人参总皂甙诱导人骨髓基质细胞表达GM-CSF的实验研究

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人骨髓基质细胞表达GM—CSF的影响及其与人粒单系血细胞发生的关系。方法：采用造血祖细胞与骨髓基质细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。结果：TSPG能显著刺激粒单系造血祖细胞(CFU—GM)增殖；经TSPG诱导制备的骨髓基质细胞条件培养液富含GM—CSF样活性；TSPG能显著促进骨髓基质细胞的GM—CSF蛋白和mRNA表达。结论：TSPG可能通过直接和/或间接途径促进造血诱导微环境中的骨髓基质细胞合成和分泌GM—CSF，进而促进CFU—GM的增殖分化。     

基质细胞对小鼠骨髓单个核细胞体外扩增的促进作用

目的 阐明基质细胞在造血细胞体外扩增中的作用。方法 采用骨髓基质细胞培养、骨髓单个核细胞（BMMNC）体外液体培养和各种造血相细胞集落培养技术,进行基质细胞支持条件下骨髓单个核细胞体外扩增的研究,并与单纯细胞因子支持下的细胞扩增进行比较。结果 在照射后细胞层存在的条件下,同时含有细胞因子组合的培养体系,对细胞总数和集落形成细胞数的扩增作用明显高于其它各组。结论 基质细胞对细胞因子作用下的造血细胞体外扩增有明显的促进作用。     

趋化素样因子（CKLF1）对骨髓细胞增殖活性的研究

目的 研究趋化素样因子1（CKLF1）对造血功能的调节作用。方法 利用MTT法,检测CKLF1真核细胞表达载体转染上清在液体培养基中,对人低密度骨髓细胞和小鼠骨髓细胞的增殖调控作用;并在兰固体培养基中,观察其对人低密度骨髓细胞集落形成的刺激作用。结果 COS－7细胞表达的CKLF1能明显促进人和小鼠骨髓细胞的增殖,并能促进人骨髓细胞的集落形成,与GM－CSF有协同刺激作用。结论 CKLF1能促进人和小鼠骨髓造血干／祖细胞的增殖和分化。     

小鼠骨髓内皮细胞条件培养液支持卵黄囊造血干/祖细胞的体外生长

目的;观察小鼠骨髓内皮细胞条件培养液（mBMEC-CM)对卵黄囊造血干／祖细胞体外生长的支持作用。方法：取妊娠第8．5天的卵黄囊,经消化后获得卵黄囊细胞,取卵黄囊非贴壁细胞加入含10％mBMEC-CM和10％FBS的DMEM中培养24h后,收集细胞做半固体培养。结果：mBMEC-CM在液体培养体系中能扩增卵黄囊造血干／祖细胞使粒－巨噬系集落形成单位（granulocyte-macrophage colony forming unit,CFU-GM)和高增殖潜能集落形成细胞（high proliferative potential-colony forming cell,HPP-CFC)的产率增加,经24h液体培养后的CFU－GM和HPP－CFC的数目分别为培养0h对照组的119．5％和130．8％（P＜0．05）;mBMEC-CM联合flt3配基（flt3 ligand,FL)和血小板生成率（,TPO)后,其扩增CFU－GM和HPP－CFC的能力明显增加,mBMEC-CM联合FL和TPO经24h液体培养后的CFU－GM和HPP－CFC的数目分别为培养0h对照组的132．0％和176．9％（P＜0．01）。结论：mBMEC-CM对卵黄囊造血干／祖细胞的维持和扩增有促进作用,mBMEC-CM联合FL和TPO对卵黄囊造血干/祖细胞的扩增作用明显增强。     

胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用

目的 :探讨胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用。方法 :联合应用胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子如重组人干细胞因子 (rh SCF)、IL - 3、IL - 6、粒巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)、粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)、促红细胞生成素 (EPO)等先后对成人骨髓单个核细胞及 CD34 + 富集细胞培养 5 d至 2周。结果 :胎儿骨髓基质细胞与上述细胞因子具有良好的协同作用 ,CD34 +富集细胞以胎儿骨髓基质细胞 +SCF+IL- 3+IL- 6 +G- CSF+EPO培养 2周 ,可使细胞总数、粒 -单系造血祖细胞 (CFU- GM)、早期红系造血祖细胞 (BFU- E)及 CD34 +细胞分别扩增 (119.6± 30 .9)倍、(5 4.6± 17.4)倍、(2 5 .2± 4.4)倍、(11.1± 4.2 )倍。结论 :胎儿骨髓基质细胞可协同上述外源性细胞因子支持成人骨髓造血祖细胞的有效扩增     

