分别为51.6%±10.3%、50.8%±9.7%、48.9%±11.4%、61.2%±6.5%;成功获得CIK细胞细胞,流式细胞术结果显示,CD3+CD56+双阳性细胞比例占21.3%±7.6%.与治疗前相比,DC-CIK细胞治疗后CD3⁺HLA-DR⁺(12.71±1.54 vs 11.44±4.13,P<0.05)、CD3⁺CD8⁺HLA-DR⁺(7.48±1.01 vs 5.20±1.01,P<0.01)、CD3⁺CD8⁺CD38⁺(8.27±1.71 vs 6.47±1.99,P<0.01)表达明显升高,CD3⁺CD4⁺CD25⁺(5.38±1.47 vs 6.12±0.67,P<0.05)表达明显降低.结论 采用自体DC-CIK免疫细胞治疗晚期肺癌可以明显提高患者免疫力.     

急性髓系白血病患者外周血T淋巴细胞亚群的水平变化及临床意义

目的 检测急性髓系白血病（AML）患者外周血T淋巴细胞亚群水平的变化,并探讨其临床意义。方法 选择68例初诊AML患者及76例健康体检者（健康对照组）作为研究对象。根据《成人急性髓系白血病（非急性早幼粒细胞白血病）中国诊疗指南（2017年版）》对AML患者进行预后危险度分层,将患者分为高危组（20例）和非高危组（48例）。经标准化学治疗方案治疗后对AML患者进行疗效评价。采集AML患者及健康体检者外周血,用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的水平。结果 AML患者外周血T淋巴细胞CD3⁺细胞比例、CD4⁺细胞比例及CD4⁺/CD8⁺细胞比值均低于健康对照组（P均<0.05）,调节性T淋巴细胞（Treg细胞）比例高于健康对照组（P<0.05）。与非高危AML患者比较,高危AML患者外周血T淋巴细胞CD3⁺细胞比例、CD4⁺细胞比例及CD4⁺/CD8⁺细胞比值均降低（P均<0.05）,Treg细胞比例升高（P<0.05）。与未获得完全缓解的AML患者（27例）比较,获得完全缓解的AML患者（41例）外周血T淋巴细胞CD3⁺细胞比例、CD4⁺细胞比例及CD4⁺/CD8⁺细胞比值均升高（P均<0.05）,Treg细胞比例降低（P<0.05）。结论 观察AML患者T淋巴细胞亚群及CD4⁺/CD8⁺细胞比值变化有助于监测AML患者的病情。     

HIV/AIDS患者CD4+T淋巴细胞检测结果与抗病毒治疗效果

目的 探讨某地区HIV/AIDS患者CD4⁺T淋巴细胞检测结果与抗病毒治疗效果,同时进行相关性分析。方法 2013年2月~2016年1月选择在笔者医院诊治的HIV/AIDS患者60例作为观察组,同期选择在笔者医院进行健康体检的健康人60例作为对照组,观察组都给予HAART标准治疗方案,观察组在治疗前后、对照组在入院时都进行CD4⁺T淋巴细胞与细胞因子表达的检测。结果 观察组外周血的CD4⁺CD45RA⁺、CD4⁺CD28⁺、CD4⁺CD45RO⁺的细胞比例明显低于对照组（P<0.05）,两组CD4⁺CD25⁺的细胞比例对比,差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组相比,观察组的血浆IL-10和TGF-β1含量都显著升高（P<0.05）。治疗后观察组的CD4⁺CD45RA⁺、CD4⁺CD28⁺、CD4⁺CD45RO⁺的细胞比例都明显上升（P<0.05）,而血浆IL-10和TGF-β1含量明显降低（P<0.05）。在观察组中,Spearman秩相关分析显示CD4⁺CD45RA⁺、CD4⁺CD28⁺、CD4⁺CD45RO⁺的细胞比例与IL-10、TGF-β1水平均呈负相关（P<0.05）。结论 HIV/AIDS患者只有较低的免疫功能,具有较低的CD4⁺T淋巴细胞亚群比例和较高的IL-10和TGF-β1水平,HAART治疗能改善免疫功能,为此通过CD4⁺T淋巴细胞就能判断HIV/AIDS患者的治疗效果和病情。     

