炙甘草汤含药血清对兔心肌细胞动作电位的影响

目的:用血清药理学的方法研究炙甘草汤含药血清对兔心肌细胞动作电位的影响。方法:进行单个心室肌细胞的分离和膜片钳全细胞记录,实验分为对照组、空白血清组及5%、10%、20%、40%含药血清组,分别以普通细胞外液及加入上述浓度血清的细胞外液进行灌流,检测各组对动作电位的影响。结果:空白血清组对动作电位各参数均无明显影响(P>0.05);含药血清各组对APA均无明显影响,但可延长APD,5%、10%、20%、40%含药血清分别将APD50从198.8±35.9ms延长至352.7±39.2ms、430.1±28.8ms、521.2±35.3ms、539.3±26.8ms,将APD90从340.1±32.9ms延长至447.1±26.8ms、526.0±39.4ms、595.7±53.3ms、624.3±54.0ms。结论:炙甘草汤含药血清可延长APD,且呈浓度依赖性作用增强,这可能就是炙甘草汤抗心律失常作用的机理之一。     

炙甘草汤含药血清对兔心肌细胞钠电流的影响

目的:用血清药理学的方法研究炙甘草汤含药血清对兔心肌细胞钠通道电流(INa)的影响.方法:进行单个心室肌细胞的分离和膜片钳全细胞记录,实验分为对照组、空白血清组及5%、10%、20%、40%含药血清组,分别以普通细胞外液及加入上述浓度血清的细胞外液进行灌流,检测各组对INa的影响.结果:空白血清组及5%、10%、20%、40%含药血清组INa峰值分别与对照组比较,无明显差异(P>0.05).结论:炙甘草汤含药血清对INa无明显影响.     

炙甘草汤含药血清对大鼠离体心脏场电位影响的研究

目的：研究炙甘草汤含药血清对大鼠离体心室肌场电位的影响。方法：随机将50只SD大鼠分为空白、炙甘草汤不同浓度含药血清（5%、10%、20%）组与胺碘酮组。应用MEA技术监测fAPD及心率的变化。结果：与空白组对照,胺碘酮组fAPD显著延长,心率减慢;10%与20%浓度炙甘草汤含药血清组大鼠心室肌fAPD均延长,心率均减慢,二者比较则fAPD与心率均无统计学差异（P〉0.05）;二者分别与对照组比较,则P〈0.05;5%浓度炙甘草汤含药血清组对心室肌fAPD及心率无明显影响。10%、20%浓度的炙甘草汤含药血清组与胺碘酮组心室肌fAPD相比较,P〈0.05,但心率无统计学差异。结论：10%与20%浓度的炙甘草汤含药血清均能延长心室肌fAPD,心率均减慢,具有抗室性心律失常效应。     

清心安神方含药血清对离体心室肌细胞内向钾电流（Ik1）的影响

目的：观察清心安神方含药血清对豚鼠离体心室肌细胞内向钾电流（Ik1）。方法：分离豚鼠的心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术电流钳模式记录动作电位,观察含40%的空白血清及含药血清的细胞外液灌流对 Ik1的影响。结果：清心安神方含药血清对豚鼠心室肌细胞内向钾电流（Ik1）影响：40%含药血清组对IKl内向电流成分影响为：40%含药血清组从（-30.68±10.39）pA/pF抑制为（-21.03±3.47）pA/pF（n=7 P〈0.05）。结论：清心安神方含药血清对大鼠心室肌细胞IKl内向成份有抑制作用,呈浓度依赖性。     

龟鹿二仙汤含药血清对大鼠成骨细胞细胞周期调控的研究

目的 探讨龟鹿二仙汤含药血清对体外培养SD大鼠成骨细胞（OB）增殖功能以及细胞周期与凋亡的调控作用,分析其防治骨质疏松症的作用机理.方法 采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原同浓度（10％、15％、20％）的龟鹿二仙汤含药血清加入OB培养体系（对照组等量生理盐水灌胃）,培养24、48、72 h,应用MTT比色法来检测其对OB增殖功能的影响.培养72 h后流式细胞仪分析DNA含量,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡.结果 龟鹿二仙汤含药血清对OB的增殖作用呈浓度依赖性,在培养72 h后显著促进其增殖作用.DNA含量分析显示,含药血清组的S期和G2/M期细胞百分率比对照组明显增加,龟鹿二仙汤含药血清对OB具有抗凋亡作用,高浓度组作用最显著.结论 龟鹿二仙汤含药血清对体外培养SD大鼠OB增殖具显著作用且呈浓度依赖性,在体外可抑制OB凋亡从而治疗骨质疏松.     