姜黄素对小鼠CFU—GM及WEHI—3B细胞增殖的影响

用体外半固体集落培养方法，观察不同浓度姜黄素对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨髓粒－巨噬系祖细胞及骨髓单核系白血病干细胞增殖的影响。结果显示：姜黄素呈剂量依赖性抑制ＣＦＵ－ＧＭ和ＷＥＨＩ－３Ｂ细胞增殖，其半抑制剂量分别为１．０３６＊１０＾－５ｍｏｌ．Ｌ＾－１和１．２２０＊１０＾－６ｍｏｌ．Ｌ＾－１。表明姜黄素对ＷＥＨＩ－３Ｂ白血病细胞的抑制作用强于对ＣＦＵ－ＧＭ的作用。     

重组人白细胞介素3和白细胞介素6对骨髓基质细胞生长的调节作用

目的了解重组人白细胞介素３（ｒｈＩＬ－３）和重组人白细胞介素６（ｒｈＩＬ－６）对骨髓造血微环境的调节作用。方法应用成纤维细胞体外集落形成法，观察了ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６对成纤维细胞集落（ＣＦＵ－Ｆ）体外生长的影响。结果ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６能显著地刺激ＣＦＵ－Ｆ的生长，两者联合应用时对ＣＦＵ－Ｆ生长的刺激作用明显强于两者单用，表现出协同效应。结论ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６可促进基质细胞生长，对促进化疗和（或）放疗及骨髓移植后造血微环境的恢复和重建具有重要的临床应用潜能     

The effects of total saponins of panax ginseng on hematopoietic progenitor cells in healthy humans and aplastic anemia patients

Ginseng is said to have beneficial effects on anemia. The proliferation effects of total saponins of Panax ginseng (TSPG) on hematopoietic progenitor cell in healthy individuals and 29 patients with aplastic anemia (AA) were observed through bone marrow cultures of burst forming unit-erythroid (BFU-E), colony forming unit-erythroid (CFU-E) and colony forming unit-granulocyte/macrophage (CFU-GM) in vitro compared with methyltestosterone (MT). The results suggest TSPG might prompt the proliferation of normal progenitor cells at a concentration of 20 μg/ml. The numbers of BFU-E,CFU-E and CFU-GM increased by 37.8±2.9%, 31.4±2.9% and 33.3±4.0% respectively overthe controls; furthermore TSPG was still useful to BFU-E, CFU-E growth without Epo in vitro, although the colony numbers were much lower. Otherwise MT was useless to CFU-GM. Of the 29 patients with AA, 14 who responded to MT showed sensitivity to TSPG in marrow culture (the rising rate of colony formation exceeded 30%), but immune-mediated AA (patient’s peripheral blood mononucleated cell suppressed normal hematopoiesis) and stem cell decreased AA (few of colonies were formed) showed almost no expression for TSPG activity because of the immunological suppression system and the absence of progenitors.     

几种组织培养上清液对造血祖细胞体外增殖分化的比较

目的：寻求既经济又有效的造血生长因子样活性物质。方法：采用造血祖细胞体外培养与造血生长因子生物活性检测等实验血液学技术,检测胎肌培养上清液、骨液基质细胞培养上清液、胸腺细胞培养上清液与脾细胞培养上清液对造血祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ、ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｍix增殖分化的影响。结果胎肌培养上清液和对ＣＦＵ－ＧＭ和ＣＦＵ－Ｍix的体外地产殖与分化有明显刺激作用。而胸腺与脾细胞条件培养上清液对ＢＦＵ－Ｅ的生长有显著促进作用。结论：胎肌培养上清液中可能含ＧＭ－ＣＳＦ样活性物质。而胸腺与脾细胞培养上清液具有较高ＩＬ－３样活性,可以利用组织与细胞培养上清液替代重组造血生长因子进行造血细胞的实验研究和临床诊断。     