注射用黄芪多糖对Ⅱ-Ⅲ期非小细胞肺癌放疗患者免疫功能的影响

目的 观察注射用黄芪多糖对Ⅱ-Ⅲ期非小细胞肺癌放疗患者细胞免疫功能的影响。方法 采用随机分组方法将30例Ⅱ-Ⅲ期非小细胞肺癌放疗患者分为对照组 (单纯放疗组) 和治疗组 (联合注射用黄芪多糖) 各 15 例,并观察两组治疗前后患者外周血T淋巴细胞亚群 (CD4⁺、CD8⁺)、CD4⁺/CD8⁺ 和 NK 淋巴细胞的变化情况。结果 对照组放疗后 CD8⁺ 细胞和 NK 淋巴细胞比例较放疗前轻微增加,其他检测指标较放疗前均略下降,差异无显著性 (P＞0.05)。而治疗组治疗后 CD3⁺、CD4⁺、NK 淋巴细胞比例、CD4⁺/CD8⁺值明显提高,并明显高于治疗前和对照组 (P＜0.01)。结论 注射用黄芪多糖可明显改善Ⅱ-Ⅲ期非小细胞肺癌放疗患者的细胞免疫功能。     

补阳还五汤对高血压前期大鼠T淋巴细胞亚群的影响

[目的]通过观察补阳还五汤对高盐所致高血压前期大鼠T淋巴细胞亚群比例及γ-干扰素（INF-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,探讨补阳还五汤在调节高血压前期T细胞免疫中的作用机制。[方法]选取7周龄盐敏感大鼠（DS）与盐抵抗大鼠（SS）各20只,SS大鼠随机分为正常组和正常给药组,DS大鼠随机分为模型组和治疗组。各组大鼠适应性喂养后,改用高盐饲料喂养,同时监测大鼠尾动脉收缩压,待其血压值升高至120~139/80~89 mmHg （1 mmHg=0.133 kPa）这一范围时,确定为高血压前期大鼠模型,并以补阳还五汤灌胃治疗。治疗结束后大鼠腹主动脉取血,以流式细胞术检测全血中T淋巴细胞CD4⁺与CD8⁺的百分率,并计算CD4⁺/CD8⁺的比值。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测血清中INF-γ、TNF-α的含量。[结果]补阳还五汤可以下调CD4⁺T淋巴细胞及CD8⁺T淋巴细胞百分率,上调CD4⁺/CD8⁺的比值,降低TNF-α、INF-γ的含量。[结论]补阳还五汤可能是通过下调CD4⁺T淋巴细胞与CD8⁺T淋巴细胞的百分率以及INF-γ、TNF-α细胞因子的表达,改善高血压前期机体T细胞免疫功能及其炎症反应,延缓高血压前期的发展进程。     

三七皂苷单体Rg1对D-半乳糖模型鼠学习记忆和免疫功能的影响

目的 :探讨三七皂苷单体 Rg1对 D-半乳糖 ( D- gal)所致衰老模型鼠学习记忆行为和免疫功能的影响。方法 :Balb/c小鼠随机分为 4组 :衰老模型组、正常对照组、实验 组和实验 组。应用跳台和 Y-型迷路方法测定 D-半乳糖衰老模型鼠学习记忆行为 ;采用 3 H- Td R掺入法测定小鼠胸腺、脾细胞的增殖能力 ;生物活性检测法测定 IL- 2和 TNF- α水平的变化。结果 :三七皂苷单体 Rg1能明显提高衰老模型鼠对电刺激的逃避能力 ,改善 D- gal所致学习记忆能力下降。同时三七皂苷Rg1能明显增强衰老模型鼠胸腺和脾细胞增殖能力 ,对 IL- 2水平有所提高 ,血清 TNF- α的细胞毒作用较模型组降低。结论 :三七皂苷单体 Rg1能改善衰老模型鼠学习记忆能力并调节免疫功能。     

人参皂苷Rb1对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及凋亡的影响

目的 研究人参皂苷Rb₁对小鼠T淋巴细胞体外活化及增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法 分离制备小鼠淋巴结细胞悬液;以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测在刀豆蛋白A（ConA）的刺激下,人参皂苷Rb₁对早期活化标志CD3/CD69和调节T淋巴细胞标志CD4/CD25表达的影响;用羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色结合流式细胞术和MTT法检测在ConA的刺激下,人参皂苷Rb₁对T淋巴细胞增殖的影响;DIOC/PI双染技术检测在H₂O₂作用下,人参皂苷Rb₁对淋巴细胞凋亡进程的影响。结果 终浓度为5、10、20 μmol/L的人参皂苷Rb₁对ConA刺激的调节T淋巴细胞CD4^＋/CD25^＋的表达具有促进作用,而CD3^＋/CD69^＋的表达明显下调（P＜0.01）;对ConA刺激的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用（P＜0.05）,且呈剂量依赖性;人参皂苷Rb₁显著抑制H₂O₂诱导的淋巴细胞的凋亡进程（P＜0.05）。结论 人参皂苷Rb₁对小鼠淋巴细胞的体外活化及增殖均具有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。     

