洛沙坦对糖尿病肾病大鼠肾脏MMP-9、TIMP-1影响的研究

[目的]探讨洛沙坦对糖尿病肾病大鼠肾脏MMP-9、TIMP-1的影响.[方法]采用链脲霉素诱导的糖尿病肾病大鼠模型,予洛沙坦治疗16周后.测血肌酐、尿素氯,肾组织HE、Masson染色,计算肾小球硬化指数,Western Blot方法测定肾脏Ⅳ型胶原、MMP-9、TIMP-1蛋白表达量.[结果]模型组肾组织Ⅳ型胶原、TIMP-1蛋白表达均高于正常组(P＜0.01),模型组MMP-9蛋白表达低于正常组(P＜0.01);洛沙坦组血尿素氮、肾小球硬化指数及肾组织Ⅳ型胶原、TIMP-1蛋白表达均低于模型组(P＜0.01;P＜0.05),洛沙坦组MMP-9蛋白表达高于模型组(P＜0.01).[结论]洛沙坦可能通过抑制TIMP-1,增加MMP-9的表达,减少Ⅳ型胶原积聚,减轻肾小球硬化.     

动态观察依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1,CTGF,Smad7和α-SMA的影响

目的：动态观察血管紧张素转换酶抑制剂依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子（transforming growth factor-β,TGF-β1)、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）、Smad7和平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA)表达的影响,探讨依那普利对肾小管上皮细胞转分化的影响。方法：雄性SD大鼠64只,采用单侧输尿管梗阻模型,将实验大鼠分为假手术组（16只）、模型组（24只）和治疗组（24只）,治疗组从造模前24 h开始以依那普利10 mg/（kg·d）灌胃。分别于造模后3,7,14,21 d取梗阻侧肾组织进行HE染色,观察肾脏组织病理结构变化,并进行肾间质损伤指数评分;应用real-time PCR法检测肾组织TGF-β1和CTGF mRNA的表达,应用Western 免疫印迹检测肾组织α-SMA,Smad7和CTGF蛋白的表达。结果：随着梗阻时间的延长,单侧输尿管梗阻模型鼠肾间质损伤指数评分逐渐增加。TGF-β1和CTGF mRNA以及α-SMA和CTGF蛋白表达逐渐增加,Smad7蛋白表达逐渐减少。依那普利治疗后,肾间质损伤指数下降,TGF-β1和CTGF mRNA以及α-SMA和CTGF蛋白表达较模型组降低,Smad7蛋白表达较模型组增加,依那普利对各时间点 TGF-β1 mRNA的表达均有明显的下调作用,对 CTGF mRNA,α-SMA,CTGF和Smad7蛋白对以单侧输尿管梗阻术后3,7,14 d作用最明显。结论：依那普利可减轻梗阻肾间质纤维化, 以单侧输尿管梗阻后14 d内效果最好,这一作用可能与抑制肾组织TGF-β1,CTGF和α-SMA的表达,增加肾组织Smad7的表达有关。     

氯沙坦通过ERK1/2 MAPK途径抑制高糖诱导小鼠系膜细胞CTGF表达

目的: 研究高糖环境下, 氯沙坦对CTGF的影响以及其作用机制.方法: 体外培养小鼠系膜细胞株(MMCs), 用高糖(25 mmol/L葡萄糖)刺激细胞分别作用24 h、 48 h、 72 h, 用Western blot方法检测磷酸化ERK1/2的表达.再将细胞分为低糖组(5.6 mmol/L葡萄糖), 山梨醇组(5.6 mmol/L葡萄糖+19.4 mmol/L山梨醇), 高糖组(25 mmol/L葡萄糖), 氯沙坦组(25 mmol/L葡萄糖+10-5 mol/L氯沙坦)以及 ERK抑制剂组(25 mmol/L葡萄糖+ 25 μmol/L PD98059), 48 h后采用Western blot方法检测磷酸化ERK1/2的表达, 72 h后采用Real-time PCR方法及Western blot分别检测 CTGF mRNA表达量以及蛋白的表达.结果: 高糖刺激小鼠系膜细胞后, ERK1/2磷酸化的蛋白表达逐渐增高, 呈现一定时间依赖性.与低糖组相比, 高糖组磷酸化ERK1/2、 CTGF的蛋白表达明显增加(P<0.01), 而与高糖组相比, 氯沙坦组以及ERK抑制剂组磷酸化ERK1/2的蛋白表达以及CTGF的蛋白均明显下降有统计学意义(P<0.05).与低糖组相比, 高糖组CTGF mRNA表达量明显增加(P<0.01), 而与高糖组相比, 氯沙坦组以及ERK抑制剂组CTGF mRNA表达量明显下降, 且有统计学意义(P<0.01).结论: 氯沙坦可抑制高糖对CTGF的诱导作用, 其机制可能与抑制ERK1/2 MAPK途径有关.     