脐血造血细胞体外集落培养最佳收获时机的探讨

目的 探讨脐血（CB）多系造血集落培养在不同培养条件下脐血造血细胞体外扩增的最佳收获时机。方法 将从新鲜CB标本中分离出的单个核细胞（MNC）分别接种于已建立的无血清培养基，该培养基分别含单用人骨髓基质细胞、单用细胞因子及细胞因子联合入骨髓基质细胞（HBMSC）支持培养体系。在0、6、10及14d各时间点分别取细胞进行巨细胞集落形成单位（CFU—MK）、红乐爆式集落形成单位（BFU—E）及粒单细胞集落形成单位（CFU—GM）培养。结果在体外培养过程中，第10d时各组CFU—MK、BFU—E及CFU—GM数均高于组内其它时间点（P〈0．05）；在含HBMSC支持培养的组集落生成数优于其它组（P〈0．05）。结论 脐血MNC体外培养过程中，第10d可能是收获的最佳时机。FIBMSC能更好地维持造血干／祖细胞的活性，使其集落形成能数得到有效扩增。     

巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤小鼠造血干细胞移植后重建造血能力的影响简

目的 研究藏药巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤后机体骨髓造血干细胞功能的影响,探究其“补益”作用机制.方法 将经60Co γ射线照射＋环磷酰胺腹腔注射方法得到的放射线-化学复合损伤小鼠分为巴桑母酥油丸组、生理盐水组、空白组,分别灌胃巴桑母酥油丸、生理盐水及自然恢复14d后,将其骨髓作为供体移植给受致死剂量γ射线照射的同种受体小鼠,再检测受体小鼠外源性脾集落、骨髓造血祖细胞集落产率、骨髓细胞造血干细胞抗原-1（Sca-1）阳性细胞率,并与灌胃.结果 巴桑母酥油丸组的外源性脾集落、骨髓早期红系祖细胞集落（BFU-E）、粒-巨噬系祖细胞集落（CFU-GM）产率均显著高于空白组和生理盐水组（P＜0.05）,而晚期红系祖细胞集落（CFU-E）、巨核系祖细胞集落（CFU-Meg）、骨髓细胞Sca-1＋细胞率并不离于自然恢复的空白组（P＞0.05）.结论 巴桑母酥油丸可以提高放射线-化学复合损伤小鼠骨髓造血干细胞移植后造血重建能力,提示巴桑母酥油丸可经改善骨髓造血干细胞功能发挥其对放射线-化学复合损伤机体“补益”作用.     

COLONY GROWTH AND GRANULOPOIETIC EFFECTS OF HUMAN BONE MARROW FIBR.OBL.AST COLONY-FORMING CELLS IN VITRO

Human bone marrow derived fibroblast colony- ;forming cells (F-CFU) and granulocytemacrophage colony-forming cells (GM-CFU) were simultaneously studied by liquid and semi-solid agar culture in 26 normal individuals and 33 hematological disorders iii 13 patients with aplastic anemia, 9 acute non lymphocytic leukemia, 6 acute Iymphocytic leukemia and 5 malignant lymphoma. After 2 weeks of liquid culture, the growth rates and morphological charac teristics of F-CFU from aplastic and leukemic mar rows did not differ markedly from the normal, except that patient groups show a wider range of colony number. The F-CFU incidence in patients with malignant lymphoma was lower than normal. Growth of GM-CFU from patients with aplastic anemia and Ieukemia was very poor. GM-CFU stimulation was not detected iii any supernatants of F-CFU cultures. Confluent mono layers of fibroblast cells grown from normal and aplastic marrow could directly stimulate the growth cf GM-CFU of normal marrow cells and little GM- CFU was observed in areas lacking fibroblast cells. Fibroblast monolayers derived from acute leukemic marrows were poor stimulators of GM-CFU, this abnormality in interactions between stromal cells and hematopoietic progenitors may be important in the pathogenesis and clinical manifestation of leukemia. This study suggests that bone marrow fibroblast cells may directly affect hematopoietic stem cell proliferation and differentiation and supports the hypothesis that marrow fibrosis observed in patients with leukemia is of non-ncoplastic origin and may be a reactive phenomenon. Analysis of the pathoge- nesis of aplastic patients with defective hematopoie tic microenvironments may be possible.     