桂枝甘草汤及其拆方含药血清对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响

目的探讨桂枝甘草汤及不同组分含药血清对单个豚鼠心室肌细胞L-型钙离子电流(ICa-L)及其动力学参数的影响。方法急性分离豚鼠心室肌细胞,随机分为空白组、甘草组(炙甘草30 g煎液)、桂枝组(桂枝60 g煎液)、甘草加桂枝组(炙甘草30 g单煎液+等体积桂枝60 g单煎液)、桂枝甘草汤组(炙甘草30 g+桂枝60 g合煎液),共5组。实验分为10%、15%两个浓度药物组,加药完成后细胞放于37℃,5%CO_2的孵育箱中孵育24 h后进行膜片钳实验。结果与空白组比较,10%、15%各药物组均不同程度抑制钙离子电流(P0.05),其中10%桂枝甘草汤组抑制率最大为58.4%。15%浓度药物组使ICa-L激活、失活及恢复时间均延长(P0.05),其中桂枝组激活时间常数、慢失活时间常数和失活后恢复时间常数变化率最大;甘草组快失活时间常数变化率最大。结论桂枝甘草汤及各组分含药血清对钙离子通道有不同程度的抑制作用,与钙离子阻滞剂的作用机制相同,这可能是桂枝甘草汤抗心律失常的作用机理。     

二冬汤含药血清对肺癌细胞A549的作用研究

目的：研究二冬汤含药血清对肺癌细胞A549的抑制作用、最佳给药方案及诱导细胞凋亡。方法：采用MTT法,观察不同给药天数、不同剂量、不同采血时间、不同培养时间的二冬汤血清对肺癌细胞A549的抑制效应,及应用FITC／PI流式细胞术检测最佳给药方案含药血清对A549细胞的凋亡率。结果：二冬汤含药血清对人肺癌细胞A549具有抑制作用,中剂量组[7．99g／（kg·d）]给药5天、10天,末次给药2h的含药血清与细胞培养48h后的抑制作用最明显,抑制率分别为42．27％和39．67％,与空白血清组比较,差异均有非常显著性意义（P〈0．01）;但从给药天数以及与肺癌细胞培养时间上来看,与空白血清组比较,差异无显著性意义（P〉0．05）;FITC／PI双染法显示二冬汤含药血清对A549的凋亡总计为（28．45±0．68）％,与空白血清组（6．75±0．46）％比较,差异有非常显著性意义护〈0．01）。结论：二冬汤最佳给药方案为给药5天,末次给药2h后取血,此时制备的含药血清能诱导细胞发生凋亡。     

小柴胡汤含药血清对肝癌HepG-2细胞的影响

目的:探讨小柴胡汤含药血清抑制HepG-2肝癌细胞增殖的作用机制.方法:大鼠灌服小柴胡汤3.69 g·kg-1,空白组给予等量蒸馏水,1次/d,连续7d,末次给药1h后腹主动脉取血制备小柴胡汤含药血清.以HepG-2肝癌细胞为研究对象,实验分为10％空白血清组,5％,10％,20％含药血清组.采用倒置显微镜观察含药血清对HepG-2细胞作用后的形态改变,噻唑蓝(MTT)法测定其对生长抑制的影响,流式细胞术分析细胞凋亡的情况,罗丹明123(Rh123)荧光染色观察细胞线粒体膜电位的变化.结果:与空白血清组比较,小柴胡汤含药血清能够抑制HepG-2肝癌细胞增殖,10％含药血清抑制细胞增殖具有时间依赖的特点;流式检测结果表明,10％小柴胡汤含药血清作用HepG-2肝癌细胞8h后,凋亡率从6.78％上升至19.51％;Rh123荧光染色显示,细胞线粒体膜电位明显降低.结论:小柴胡汤含药血清能够抑制HepG-2肝癌细胞增殖,促进其凋亡,线粒体途径参与了该过程.     

