天然牛磺酸对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

[目的]探讨天然牛磺酸对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响.[方法]Wistar大鼠随机分成对照组、模型组、天然牛磺酸治疗组,采用CCL4诱导肝纤维化模型.酶联免疫吸附法(EuSA)测定血清TGF-β1含量;免疫组织化学法检测肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达;RT-PCR检测肝组织TGF-β1、TβRⅠ和TβRⅡmRNA表达;分别用HE染色和Masson染色.肝组织观察病理组织变化.[结果]治疗组血清TGF-β1含量为(1.65±0.32)μg/L,显著低于模型组(3.93±0.32)μg/L,P＜0.01;治疗组肝组织TGF-β1,Smad3蛋白表达分别为(4.5±0.6)%、(2.5±0.8)%,显著低于模型组(7.5±1.2)%、(3.9±0.8)%,P＜0.05,Smad7为(6.2±1.3)%,显著高于模型组(1.3±0.2)%,P＜0.01;治疗组肝组织TGF-β1,TβRⅠ和TβRⅡmRNA表达分别为0.83±0.21、0.45±0.16、0.63±0.15,显著低于模型组1.62±0.45、0.93±0.24、1.25±0.45,P＜0.01;治疗组肝纤维化分期积分为2.07±0.31,显著低于模型组3.18±0.42,P＜0.01.[结论]天然牛磺酸能抑制TGF-β1及其受体和Smad3的表达,上调Smad7的表达,具有抑制肝纤维化的作用.     

丹参酮ⅡA对大鼠肺纤维化细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的观察丹参酮ⅡA对TGF-β1诱导大鼠肺成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响,探讨丹参酮ⅡA干预肺纤维化的机制。方法体外培养大鼠肺成纤维细胞(HFL-1),选取生长状态良好的对数期细胞分为正常组、TGF-β1组及丹参酮ⅡA低(L)、中(M)、高(H)剂量组。除正常组外,余四组予以10ng/m L TGF-β1诱导HFL-1纤维化24h,同时丹参酮ⅡA低、中、高剂量组分别予2μmol/L、5μmol/L和10μmol/L丹参酮ⅡA处理24h,ELISA法测定各组细胞中TGF-β1受体表达,荧光定量PCR法及免疫印迹法检测Smad2、Smad7表达情况。结果与正常组比较,HLF-1细胞经10ng/m L TGF-β1诱导后细胞TGF-β1受体和Smad2表达量增加[(0.19±0.23)比(1.41±0.12)、(1.00±0.12)比(1.90±0.12),P<0.01],Smad7表达量降低[(1.00±0.15)比(0.57±0.09),P<0.01];与TGF-β1组比较,10μmol/L丹参酮ⅡA处理后TGF-β1受体和Smad2的表达量均有下降趋势[(1.90±0.23)比(1.53±0.12),(1.90±0.12)比(1.38±0.06),P<0.01],Smad7表达量升高[(0.57±0.08)比(0.74±0.11),P<0.01]。结论丹参酮ⅡA可以抑制TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖和Smad2及TGF-β1受体表达,增强抑制性信号蛋白Smad7的表达,从而发挥抑制肺纤维化的作用。     

荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠TGF-β1及Smad3、7表达的影响

目的探讨荔枝核总黄酮(TFL)对胆汁性肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、7表达的影响及其抗肝纤维化可能的作用机制。方法将雄性SD大鼠70只随机分为假手术组、模型组、TFL大剂量组[200mg/(kg.d)]和TFL小剂量组[100mg/(kg.d)]。采用胆总管结扎制备肝纤维化大鼠模型。分别于术后第2、3、4周处死大鼠,留取肝脏组织。HE染色观察大鼠肝组织病理改变;免疫组织化学法检测TGF-β1、Smad3、7在肝组织内的动态表达。结果假手术组肝组织内TGF-β1、Smad3有少量表达,Smad7呈高表达。与模型组比较,TFL大剂量治疗后大鼠肝组织内纤维化程度降低。随着肝纤维化的形成和发展,第2、3、4周TFL大剂量组大鼠肝组织TGF-β1(3.000±1.309、2.000±1.309、1.800±1.649)、Smad3(2.875±1.458、2.000±1.309、1.833±0.753)与模型组TGF-β1(3.750±1.488、4.333±1.211、5.000±0.817)、Smad3(3.375±0.916、4.000±0.894、4.250±0.500)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TFL能有效地减轻胆总管结扎所致肝纤维化大鼠肝损伤及肝纤维化程度,其机制可能与抑制TGF-β1、Smad3高表达,上调Smad7表达有关。     