补肾解毒活血法对环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制的预防作用研究

目的研究补肾解毒活血法对环磷酰胺所致骨髓抑制的预防作用及机制。方法昆明小鼠60只,随机分成空白组、模型组和中药预防组,中药预防组连续灌胃给药10 d,空白组和模型组给予等体积的生理盐水。造模后,各组随机抽取10只,于造模前1 d及造模后第1、3、5、7、10天检测外周血象,其余10只小鼠在造模后第1天检测骨髓有核细胞计数、骨髓细胞凋亡情况、造血生长因子及培养造血祖细胞集落。结果造模后外周血WBC、PLT,骨髓有核细胞计数,粒—巨噬系集落形成单位（colony forming unit-granulocyte macrophage,CFU-GM）,造血祖细胞集落形成单位及造血生长因子中药预防组均显著高于模型组（P〈0.01或P〈0.05）。中药预防组总凋亡率远低于模型组（P〈0.01）。结论补肾解毒活血法可以减轻环磷酰胺对小鼠的骨髓抑制毒副作用,明显促进骨髓抑制小鼠WBC、PLT、CFU-GM及骨髓有核细胞的增加,抑制环磷酰胺所致的细胞凋亡。     

电离辐射对胎鼠皮肤间充质干细胞支持骨髓粒系造血作用的影响

目的：观察不同剂量的X射线照射对体外培养的胎鼠皮肤间充质干细胞(MSCs)支持造血细胞增殖作用的影响,为提高造血干细胞体外扩增效率提供一种更为有效的方法,进而为造血干细胞移植提供一个新的途径。 方法：分别用不同剂量的X射线照射培养的胎鼠皮肤MSCs层,然后将骨髓细胞种植于该细胞层上,扩增后不同时间(0~12 d)进行骨髓CFU-GM集落培养,同时取经X射线照射的皮肤MSCs的上清液进行骨髓CFU-GM、CFU-E及BFU-E培养,观察射线对胎鼠皮肤MSCs造血支持作用的影响。 结果：6、8和10 Gy剂量X射线照射胎鼠皮肤MSCs与骨髓细胞共同作用7 d时,骨髓祖细胞集落显著增加,其中6 Gy组增加最为明显,CFU-GM是0 Gy组的2.17倍。6、8和10 Gy剂量X射线照射培养皮肤的上清液体外亦可刺激骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E的生长,与0 Gy组比较差异均有显著性(P<0.05)。其中6 Gy组增加最为明显,分别达0 Gy组的1.81倍、3.94倍和3.51倍,集落亦明显加大。 结论：一定剂量X射线照射胎鼠皮肤MSCs,其体外支持造血的作用增强,无论照射后的单纯MSCs细胞层还是上清液都可使骨髓细胞集落数增多。     

Multidrug resistance pglycoprotein function of bone marrow hematopoietic cells and the reversal agent effect

Intheprocessofchemotherapyfortu-mors,multidrugresistance(MDR)P-gly-coprotein(P-gp)expressionoftenoccurstoinduceMDR.PreviousstudiesconfirmedthatmanynormaltissuecellsalsoexpressedP-gp['J.So,whenthedrugsthatdisturbP-gpfunctionwereusedtoreverseMDRofthetumorceIls,thenormalP-gpfunctionofthesecellswouldbeaffectedtocausedamage.Recently,new-typeMDRreversalagentswerebeingdeveIopedandtheirphar-macologicalactionwasagainsttheP-gponthetumorcellmembrane[2].However,theeffectsoftheMDRreversalagentson…     

体外扩增造血细胞重建小鼠造血功能的实验研究

目的 探讨体外扩增造血祖儿定向诱导功能血红细胞生成的条件及扩增细胞重建长期造血能力的维持。方法 应用免疫磁珠法（ＭＡＣＳ）分离纯化脐带血ＣＤ３４＾＋造血干或祖细胞,在体外液体培养体系中经不同细胞因子的组合进行扩增和定向诱导,并将扩增细胞移植经亚致死剂量照射的ＳＣＩＤ小鼠。结果 ＦＬ、干细胞因子血小板生成素（ＴＰＯ）等细胞因子的不同组合可分别扩增细胞总数、粒系及巨核系造血祖细胞、ＣＤ３４＾＋ＣＤ３８     