七叶皂苷钠抑制人白血病Jurkat细胞增殖的机制研究

目的 研究七叶皂苷钠抑制人白血病Jurkat细胞增殖的作用及其机制。方法 MTT法分析七叶皂苷钠对Jurkat细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33258染色、FITC-Annexin V/PI双染、DNA Ladder、流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blotting法分析凋亡相关蛋白变化。结果 七叶皂苷钠呈质量浓度和时间相关方式抑制Jurkat细胞增殖;经七叶皂苷钠处理后的Jurkat细胞出现凋亡的形态学特征、DNA条带,Annexin V⁺/PI^?细胞（早期凋亡细胞）显著增加;七叶皂苷钠可活化Jurkat细胞中Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3,引起PARP的切割,并减少Bcl-2蛋白的表达。结论 七叶皂苷钠能有效地通过诱导细胞凋亡抑制Jurkat细胞增殖。     

高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1与黄芩苷在细胞培养基中的含量变化

[目的]研究细胞培养基中人参皂苷Rg1和黄芩苷稳定性问题。[方法]采用高效液相色谱法测定细胞培养基中人参皂苷Rg1和黄芩苷的含量。[结果]人参皂苷Rg1和黄芩苷的线性范围均为20～400ng,方法回收率分别为96.8%和97.7%。[结论]该法简便、灵敏、特异,适用于细胞培养基中人参皂苷Rg1和黄芩苷的测定。     

天然药物抗肿瘤的全新概念--氧化剂与抗氧化剂的协同作用

【立论依据】 肿瘤与机体免疫系统之间存在着相互作用,肿瘤细胞以多种方式逃逸机体免疫或抑制相关免疫细胞功能。免疫系统抗肿瘤的作用主要是细胞免疫,其中又以T细胞为主,CD4⁺T细胞分泌的细胞因子以及CD8⁺T细胞释放的穿透素等,都具有杀灭肿瘤细胞的作用。但是,不论是CD4或CD8细胞的活化,均需要以树突状细胞(dendritic cells,DC)为代表的抗原提呈细胞的激活。DC细胞的激活,需要有氧化剂的共刺激,适当的氧化应激反应的自由基,帮助T效应细胞的激活,但是过量的自由基反而诱导T细胞的凋亡,即所谓T细胞的氧化筛选过程。因而足量有效的抗氧化剂,保护T细胞的存活,提供存活信号(survival signal),使被DC细胞激活了的特异性杀灭肿瘤的T细胞,得以激活并存活增殖。 【设计思路】 按照工艺流程对芥菜籽的有效成分进行提取,并通过实验进行功能鉴定;在提纯物功能鉴定的基础上,对提纯物进行进一步的配伍;通过二甲基肼(dimethyl hydrazine, DMH)诱导构建wilstar大鼠结直肠癌模型,验证氧化剂和抗氧化剂协同抗肿瘤的概念,探究不同配伍对结直肠肿瘤的预防作用机制。 【实验内容】 (1)芥菜籽有效成分提取;(2)芥菜籽有效成分功能鉴定;(3)对提纯物进行进一步的配伍;(4)DMH诱导构建Wilstar大鼠结直肠癌模型;(5)探究不同配伍对结直肠肿瘤的预防作用机制。 【材料】 Wilstar大鼠、白芥籽、二甲基肼、0.9%NaCl溶液、乙醚、酒精、流式细胞检测试剂盒。 【可行性】 (1)理论层面,肿瘤细胞普遍存在特异性标志物,通过分析白芥子不同组分对免疫应答调控的不同环节作用,发现氧化剂和抗氧化剂对识别和提呈肿瘤细胞特异性抗原,以及激活免疫效应细胞(T细胞等)以期最后杀灭肿瘤细胞,具有重要协同作用。(2)技术层面,已经建立了完整的药物纯化和筛选的技术和装备,其中包括动物模型的建立,现代化免疫指标观察例如多道流式细胞仪方法观察免疫细胞的分类、激活,Luminex大规模检测免疫细胞因子确证免疫系统Th1和Th2漂移,以及病理、免疫组化等手段确定药物效果。(3)人员配置,课题指导教师已经发表前期工作SCI论文2篇、中文相关论文5篇,在抗氧化、抗肿瘤方面的研究有20余年的工作经验,可望能够顺利完成预定工作目标。 【创新性】 本研究的特点是应用现代免疫学研究方法,结合生物化学的基本研究手段,从机制上发现天然药物预防肿瘤的细胞和分子生物学原理。结合肿瘤研究经典模型验证其效果,对实现中医药现代化转变具有重要的理论和临床应用价值。     