黄芩汤含药血清对TNF-α诱导的Caco-2细胞炎症模型的影响

目的：观察黄芩汤不同时间点的含药血清对TNF-α诱导的Caco-2细胞炎症模型的影响。方法：参照《伤寒论》组方及课题组的前期研究，煎煮、过滤、浓缩制成黄芩汤提取物，按照20 g/kg的剂量一次性给予大鼠黄芩汤，分别于给药后0、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24 h眼眶取血，分离血清，MTT法观察不同浓度的黄芩汤含药血清对Caco-2细胞增殖的影响；并用TNF-α诱导细胞炎症损伤模型，10%的含药血清给药18 h后，采用Griess法观察黄芩汤含药血清对其NO的影响，采用Elisa法测定IL-1β、PGE₂和TNF-α的变化。结果：与正常组相比，5%、10%、20%的黄芩汤含药血清作用Caco-2后，均有促进其增殖的作用，尤以10%黄芩汤含药血清的效果最佳；10 ng/mL的TNF-α致炎效果最佳；不同时间点的10%黄芩汤含药血清可降低炎症细胞内NO的含量，降低细胞内IL-1β、TNF-α和PGE₂的浓度。结论：黄芩汤不同时间点的含药血清对TNF-α诱导的Caco-2细胞炎症具有明显的抑制作用，其作用机制可能与抑制NO、IL-1β...     

附子含药血清对大鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

目的:研究附子含药血清对大鼠心肌细胞L型钙通道的影响,探讨附子抗缓慢型心律失常的作用机制。方法:附子水煎后水浴浓缩成1∶1,给予大鼠灌胃,每次15.6 g·kg-1,7 d后制备含药血清;细胞密度20个/m L,药物血清体积分数为10%。作用时间:从加药物血清20 min后开始记录,到1 h逐渐结束,各组样本数均为8;采用急性酶解法获得大鼠的心室肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录L型钙通道电流,观察附子含药血清对单个心室肌细胞L型钙通道电流(Ica-t)幅度及动力学特性的影响。结果:10%空白血清组和10%附子含药血清组给药后的平均峰电流密度和平均激活率分别为:(-3.59±1.06)p A/p F(单位细胞膜面积的电流大小),12.87%(n=8,P0.05)和(-4.01±0.88)p A/p F,51.17%(n=8,P0.01);附子含药血清激活曲线用药前和用药后的V1/2和K(稳态半数激活电压和斜率因子)分别为(-12.66±0.44)m V和(5.70±0.35),(-14.71±0.88)m V和(5.68±0.72),(P0.05,n=8);附子含药血清失活曲线用药前和用药后的V1/2和K分别为(-28.10±0.20)m V和(6.31±0.18),(-37.55±0.11)m V和(5.94±0.09),(P0.05,n=8);附子含药血清恢复曲线用药前和用药后的τ为(171.01±11.13)ms和(160.15±4.97)ms(n=8),差异无统计学意义;附子含药血清可增加L型钙通道电流密度、激活曲线左移,失活曲线右移,对恢复曲线没有影响。结论:附子含药血清能增加心室肌细胞钙通道电流。     

四逆汤抗氧化应激性损伤保护心肌细胞机制的探讨

目的:观察四逆汤在乳鼠心肌细胞氧化应激性损伤过程中的保护效应,探讨四逆汤抗氧化应激性损伤保护心肌细胞的机制.方法:采用H2O2诱导损伤制备SD乳鼠心肌细胞氧化应激性损伤模型,分别用含不同浓度的四逆汤含药血清DMEM培养基培养细胞,应用流式细胞仪检测培养细胞的存活率,用1 m mol/LH2O2处理心肌细胞,分别在处理0.5h,1 h,2 h,4 h和8 h后检测细胞的凋亡率和坏死率,同时检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶(LDH)和细胞内丙二醛(MDA);对H2O2处理不同时间的心肌细胞线粒体膜电位进行检测.结果:采用含15%四逆汤含药血清的DMEM培养基是心肌细胞生长的合适浓度;四逆汤含药血清能降低细胞培养液中的LDH活性以及细胞内MDA的含量,减少细胞的凋亡率和坏死率;降低心肌细胞线粒体膜电位的下降速度.结论:四逆汤对于H2O2造成的心肌细胞损伤具有保护作用,这种作用与保护线粒体膜电位的稳定有关.     