血管紧张素-（1-7）对TGF-β1诱导的大鼠心肌成纤维细胞Smad3、Smad7 mRNA表达的影响

目的：观察血管紧张素-（1—7）对TGF-β1诱导幼年大鼠心肌成纤维细胞增殖以及Smad3、Smad7mRNA表达的影响。方法：分离培养SD仔鼠心脏成纤维细胞,以Ang-（1—7）、TGF-β1、Ang-（1—7）＋TGF-β1组、TGF-βI型受体抑制剂等干预,通过WST-1法检测细胞增殖,RT—PCR测定心脏成纤维细胞Smad3、Smad7mRNA的表达。结果：①与空白对照组比较,TGF-β1组心脏成纤维细胞的OD值增加（P〈0．05）;与TGF-β1组比较,0．001～1．0μmol／L血管紧张素－（1-7）和5μg／TGF-β1共同干预后OD值逐渐降低（P〈0．05）。②与对照组比较,TGF-β1组心脏成纤维细胞的Smad3mRNA表达升高（P〈0．05）,Smad7mRNA表达降低（P〈0．05）。结论：血管紧张素-（1—7）能有效抑制TGF-β1引起的心脏成纤维细胞的增殖,其作用不通过TGF-βI型受体介导。     

瓜蒌薤白汤对肺纤维化早期阶段肺组织中TGF-β、Smad3、Smad7表达的影响

目的:探讨瓜蒌薤白汤防治肺纤维化的作用机理。方法:72只SD大鼠随机分为4组,即博莱霉素组、瓜蒌薤白汤组、泼尼松组、正常组,每组18只。用博莱霉素诱导大鼠肺纤维化模型后,用药组每天灌胃瓜蒌薤白汤,分别于第7天、第14天后处死各组大鼠,观察、比较各组大鼠肺泡炎、肺纤维化程度和肺组织中转化生长因子-β(transforming growth factor,TGF-β)、Smad3、Smad7的表达。结果:光学显微镜下,正常组大鼠肺组织正常;博莱霉素组大鼠第7天肺泡间隔增厚,肺泡腔内有炎性细胞浸润,第14天呈1级肺泡炎改变和2级、3级肺组织纤维化;瓜蒌薤白汤组大鼠肺组织炎性改变和纤维化程度较博莱霉素组减轻,炎性细胞浸润减少,部分呈1级纤维化改变。免疫组织化学结果显示:与正常组比较,第7天和第14天博莱霉素组TGF-β、Smad3表达水平升高,Smad7表达下降(P0.05);与博莱霉素组比较,4 g·kg~(-1)瓜蒌薤白汤可使TGF-β、Smad3表达下降(P0.05),而Smad7表达增高(P0.05)。Real time-PCR结果显示:与正常组比较,第7天和第14天博莱霉素组TGF-β、Smad3表达水平明显升高(P0.05),Smad7表达下降(P0.05);与博莱霉素组比较,4 g·kg~(-1)瓜蒌薤白汤可使TGF-β和Smad3表达下降(P0.05),Smad7表达增高(P0.05)。结论:瓜蒌薤白汤能明显减轻博莱霉素所致的大鼠肺泡炎,有效调控TGFβ-Smad信号通路介导的致纤维化作用,进而起到抗纤维化的作用。     