胸腺五肽对新辅助化疗的乳腺癌患者局部组织中浸润淋巴细胞的影响

目的 探讨胸腺五肽对新辅助化疗的乳腺癌组织微环境中浸润淋巴细胞的影响。方法 自2012年1月~2014年1月,前瞻性收集笔者医院收治的接受新辅助化疗的乳腺癌患者80例,将患者随机分为研究组和对照组,所有患者均行新辅助化疗,研究组在新辅助化疗期间给予胸腺五肽,化疗结束后进行手术切除肿瘤组织,留取乳腺癌组织标本,观察乳腺癌组织中和外周血中CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺T细胞比例、外周血中IL-6、IL-10、TGF-β1水平。结果 与对照组比较,研究组患者乳腺癌组织中CD4⁺T细胞显著降低（21.47%±3.29% vs 23.88%±3.43%,P=0.002）;CD8⁺T细胞显著增高（30.36%±4.38% vs 28.43%±4.16%,P=0.047）;CD4⁺/CD8⁺T细胞显著降低（0.71±0.14 vs 0.84±0.18,P=0.001）。两组患者治疗前外周血CD4⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺T细胞、IL-6、IL-10、TGF-β1等比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,研究组患者术后外周血CD4⁺T细胞水平显著增加（27.67%±4.24% vs 25.09%±3.68%,P=0.005）;CD4⁺/CD8⁺T显著增加（0.83±0.14 vs 0.75±0.18,P=0.029）;IL-6水平显著增高（12.39±2.87 vs 9.24±3.38ng/L,P=0.000）;IL-10水平显著降低（8.49±2.59 vs 12.59±3.65ng/L,P=0.006）;TGF-β1水平显著降低（12.47±3.88 vs 17.76±4.12ng/ml,P=0.000）。两组患者住院时间、切口感染、手术部位出血、复发率和病死率等比较,差异均无统计学意义（P > 0.05）。结论 胸腺五肽联合新辅助化疗可能有助于改善乳腺癌组织微环境中免疫状态和全身免疫功能。     

幼儿贫血患者的调节T细胞表达及临床预后相关性研究

[目的]探讨调节性T细胞在幼儿贫血中的表达及临床预后价值。[方法]选择2016年3月-2017年3月天津市儿童医院治疗的贫血患儿80例作为研究对象,设为观察组;根据贫血严重程度分为轻度组、中度组与重度组;所有患儿均给予铁剂、维生素及饮食强化治疗。根据治疗预后分为预后良好组与预后差组;选择同期健康体检者56例,设为对照组。采用流式细胞仪完成各组调节性T细胞CD4⁺、CD4⁺CD125⁺、CD4⁺CD125⁺CD127^low水平;采用SPSS Pearson相关性分析软件对调节性T细胞与患儿治疗预后进行相关性分析。[结果]观察组调节性T细胞CD4⁺、CD4⁺CD125⁺、CD4⁺CD125⁺CD127^low百分比,均低于对照组（P<0.05）;观察组贫血患儿中预后良好组CD4⁺、CD4⁺CD125⁺、CD4⁺CD125⁺CD127^low百分比高于预后差组（P<0.05）。[结论]调节性T细胞在幼儿贫血中呈低表达,且与患儿临床预后呈负相关性,加强调节性T细胞测定能评估预后,指导临床治疗。     

D-半乳糖诱导间充质干细胞衰老的研究

目的 利用D-半乳糖诱导建立间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）体外衰老模型,并探讨其潜在机制。方法 以正常培养的MSCs做对照组,以分别用1、10、100g/L D-半乳糖诱导的MSCs作为处理组,培养48h后,采用免疫蛋白印迹法（Western blot）检测细胞内AKT与mTOR蛋白磷酸化水平以及衰老相关蛋白p16^Ink4a的变化。同时使用β-半乳糖苷酶试剂盒检测MSCs中β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）表达量的变化。最后用AKT抑制剂预处理D-半乳糖诱导组以明确AKT/mTOR信号通路在MSCs衰老中的作用。结果 与对照组相比,10g/L D-半乳糖作用48h后MSCs中β-半乳糖苷酶表达和衰老相关蛋白p16^Ink4a含量明显增加,同时p-AKT与p-mTOR含量也较对照组增加,加入AKT抑制剂后,衰老组β-半乳糖苷酶表达和衰老相关蛋白p16^Ink4a含量皆有所下降。结论 D-半乳糖能成功诱导构建MSCs体外衰老模型,AKT/mTOR信号通路参与了这一过程。     