依那普利干预后TGF-β、p27在大鼠肾间质纤维化中的表达

目的:研究单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠血管紧张素转化酶抑制剂依那普利干预后肾组织中TGF-β和p27表达的变化, 并探讨干预后两者之间的关系, 以进一步阐述其抗纤维化机制.方法:30只SD大鼠随机分成假手术组(sham-operated rates, SOR)、 UUO模型组、依那普利治疗组(UUO+ Enalaparil treated group , T-UUO).于术后第14天分别处死各组大鼠10只.用HE染色动态观察梗阻肾脏病理变化, 免疫组织化学法测定TGF-β、 p27, RT-PCR法测定TGF-β、 p27mRNA的水平.结果:T-UUO组的肾间质损伤指数明显降低;T-UUO组与UUO组比较TGF-β的表达减弱( P <0.05), p27的表达增强( P <0.01), T-UUO组TGF-β与p27成负相关.结论:依那普利能减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度;UUO大鼠肾间质纤维化模型中, 依那普利抗间质纤维化机制可能与下调了肾组织中TGF-β的表达, 继而使p27的表达上调有关.     

卡托普利对博莱霉素致小鼠肺纤维化的防治作用及其机制探讨

目的 研究血管紧张素转化酶抑制剂卡托普利对博莱霉素致小鼠肺纤维化的防治作用.方法 7～10周龄雄性ICR小鼠45只分3组,分别为模型组、卡托普利组与正常对照组.模型组与卡托普利组经尾静脉注射博莱霉素10mg/(kg·d)14 d建立稳定的肺问质纤维化模型,卡托普利治疗组于注射博莱霉素前24 h予卡托普利(12.5 mg/kg·d)灌胃,并与正常ICR小鼠进行对照.第28天收获肺组织,左肺行HE和Masson染色,右肺组织应用Real-time PCR检测Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TGFβ1及结缔组织生长因子CTGF mRNA表达,行Western-blot检测CTGF蛋白表达.结果 卡托普利治疗组与模型组比较,小鼠肺泡炎、纤维化程度有所改善,但无统计学意义.卡托普利能显著下调模型组肺组织中升高的Collagen Ⅰ、TGFβ1的mRNA水平及CTGF的mRNA与蛋白水平.但Collagen Ⅲ的mRNA水平并无明显改变.结论 卡托普利有减轻BLM诱导的肺泡炎及肺纤维化程度的趋势,提示卡托普利有一定的抗肺间质纤雏化作用;抑制TGF-β1及CTGF在肺组织中的表达,可能是其作用机制之一.     

中南地区结缔组织病住院患者10年死亡趋势：2005—2014

目的：分析结缔组织病(connective tissue diseases,CTDs)住院患者在10年期间死亡原因等的变化趋势。 方法：采用回顾性分析的方法,收集中南大学湘雅医院风湿免疫科在2005年1月1日至2014年12月31日期间,确诊的 CTDs住院患者中所有死亡病例的所有临床资料。结果：10年期间CTDs住院患者的总体住院病死率为15.68‰。在 CTDs患者的3大类死亡原因中,疾病本身占44.71%,感染占42.94%,合并症占12.35%。其中,疾病本身的死因构成比 和住院病死率呈逐年下降趋势,感染和合并症的死因构成比呈逐年上升趋势。2013—2014年,感染成为最主要的死 亡原因,其死因构成比为51.06%。合并肺间质病变的CTDs患者与没有合并肺间质病变的CTDs患者相比,前者的生存 时间明显缩短,其死亡风险是后者的1.722倍。在各种CTDs中,特发性炎性肌病患者的总住院病死率最高(45.98‰), 系统性硬化症和系统性红斑狼疮患者的因疾病本身死亡比例最高,特发性炎性肌病患者的因感染死亡比例最高,类 风湿关节炎的患者因合并症死亡比例最高。结论：在CTDs住院患者中,因疾病本身导致死亡的死因构成比和住院病 死率均呈逐年下降趋势;因感染和合并症导致死亡的死因构成比呈逐年上升趋势,且感染成为第一位死因。CTDs合 并肺间质病变患者生存时间缩短,死亡风险增加。     