丹参酮ⅡA对肺纤维化细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对TGF-β1诱导大鼠肺成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响,阐明丹参酮ⅡA干预肺纤维化的机制。方法：体外培养大鼠肺成纤维细胞,经TGF-β1、TGF-β1/丹参酮ⅡA处理24h,用ELISA法测定细胞中TGF-β1受体表达情况,荧光定量PCR法及免疫印迹法检测Smad2、Smad7表达情况。 结果：TGF-β1处理后TGF-β1受体和Smad2表达量增加,Smad7表达量降低,丹参酮ⅡA处理后TGF-β1受体和Smad2的表达量均有下降趋势,Smad7表达量升高。结论：丹参酮ⅡA可以抑制TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖和Smad2及TGF-β1受体表达,增强抑制性信号蛋白Smad7的表达,从而发挥抑制肺纤维化的作用。     

红景天甙对肝纤维化大鼠Samds基因表达的影响

目的: 观察红景天甙对肝纤维化大鼠TGFβ-Smad通路的影响.方法: CCl4诱导大鼠肝纤维化,以红景天甙水溶液干预性治疗,Masson染色观察肝组织胶原沉积;ELISA法检测大鼠血清TGFβ1水平;原位杂交(in situ hybridization,ISH)和免疫组化(immunohistochemistry,IH)检测大鼠肝组织Smads表达情况.结果: 红景天甙干预性治疗使肝纤维化大鼠血清TGFβ1水平明显下降[(53.4±19.5) vs (88.7±22.8) mg/L, P<0.05],肝脏胶原占肝组织面积比例减少为(0.041±0.011)[模型组(0.167±0.052),P<0.05];治疗组肝脏Smad 4蛋白表达阳性率降低为(0.023±0.008)[模型组(0.137±0.090),P<0.01],Smad 4 mRNA阳性率降低为(0.233±0.018)[模型组(0.741±0.091),P<0.01];Smad 7蛋白阳性率增加为(0.067±0.010)[模型组(0.019±0.002),P<0.05],Smad 7 mRNA阳性率增加为(0.198±0.011)[模型组(0.074±0.012),P<0.01];肝组织Smads蛋白表达与Smads mRNA水平变化一致.结论: 红景天甙防治可显著降低肝纤维化大鼠血清TGFβ1水平,减少肝脏胶原沉积,抑制肝脏Smad 4表达及促进Smad 7 mRNA表达,从而减弱了由TGFβ1介导的肝纤维化信号,可能是其发挥抗肝纤维化作用的分子机制之一.     

姜黄素对肝星状细胞转化生长因子β1及受体和I、III 型胶原mRNA表达的影响

目的 探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞（HSC）增殖、转化生长因子β1（TGF-β1）及其受体、下游信号通路及效应的影响。方法 培养HSC细胞,给予不同浓度姜黄素处理,采用MTT比色法检测HSC细胞增殖;Hoechst 33342染色检测姜黄素对HSC凋亡的影响;采用免疫细胞化学法检测Smad3、Smad7蛋白表达;用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测TGF-β1及其I、II受体（TβRI、TβRII）和I、III型胶原（Col-I、Col-III）mRNA的表达。结果 姜黄素能抑制HSC细胞增殖,诱导HSC细胞凋亡,免疫组化结果显示姜黄素能抑制HSC表达Smad3,并提高Smad7表达,RT-PCR结果显示姜黄素使HSC细胞TGF-β1及其I、II受体、Col-I、Col-III mRNA表达降低。结论 姜黄素能抑制HSC增殖和活化,抑制TGF-β1及其受体和信号通路,是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

TGF-β1/Smad3在博来霉素肺纤维化大鼠中的作用

目的 通过Smad3特异性抑制剂(specific inhibitor of Smad3,SIS3)干预博来霉素肺纤维化大鼠,观察转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3蛋白表达情况,探讨TGF-β1/Smad3信号通路在肺纤维化中的作用.方法 选取健康成年雄性SD大鼠60只,随机分为4组:生理盐水对照组(NS组),博来霉素组(BLM组),SIS3干预组(SIS3组),二甲基亚砜溶媒组(DMSO组),每组15只.BLM组、SIS3组和DMSO组气管内注射博来霉素溶液(5 mg/kg)建立大鼠肺纤维化模型;NS组以同样方法注入等量生理盐水;SIS3组大鼠腹腔内注射SIS3(2.5 μg/g)干预处理,BLM组注射等量生理盐水,DMSO组注射等量DMSO.各组于造模后第7、14、28天分别处死5只大鼠,行Masson染色观察各组肺组织胶原纤维差异.免疫组化检测各组TGF-β1、Smad3表达情况.结果 与NS组比较,BLM组、DMSO组大鼠肺组织出现明显纤维化,TGF-β1、Smad3表达明显增高;与BLM组、DMSO组相比,SIS3组大鼠肺纤维化程度减轻,TGF-β1、Smad3表达减少.结论 SIS3干预肺纤维化大鼠,能够减轻大鼠肺泡炎,降低肺纤维化程度;TGF-β1/Smad3信号通路在肺纤维化中可能起到重要作用.     