乳腺增生症超声血流与T细胞亚群的相关性

目的 探讨乳腺增生症彩色多普勒超声血流表现与外周血T细胞亚群的相关性。方法 检测83例乳腺增生症患者的超声图像,观察病变区的彩色多普勒血流显像（color doppler flow imaging,CDFI）,测量其最高血流速度Vmax和阻力指数（RI）,应用流式细胞技术检测外周血中T细胞亚群,分别分析超声血流表现与T细胞亚群变化的相关性。结果 乳腺增生症患者有T细胞亚群失调,CD3⁺CD8⁺下降,CD4⁺/CD8⁺上升,CD3⁺CD8⁺与Vmax呈负相关（r=-0.25,P<0.05）;CD3⁺CD8⁺与RI呈负相关（r=-0.547,P<0.01）;CD4⁺/CD8⁺与Vmax呈正相关（r=0.373,P<0.01）;CD4⁺/CD8⁺与RI呈正相关（r=0.464,P<0.01）。结论 对于乳腺增生症患者,超声检测血流,同时检测外周血T细胞亚群的变化,有助于病情的判断。     

移植物细胞组分对异基因造血干细胞移植预后的影响

目的：探讨移植物中单个核细胞（mononuclear cell,MNC）、CD34⁺ 细胞及 T 淋巴细胞亚群剂量对移植后生存的影响。方法：回顾性分析121例行异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT）的血液系统恶性疾病患者,研究回输移植物中MNC、CD34⁺ 细胞、CD3⁺ T细胞、CD4⁺ T细胞、CD8⁺ T细胞、调节性T细胞（regulatory T cell, Treg）剂量及CD4⁺ /CD8⁺ T细胞比值对移植后造血重建及生存的影响。结果：中性粒细胞成功植入120例,高剂量CD34⁺ T细胞 （≥6.90×10⁶ 个/kg）（P < 0.001）、CD3⁺ T细胞（≥6.24×10⁸ 个/kg）（P=0.042）和CD8⁺ T细胞（≥1.05×10⁸ 个/kg）（P=0.021）与中性粒细胞更快植入相关。血小板成功植入119例,高剂量CD34⁺ 细胞与血小板更快植入相关（P=0.001）。53例（43.8%）患者发生急性移植物抗宿主病,28例发生慢性移植物抗宿主病。1年和3年总体生存（overall survival,OS）率为83.5%和68.0%,1年和3年无进展生存（progression-free survival,PFS）率为75.0%和64.4%。单因素分析中,高剂量MNC（≥9.79×10⁸ 个/kg）、高剂量CD3⁺ T细胞和CD4⁺ /CD8⁺ T细胞比值<3.57患者有更好的OS,高剂量MNC患者有更好的PFS（P=0.061）。多因素分析显示,CD4⁺ /CD8⁺ T 细胞比值<3.57患者有更好的OS（HR=0.288,95%CI：0.084~0.988,P=0.048）。1年和3年累积复发率分别为18.2%和26.8%,高剂量MNC和CD8⁺ T细胞患者有更低的累积复发率。结论：移植物细胞组分对异基因造血干细胞移植预后有重要影响,高剂量 CD34⁺ 细胞可促进血小板更快植入,回输移植物中CD4⁺ /CD8⁺ T细胞比值<3.57的患者有更好的OS和更低的累积复发率。     

自体树突状细胞疫苗联合细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胆系肿瘤的临床疗效观察

目的 观察自体树突状细胞(DC)疫苗联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)治疗胆系肿瘤的临床疗效。 方法 采集患者外周血单个核细胞,采用多种肿瘤抗原刺激后进行扩增和培养,收获成熟DC制成疫苗进行皮内注射,同时联合自体CIK细胞静脉回输,观察85例胆系肿瘤患者治疗前后的临床疗效、免疫功能、不良反应及生存时间。 结果 85例胆系肿瘤患者经自体DC-CIK细胞治疗后,临床症状较前明显改善(P <0.05);临床疗效显著,完全缓解2例(2.3%)、部分缓解14例(16.5%)、疾病稳定54例(63.5%)及疾病进展15例(17.6%);免疫功能提高,治疗后淋巴细胞亚群中CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺、CD3⁺CD56⁺及CD4⁺/CD8⁺比值升高,而调节性T细胞降低(P <0.05)。至随访结束,58例患者死亡,2例失访,25例存活,中位生存期为16.5个月(95% CI:12.1~20.9个月)。 结论 自体DC-CIK细胞治疗是胆系肿瘤患者一种安全有效的治疗方法,不良反应少,但相关结论仍有待进一步大样本随机对照研究证实。