转导JAK2基因可促进原始多能造血细胞在体外的长期扩增

目的 探讨激活JAK2信号通路是否能够长期扩增调控造血干祖细胞并评价扩增细胞的定向分化潜能。方法 构建克隆1个含有JAK2基因和二聚化化学诱导物(AP20187)结合位点所组成的逆转录病毒载体。AP20187可以使JAK2二聚化激活细胞内信号传导。将该载体转人小鼠原始骨髓造血细胞,在无血清培养基中,将JAK2转基因的细胞分为：①空白对照组,②AP20187组,③细胞因子联合组[干细胞因子(SCF) Flt3-配体(Flt3-L)],④。AP20187 SCF Flt3-L组。对扩增的细胞进行免疫表型、定向分化、造血祖细胞集落分析及脾集落形成单位的研究。结果 只有AP20187 SCF Flt3-L组能够使JAK2转基因的骨髓细胞持续大量对数级增殖。约8d时,细胞数量可以达到扩增前的10^19倍。扩增的细胞经流式细胞仪检测为：Seal阳性细胞为52％～98％,C-kit阳性率为56％～69％,CD34阳性率40％～85％;而其他表型TER119阳性0～20％,CD41阳性5％～36％,B220阳性12％～46％,Grl阳性6％～17％,CD11b阳性35％～46％,CD3为阴性。扩增细胞在SCF/粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)／白介素(IL)-3条件下,可分化形成明显的粒细胞和巨噬细胞;在SCF／红细胞生成素(EPO)条件下,可分化为红细胞;在SCF／血小板生成素(TPO)／IL-11条件下,可分化为巨核细胞。祖细胞半固体集落培养,可以形成红系爆式集落形成单位(BFU-E)、粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)、混合集落形成单位(CFU-Mix)以及IL-7产生的B淋巴细胞集落,并可在照射过的小鼠体内形成脾集落形成单位。结论 JAK2介导的转基因骨髓造血细胞可以长期扩增调控,扩增的细胞仅限于JAK2转基因的细胞,并且具有多系分化的潜能。     

转LacZ基因骨髓间充质干细胞体内造血分化的初步研究

目的　初步探讨小鼠骨髓间充质干细胞在体内造血细胞分化的潜能。方法　利用转LacZ基因小鼠MSCs输注X射线亚致死量照射的BALB/C小鼠,2个月后取骨髓细胞作体外甲基纤维素培养和X -Gal染色,取肝脏X -Gal染色。结果　MSCs输注组和对照组骨髓细胞体外集落培养均能形成鹅卵石样造血细胞集落,经X -gal组化染色后,输注组部分造血集落产生蓝绿色,对照组没有颜色变化。肝脏X -Gal染色输注组部分产生蓝色,对照组没有颜色变化。结论　小鼠MSCs具有向造血细胞分化的潜能。     

HLA单倍型相合骨髓移植的骨髓粒单祖细胞和造血功能的动态观察

本文报告1例HLA单倍型相合急性淋巴细胞白血病骨髓移植成功造血功能恢复情况。通过与HLA相合者比较,HLA单倍型相合骨髓移植后不影响骨髓粒单祖细胞(CFU-GM)和造血功能恢复速度;急性严重移植物抗宿主病(GVHD)可抑制CFU-GM生长和造血功能的恢复。骨髓CFU-GM测定不但是骨髓移植植活的最早观察指标,而且可能是骨髓抑制的最早反应。     

Rhodaminel23介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响

目的　探讨Rhodamine12 3(Rh12 3)介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响。方法　以C5 7B/ 6小鼠为供鼠 ,BALB/c小鼠为受鼠 ,脾脏淋巴细胞混合培养 ,比较单纯Rh12 3、单纯激光照射、光动力学疗法对小鼠混合淋巴细胞增殖 (MTT法 )及骨髓粒单核巨噬细胞集落形成 (CFU -GM)的影响 (甲基纤维素培养基法 ) ;流式细胞仪检测混合淋巴细胞中CD3 CD6 9 阳性率。结果　Rh12 3组及单纯激光组对细胞增殖无显著影响 ,光动力学组 2 0mW/cm2 以下剂量激光对细胞增殖无明显影响 ,30mW/cm2 以上明显抑制细胞增殖 ;30mW/cm2 以下剂量对CFU -GM集落无明显影响。光动力学疗法后细胞培养 2 4h ,CD3 CD6 9 表达明显下降。结论　光动力学疗法在 30mW/cm2 激光照射时可抑制淋巴细胞增殖 ,降低早期活化T细胞表达 ,但不影响骨髓CFU -GM集落形成