AG对大鼠纤维化肺成纤维细胞表达CTGF的影响

目的:探讨氨基胍(AG)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导大鼠纤维化肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响。方法:采用体外细胞培养,免疫细胞化学技术,流式细胞术等技术,检测AG对大鼠纤维化肺成纤维细胞表达CTGF的影响。结果:TGF-β1诱导肺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞(MF),表达CTGF增强(P<0.05),AG抑制了TGF-β1的诱导作用(P<0.05),单独应用AG对肺成纤维细胞表达CTGF无影响。结论:AG能够削弱TGF-β1诱导大鼠纤维化肺成纤维细胞表达CTGF的能力。     

实脾固肾化瘀方对阿霉素肾纤维化大鼠肾组织TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的探讨实脾固肾化瘀方对阿霉素(ADR)肾纤维化大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路的影响。方法研究于2016年8—12月在上海中医药大学附属曙光医院肾病研究所进行,40只雄性SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、实脾固肾化瘀方组、福辛普利钠组等4组,每组10只。除正常对照组外,其余3组大鼠均采用尾静脉注射ADR(4mg/kg)法制成肾纤维化大鼠模型。造模成功后实脾固肾化瘀方组予以实脾固肾化瘀方浸膏(43g/kg);福辛普利钠组予以福辛普利钠溶液(2mg/kg);模型组和正常对照组予以生理盐水。实验结束后,留取全部大鼠24 h尿量、血清及肾脏组织,观察各组大鼠肾脏病理变化及肾组织TGF-β1、Smad2及Smad7表达的变化。结果 Masson染色发现,正常对照组大鼠肾组织形态结构正常,未见肾小管、间质纤维化及炎细胞浸润等异常改变。肾间质胶原纤维微弱表达,胶原纤维呈蓝色,肌纤维及红细胞呈红色。模型组大鼠肾组织出现明显的病理损害,实脾固肾化瘀方组、福辛普利钠组大鼠肾组织病理损害明显减轻,且实脾固肾化瘀方组大鼠肾组织病理改善比福辛普利钠组更明显。免疫组化染色并对其灰度值测定后发现,模型组肾组织TGF-β1、Smad2表达较正常对照组明显上调(P<0.01),实脾固肾化瘀方组大鼠肾组织TGF-β1及Smad2表达较模型组明显下调(P<0.01),Smad7表达明显上调(P<0.01),与福辛普利钠组相比,实脾固肾化瘀方组大鼠肾组织TGF-β1、Smad2表达差异无统计学意义(P>0.05),而Smad7表达则明显上调(P<0.05)。结论实脾固肾化瘀方可能通过下调TGF-β1及Smad2表达、上调Smad7表达,干预TGF-β1/Smads信号通路,从而发挥改善ADR肾病大鼠肾纤维化、保护肾功能的作用。     