p27和TGF-β在大鼠肾间质纤维化中的表达及关系

目的:研究单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织p27的表达, 同时观察TGF-βmRNA在各组的变化, 探讨UUO模型中 TGF-β与p27的关系.方法:60只SD大鼠随机分成假手术组(SOR)、 UUO模型组.于术后第7、 14、 21天分别处死各组大鼠10只.用HE染色动态观察肾脏病理变化, 免疫组织化学法测定p27的蛋白表达及动态变化, RT-PCR法测定p27mRNA和TGF-βmRNA的水平.结果:SOR组肾小管上皮细胞p27蛋白及肾皮质p27mRNA的表达均强, UUO组随着间质纤维化程度的加重, p27的表达逐渐减弱, 而TGF-βmRNA随着肾间质纤维化程度的加重, 其表达呈上升趋势;UUO组TGF-βmRNA与p27mRNA成负相关.结论:p27参与了UUO大鼠肾间质纤维化的发病过程;UUO大鼠肾间质纤维化模型中TGF-β促纤维化机制可能与p27的下调相关.     

P21在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中的表达及依那普利对其表达的调节

目的：动态观察P21在单侧输尿管梗阻肾间质纤维化大鼠模型中的表达，以及依那普利对其表达的调节。方法：将SD大鼠随机分为假手术组（SOR组）、单侧输尿管结扎组（UUO组）和依那普利治疗组（EnT组）。用免疫组织化学的方法检测3组大鼠术后7，14和21d肾小管上皮细胞P21的表达；用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）的方法检测肾脏p21 mRNA的变化；并观察依那普利对肾脏P21表达的调节。结果：在UUO大鼠模型早期，肾小管上皮细胞P21以及肾脏p21 mRNA的表达即有明显增高，随着梗阻时间的延长，P21的表达逐渐增强；依那普利能明显抑制P21的表达。结论：P21在UUO大鼠肾小管上皮细胞高表达，依那普利可抑制其表达。P21可能参与肾小管间质纤维化的发病过程。     

p27在大鼠肾间质纤维化中的表达及依那普利对其干预后的影响

目的：研究单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）大鼠肾小管上皮细胞p27的表达与肾间质纤维化的关系，并探讨血管紧张素转化酶抑制剂依那普利干预后p27表达的变化，以进一步阐述其抗纤维化机制。方法：90只SD大鼠随机分成假手术组（sham—operated rates，SOR）、UUO模型组、依那普利治疗组（UUO＋Enalaparil treated group，T—UUO）。于术后第7，14，21天分别处死各组大鼠10只。用HE染色动态观察肾脏病理变化，免疫组织化学法测定p27的表达及动态变化．RT—PCR法测定p27 mRNA的水平。结果：SOR组肾小管上皮细胞p27蛋白及肾皮质P27 mRNA的表达均强，UUO组随着间质纤维化程度的加重，p27 mRNA的表达逐渐减弱，而依那普利在UUO术后第14，21天能增强p27的表达。结论：（1）p27参与了UUO大鼠肾间质纤维化的发病过程；（2）UUO大鼠肾间质纤维化模型中依那普利抗间质纤维化机制部分是通过增强p27的表达。     

氯沙坦通过ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶途径抑制高糖诱导的小鼠系膜细胞结缔组织生长因子表达

糖尿病肾病(DN)是糖尿病严重的慢性并发症之一,其主要病理特征是由细胞外基质(ECM)增多引起的肾小球硬化.血管紧张素(Ang)受体拮抗剂氯沙坦可有效地延缓肾小球硬化,被用于DN的治疗.高糖可诱导肾脏系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)的表达,从而促进ECM积聚和组织器官的纤维化.丝裂原活化蛋门激酶(MAPK)作为真核细胞胞质内的信号转导终末通路,与DN的发病密切相关[1].本研究观察高糖是否通过ERK1/2 MAPK途径调节小鼠系膜细胞CTGF的表达,以及氯沙坦对CTGF的作用是否也与ERK1/2 MAPK通路相关.