醒脑静治疗急性酒精中毒的临床和实验研究

探讨中药醒脑静注射液治疗急性酒精中毒的机理。方法；选择单纯酒厥急诊患者及实验家兔模型，静脉用醒脑静注射液治疗，用药前及清醒后分别测定血浆β－内啡肽，氧自由基，超氧化物歧化酶。结果；醒脑静在促醒酒厥家兔模型及患者的同时，β－内啡肽从酒厥时明显高于健康人，降低至接近正常水平。     

西洋参茎叶皂苷对大鼠心肌细胞Ca2+内流的影响

目的:研究西洋参茎叶皂苷(PQS)对大鼠心肌细胞Ca2 内流的影响.方法:应用钙离子荧光指示剂Fura-2/AM检测.结果:PQS(1.5mg/ml)和维拉帕米(0.5μmol/L)对静息状态下心肌细胞内Ca2 浓度均无明显影响,但PQS使心肌细胞内Ca2 浓度有下降趋势;两药可明显抑制高钾(50mmol/L)引起的心肌细胞内Ca2 浓度的升高.结论:PQS对心肌细胞电压依赖性钙通道有阻断作用.     

补阳还五汤防止兔模拟经皮冠脉腔内血管成形术后再狭窄的实验研究

目的：观察补阳还五汤（消栓口服液）对饲料所致动脉粥样 经兔模拟经皮冠脉腔内血管成形术（PTCA）后 狭窄有无防止的作用。方法：动物随机分中药组24只和对照组20只（另4只术中死亡）。中药组术前1周至术后4周喂药2ml(kg·d）（含生药8.4g/ml）；对照组喂同量生理盐水。两组均在腹主动脉用球囊法模拟PTCA。结果：术后60天中药组和对照组受损血管内增生发生率分别为29.2％、85.0％；内膜增生面积分别为（0.54±0.21）mm^2、（1.67±0.75)mm^2；内膜增生百分比为（18.0±7.2）％、(56.0±17.1)%；管腔相对面积比为(0.74±0.03)%、(0.35±0.07)%，以上差异均有显著性(P<0.01)。含药血清对血管平滑肌细胞培养的^3H-TdR掺入有显著抑制作用，中药组和对照组分别为(4110.14±1977.01)cpm、(7960.14±2802.59)cpm(P<0.05）。结论：补阳还五汤（消栓口服液）对饲料所致动脉粥样硬化兔模拟PTCA后再狭窄有显著防止作用。     

血府逐瘀浓缩丸抗血小板活化的临床疗效与体外血清药理作用的相关性研究

目的：探讨血小板活化在不稳定性心绞痛（unstable angina pectoris,UA)和急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI)中的意义以及血府逐瘀浓缩丸抗血小板活化的临床疗效及其体外血清药理作用的相关性。方法：采用流式细胞技术和特异性标记抗体，检测口服血府逐瘀浓缩丸前后UA患者全血血小板膜糖蛋白CD62P和CD41／45的表达，并以UA患者的含药血清与AMI模型小鼠的外周血体外共温育后，检测大鼠CD62P水平。结果：UA患者CD62P及CD41／45表达量增高，分别为（24．36±7．91）％和（29．51±12．21）％，经有效治疗后降至（19．57±7．22）％（与治疗前比较，P＜0．05）和（20．87±8．73）％；同时血小板粘附和聚集率增高。AMI大鼠CD62P为（39．73±12．36）％，与有效病例的含药血清后降至论（30．41±10．36）％（与温育前比较，P＜0．05），而疗效不佳患者的药后血清干预作用则较差（P＞0．05）。结论：UA患者和AMI大鼠的血小板活化增强。血府逐瘀浓缩丸含药血清药理与临床整体药效在抑制血小板活化作用上的一致性，反映出中药血清药理作用与临床整体药效的良好相关性。     