bFGF反义寡核苷酸对大鼠肺成纤维细胞增殖信号通路的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸(AODN)对大鼠肺成纤维细胞增殖、转化信号通路的影响。方法:分离成年大鼠肺成纤维细胞,分为4组:对照组(未转染肺成纤维细胞);TGF-β1组(未转染肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+AODN组(转染AODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+RODN(正义寡核苷酸)组(转染RODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激)。每组设3复孔,并作细胞爬片,镜下计数肺成纤维细胞数量,绘制生长曲线。MTT比色法测定肺成纤维细胞增殖率。免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。通过ELISA法检测培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量。用RT-PCR法分析肺成纤维细胞Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原mRNA表达水平。结果:1细胞计数显示:TGF-β1+RODN组各时段成纤维细胞的数目均较对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组明显增多(P<0.05);TGF-β1+AODN组中成纤维细胞增殖数比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。2MTT结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞光密度值明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞光密度值明显比TGF-β1组减低(P<0.05)。3免疫细胞化学染色结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞与对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组比较,α-SMA染色的平均光密度值(IOD)明显增加(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞α-SMA染色的平均光密度值(IOD)比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。4 ELISA法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。5RT-PCR法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显比TGF-β1组明显减低(P<0.05);TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad7mRNA表达明显低于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad7 mRNA表达比TGF-β1组明显增加(P<0.05)。结论:bFGF反义寡核苷酸可抑制肺成纤维细胞的增殖、转化及胶原合成,bFGF反义寡核苷酸可能通过下调TGF-β1-Smad信号通路来发挥作用。     

金三莪对实验性肝纤维化大鼠TGF-β1、Smad3、Smad7及CTGF表达的影响

[目的]观察中药金三莪抗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的疗效及作用机制。[方法]将50只Wistar大鼠分为正常对照组、模型对照组、中药治疗1组及2组,于造模第1周及第4周开始用金三莪治疗。免疫组化技术检测转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7及结缔组织生长因子(CTGF)在肝内表达及其在细胞中的定位,肝组织电镜检查,放射免疫法检测血清透明质酸(HA)含量。[结果]经中药金三莪治疗后肝纤维化大鼠肝组织内TGF-β1、Smad3及CTGF表达降低,而Smad7的表达增加,TGF-β1、Smad3及CTGF的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆,Smad7则主要在肝细胞浆表达。电镜检查中药治疗组大鼠肝细胞结构趋于正常,纤维组织变薄。模型组血清HA含量明显高于正常组(P<0.01),中药治疗1、2组血清HA含量明显低于模型组(P<0.05)。[结论]中药金三莪能有效地减轻四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的损伤及纤维化程度,其机制可能是抑制肝内TGF-β1、Smad3及CTGF并促进Smad7表达。     

外源性硫化氢调节TGF-β1/Smad7信号通路改善高同型半胱氨酸血症所致的大鼠心肌纤维化

目的:观察外源性硫化氢(hydrogen suifide,H2S)对高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)诱导的大鼠心肌纤维化及转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和Smad7蛋白表达的影响.方法:将40只成年雄性SD大鼠随机均分为对照(Control)组、模型(HHcy)组、H2S干预模型(HHcy+H2S)组和H2S对照(H2S)组,每组10只.本实验模型大鼠的建立通过将L-蛋氨酸(10 g/L)加入大鼠的饮用水,持续10周喂养建立.建模成功后,HHcy+H2S组及H2S组大鼠每日经腹内注射硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)溶液,持续干预4周.各组大鼠心肌胶原纤维沉积情况由Masson染色法观察,心肌组织中Ⅲ型胶原的表达情况由免疫组织化学染色法检测,CBS、TGF-β1和Smad7蛋白的表达情况通过Western blot检测.结果:与对照组相比,模型组心肌细胞排列紊乱、胶原沉积明显增加,心肌组织中Ⅲ型胶原沉积明显增加(P=0.000),TGF-β1蛋白表达明显升高(P=0.004),CBS(P=0.006)及Smad7(P=0.001)蛋白表达水平明显下调;与模型组相比,HHcy+H2S组大鼠心肌细胞排列相对整齐、胶原沉积相对减轻,组织中Ⅲ型胶原沉积减轻(P=0.003),TGF-β1蛋白表达相对下调(P=0.006),CBS(P=0.005)及Smad7(P=0.000)蛋白表达水平增加.结论:外源性硫化氢可以改善HHcy诱导的大鼠心肌纤维化,其调节机制可能与TGF-β1/Smad7信号通路有关.     

丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β_1信号通路的作用

目的:研究丹参酮ⅡA磺酸钠注射液(STS)对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)Smad信号通路的影响,探讨STS抑制肺成纤维细胞(LFB)增殖、转化的可能机制。方法:体外分离培养大鼠肺成纤维细胞,实验分为3组:①空白对照组;②TGF-β1刺激组;③联合处理组:STS+TGF-β1刺激组,培养48h,待细胞生长同步化后,用MTT法检测丹参酮ⅡA对肺成纤维细胞增殖的影响,用RT-PCR法分析丹参酮ⅡA磺酸钠和TGF-β1作用后肺成纤维细胞Smad3、Smad7 mRNA表达水平的变化,以及对Ⅰ型胶原mRNA的影响。结果:丹参酮ⅡA磺酸钠在80-640mg/L浓度范围对5μg/L TGF-β1刺激的肺成纤维细胞增殖均具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.05);丹参酮ⅡA磺酸钠在浓度160mg/L时能明显下调TGF-β1刺激的肺成纤维细胞内Smad3 mRNA、Smad3/Smad7 mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的表达(P<0.05),并能上调Smad7 mRNA表达(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA磺酸钠能抑制LFB的增殖、转化及胶原的合成,机制可能是丹参酮ⅡA磺酸钠下调了大鼠TGF-β1 Smad信号通道的Smad3/Smad7水平,从而抑制LFB的增殖、转化。     

STAT1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1和Smad4表达的影响

目的：观察信号转导子与转录活化子1（STAT1）反义寡核苷酸雾化吸入对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1和Smad4表达的影响。方法：将45只雌性Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组和干预组,每组15只,对照组大鼠气管内灌注生理盐水、模型组和干预组大鼠气管内灌注博来霉素。于气管内灌注药物后0、2、4、6天对照组和模型组大鼠给予雾化吸入生理盐水,而干预组大鼠则雾化吸入STAT1反义寡核苷酸/DOTAP复合物。分别于气管内灌注药物后第7天、第14天和第28天每组各处死5只大鼠。肺组织HE染色和Masson染色观察肺泡炎和肺纤维化改变,收集支气管肺泡灌洗液（BALF）行细胞总分数测定、ELISA测定BALF中TGF-β1的浓度、免疫组织化学SP法测定肺组织中TGF-β1、Smad4表达。结果：（1）干预组大鼠各时间点的肺泡炎和肺纤维化程度均较模型组明显减轻。（2）干预组大鼠各时间点的细胞总数和中性粒细胞比例较模型组减少,巨噬细胞比例增加。（3）模型组大鼠BALF的TGF-1水平在第7d表达明显升高,14d、28d仍持续高于对照组。干预组大鼠各时间点BALF中TGF-β1含量均低于模型组。（4）模型组和干预组大鼠肺组织中TGF-β1、Smad4表达水平均明显高于对照组,模型组和干预组大鼠第7天TGF-β1、Smad4的表达值明显高于对照组,随后下降,第28天时仍高于对照组;干预组大鼠各时间点肺组织TGF-β1、Smad4表达水平均低于模型组。（5）干预组大鼠肺组织中羟脯氨酸含量明显低于模型组。（6）BALF中TGF-β1蛋白浓度、肺组织中TGF-β1蛋白表达、Smad4蛋白表达均与肺组织匀浆中羟脯氨酸含量呈正相关。结论：STAT1反义寡核苷酸雾化吸入能减轻博来霉素致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化,其机制可能与抑制TGFβ-Smads信号转导通路中的TGF-β1和Smad4有关。     

依那普利对大鼠肾间质纤维化中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的作用

目的:观察依那普利对肾间质纤维化大鼠肾组织中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的影响,探讨依那普利抗肾间质纤维化的作用机制.方法:将30只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和依那普利治疗组.对治疗组和模型组大鼠行左侧输尿管结扎术建立单侧输尿管梗阻的动物模型.术后14 d处死大鼠,留取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色以观察各组大鼠肾组织病理改变,用免疫组织化学方法检测Col Ⅰ,TGF-β1,P-Smad2/3和Smad7的蛋白水平表达,用RT-PCR方法检测TGF-β1,和Smad7mRNA水平表达.结果:模型组肾间质损伤指数、胶原相对面积及间质内Col Ⅰ表达均较假手术组增高(P<0.01),依那普利治疗后好转.假手术组肾组织TGF-β1蛋白及mRNA表达、p-Smad2/3蛋白表达较低,模型组表达明显增强(P<0.01),依那普利治疗后明显减弱(P<0.01).假手术组肾组织可见较多的Smad7蛋白及mRNA表达,模型组肾组织Smad7表达明显减弱(P<0.01),依那普利治疗后Smad7表达较模型组增强(P<0.01).结论:依那普利可以通过影响单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中TGF-β/Smads信号通路中的TGF-β1,p-Smad2/3和Smad7而起到抑制纤维化的作用.     

中药软肝饮对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TGF-1/Smad信号通路的影响

[目的]研究中药软肝饮对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏TGF-1及Smad3,Smad7表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。[方法]Wistar大鼠40只,随机分成正常对照组,模型对照组,软肝饮治疗组,鳖甲软肝片对照组,采用CCl4背部皮下注射构建肝纤维化模型,行HE和VG染色,光镜下观察肝组织肝纤维化程度。同时免疫组化SABC方法检测各组TGF-1、Smad3和Smad7的表达。[结果]与正常对照组相比,模型组TGF-1、Smad3表达明显增强,Smad7表达明显下降。经软肝饮治疗后大鼠肝脏TGF-1表达比模型组减弱。软肝饮同时下调Smad3的表达,上调Smad7的表达。另外,软肝饮组大鼠肝脏病理变化显著改善。[结论]肝炎平对大鼠肝纤维化肝脏TGF-1/Smad信号通路有明显的影响,能抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能为抑制TGF-1表达,下调Smad3及上调Smad7的表达。     

实验性肝纤维化大鼠TGF-β_1、Smad3、Smad7、CTGF的表达及其意义

目的 :研究四氯化碳 ( CCl4 )诱导肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子β1( TGF-β1)、Smad3、Smad7和结缔组织生长因子 ( CTGF)的表达及定位。方法 :将 2 4只大鼠随机分为正常对照组与模型组 ,模型组大鼠予以 40 %四氯化碳皮下注射 8周后处死。免疫组化技术检测 TGF-β1、Smad3、Smad7和 CTGF在肝脏的表达及细胞内的定位 ,放射免疫方法检测透明质酸 ,并进行肝组织病理检查。结果 :与正常组大鼠比较 ,模型组大鼠肝内 TGF-β1、Smad3、CTGF表达增加 ,而 Smad7的表达降低。 TGF-β1、Smad3及 CTGF的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆 ,Smad7主要在肝细胞浆表达 ;模型组大鼠血清 HA及肝组织Van Giseon染色、HE染色和电镜检查均支持肝纤维化改变。结论 :肝内 TGF- β1、Smad3和CTGF表达增强、Smad7表达减弱 ,提示 TGF- β1轴、CTGF参与了肝纤维的发生发展 ,可能作为防治肝纤维化发生发展的新途径之一     

阿利吉仑对大鼠肾纤维化TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨阿利吉仑对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用及机制。方法 24只雌性SD大鼠随机分为3组,Sham组、UUO组及aliskiren组,除Sham组外,UUO组及aliskiren组均行左侧输尿管结扎术。aliskiren组术前1 d开始灌胃给药,阿利吉伦50 mg/(kg·d),每日1次,连续2周。术后第14天处死大鼠,留取梗阻侧肾组织行HE染色和Masson染色,光镜下观察各组大鼠肾组织病理变化,免疫组化和Western印迹检测肾组织TGF-β1、Smad2和Smad7蛋白表达水平。结果阿利吉仑可明显减轻大鼠肾间质炎性细胞浸润、纤维组织增生及肾小管扩张和萎缩。免疫组化和Western印迹结果均显示:与Sham组相比,UUO组TGF-β1、Smad2表达明显上升,而Smad7表达明显下降(均P<0.05);与UUO组相比,aliskiren组TGF-β1、Smad2表达明显下降,Smad7表达明显上升(均P<0.05)。结论 TGF-β1/Smad信号通路与肾间质纤维化有关,阿利吉仑可抑制肾间质纤维化,其机制可能与下调TGF-β1、Smad2的表达和上调Smad7的表达有关。