氧应激对豚鼠心肌细胞线粒体膜电位的影响及益心康胶囊含药血清保护作用的研究

目的观察氧应激对豚鼠心肌细胞线粒体的影响，探讨抗心肌缺血中药复方——益心康胶囊(H303)含药血清对氧应激损伤的保护作用机制。方法利用激光共聚焦显微镜，观察羟自由基损伤体系(Fe2＋／H2O2)与豚鼠心肌细胞共同孵育30～60min后对心肌细胞线粒体膜电位的影响。结果豚鼠心肌细胞氧应激后，可致线粒体细胞色素氧化酶活性降低，以及荧光染料Rh123所显示的线粒体膜电位明显降低。H303含药血清可明显减轻上述损伤，表现为明显增强豚鼠心肌细胞线粒体氧化酶活性，使心肌细胞存活率增加；并具有保护心肌细胞膜电位的作用。结论氧应激可造成心肌线粒体膜电位降低。益心康胶囊含药血清可保护线粒体膜电位，从而发挥其膜稳定作用。     

葛根素对大鼠心肌细胞L型钙离子通道的影响

目的 :观察葛根素对大鼠L型钙离子通道的作用。方法 :恒流Langendorff灌流 ,I型胶原酶解分离 ,全细胞膜片钳技术记录离子电流。结果 :2.4 mmol·L^-1葛根素可以抑制单个大鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流 ,且成时间依赖性 ;葛根素可以促进L型钙通道电流 电压 (I-V)曲线的上移。结论 :葛根素可以抑制大鼠心室肌细胞的L型钙离子通道电流 ,并提示葛根素的抗心肌缺血和抗心律失常作用可能与抑制L型钙离子通道电流有关。     

虫草菌丝联合银杏叶片对血液透析患者微炎症的影响

目的 探讨维持性血液透析患者的微炎症状况以及虫草菌丝联合银杏叶片对微炎症的防治作用。 方法 选择长期血液透析患者65例,随机分为对照组(32例)和治疗组(33例),两组均进行规律血液透析,治疗组加用金水宝（每粒含虫草菌丝0.33 g）3粒,银杏叶片（每片0.23 g）1 片,均每天3次口服,疗程3个月;治疗前后采用ELISA法,检测两组血清炎症因子〔超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)〕水平;另选择30例健康人检测血清炎症因子水平,作为健康对照。 结果 与健康人对照组比较,长期血液透析患者hs-CRP、IL-6及TNF-α水平均显著升高（P<0.01）;在虫草菌丝联合银杏叶片治疗3个月后,治疗组hs-CRP〔（3.28±1.28）mg/L〕、IL-6〔（0.379±0.163）μg/L〕、TNF-α〔（1.330±0.458）μg/L〕水平均较治疗前〔分别为（4.94±2.21）mg/L、（0.472±0.220）μg/L、（1.748±0.724）μg/L〕明显下降（P<0.01）;对照组hs-CRP、IL-6及TNF-α治疗前后比较,差异无统计学意义。 结论 微炎症反应在维持性血液透析患者中普遍存在,虫草菌丝联合银杏叶片对这种微炎症反应具有明显改善作用。     

克班宁注射剂在家兔体内的药动学研究

目的：建立血清中克班宁(crebanine,Cre)浓度的高效液相测定方法,探讨克班宁注射剂在家兔体内的药动学过程。方法：家兔按2.0 mg·kg^-1量耳缘静脉注射克班宁后5,10,20,30,50,70,90,110 min采血,用HPLC测定血清中克班宁浓度,以DAS软件拟合药动学参数。结果：克班宁平均回收率分别为(89.4±2.5)%,(105.4±4.1)%,(102.7±5.8)%；精密度分别为日内RSD 2.8%,3.9%,5.6%；日间RSD分别为8.2%,6.8%,7.2%。克班宁注射剂在家兔体内成二室模型,雌、雄兔体内的药动学参数经t检验差异无显著性意义。主要药动学参数为：t_1/2α=(3.246±0.222) min,t_1/2β=(36.675±5.525) min,C_max=(1.401±0.063) mg·L^-1,V_d=(5.928±0.877) L·kg^-1,Cl=(0.051±0.003) L·min^-1·kg^-1。结论：克班宁静注在家兔体内为超速处置类(t_1/2<1 h)药物,其在体内的分布迅速、广泛。