PLK1基因缄默在K562细胞凋亡中的作用

目的观察缄默PLK1基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对K562细胞内PLK1表达和细胞凋亡的影响,探讨PLK1在白血病发病中的作用,寻找更为有效的白血病治疗途径。方法设计合成针对PLK1基因1416~1436位点的shRNA片段,并将其克隆于绿色荧光蛋白的表达载体pEGFP-H1中,命名为pEGFP-H1/PLK1。通过电穿孔转染法将其导入K562细胞中,分为对照组、pEGFP-H1空载体转染组和pEGFP-H1/PLK1shRNA重组质粒转染组,转染后24,48h,分别通过RT-PCR和Western blot检测各组细胞PLK1基因和蛋白水平的变化,以MTT方法测各组细胞的增殖活性,比色法检测各组细胞的半胱天冬酶3(caspase-3)蛋白酶活性,并通过流式细胞仪检测各组细胞的凋亡和G2/M期转变情况。结果PLK1mRNA相对水平(与内参的灰度比值)对照组为1.25±0.07,空载体转染24,48h组分别为1.21±0.08和1.23±0.09,shRNA重组质粒转染24,48h组分别为0.52±0.04和0.25±0.02,shRNA重组质粒转染组较其他两组明显降低(P<0.01)。各组细胞PLK1的蛋白水平变化趋势与PLK1mRNA表达相似。相应地,对照组、空载体转染48h组、shRNA重组质粒转染24,48h组的凋亡率分别为(8.3±0.6)%、(8.7±0.7)%、(49.7±3.8)%和(82.3±6.9)%,后两者与前两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。此外,与对照组和空载体转染组相比,shRNA重组质粒转染组的细胞增殖能力明显下降(P<0.05),且位于G2/M期的细胞较对照组和空载体转染组显著增加。以上结果均于转染后48h时较明显(P<0.05)。结论构建的shRNA能明显抑制转染细胞PLK1的表达和增殖,并可促进转染细胞的凋亡,并使停留于G2/M期的细胞显著增加。     

阿司匹林体内作用对复合诱聚剂诱导血小板聚集的影响

阿司匹林影响血小板聚集功能的研究已有大量报道,一般认为阿司匹林可以抑制血小板聚集和延长出血时间,通常多用单一诱聚剂观察血小板聚集的抑制程度。本文报告在临床实验研究中设计复合     

高脂血症患者血小板体积及有关参数的研究

本文报道242例高脂血症患者血小板(PLT)、平均血小板数(MPLT)及平均血小板体积(MPV)等参数的测定结果,其中高胆固醇并高甘油三酯患者,PLT、MPLT及巨大血小板比例(Macro-PLT)高于正常,MPV正常;而单纯高胆固醇或高甘油三酯患者,上述指标与正常人无显著性差异。提示高胆固醇并高甘油三酯患者,存在血小板生成动力学异常,其血小板的破坏增加,生成率加速、但处于一种高水平的动态平衡之中。这可能是高脂血症出现高凝状态的原因之一。同时表明此类患者使用抗血小板疗法具有一定的合理性和必要性。     

骨髓或外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞与aGVHD的关系

目的 研究患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)前后骨髓或外周血单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞(以下简称CD4+CD25+Foxp3+T细胞)的比率、Foxp3 mRNA和Foxp3蛋白的表达与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系.方法 选择37例行HIA相合异基因造血干细胞移植(allo-HSCT))的患者作为研究对象.采用流式细胞术检测患者allo-HSCT前7天(-7 d)、移植当天(0 d)、移植后30天(+30d)、+60 d和+90 d时骨髓或外周血单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞所占的比率;定量聚合酶链反应(PCR)检测Foxp3 mRNA相对表达量;蛋白印迹(Western blot)法检测Foxp3的蛋白表达水平.结果 37例患者存移植后100 d内发生aGVHD 13例(aGVHD组),未发生aGVHD 24例(无aGVHD组).CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比率在0 d时最低,与-7、+30、+60、+90d时比较.差异均有统计学意义(P<0.01);与aGVHD组比较,无aGVHD组患者的CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比率明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).aGVHD组患者移植后Foxp3的表达水平逐渐升高,但明显低于无aGVHD组,尤其在+60和+90 d时的差异有统计学意义(P<0.01).Western blot法检测结果 表明,aGVHD组受者的Foxp3蛋白表达也明显低于无aGVHD组.结论 CD4+CD25+Foxp3+T细胞对防止发生aGVHD具有重要作用,监测患者骨髓或外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比率可以预测aGVHD的发生.     

血浆D二聚体和GMP-140测定在DIC诊断中的意义

目的：探讨分子标志物在弥散性血管内凝血（DIC）诊断中的价值。方法：分别检测DIC患者20例（DIC组）、DIC疑诊组11例（DIC疑诊者）和正常人10例（正常对照组）血浆D二聚体和血小板颗粒膜蛋白（GMP－140）水平。结果：以上三组血浆D二聚体水平分别为4．43±3．43，2．03±0．17，0．36±0．17（mg／L）。血浆GMP－140水平分别为53．78±27．55，33．32±16．50，17．29±4．84（ng／ml）。DIC组血浆D二聚体和GMP－140显著高于DIC疑诊组和正常对照组，而DIC疑诊组与正常对照组差异尤显著性。动态观察发现，血浆D二聚体升高的6例DIC疑诊者有3例随后转变成DIC。结论：血浆D二聚体和GMP－140是DIC时敏感指标，监测二指标有助于DIC的早期诊断。     

恶性肿瘤患者血栓弹力图检测的临床意义

目的：探讨恶性肿瘤患者体内凝血状态。方法：对65例恶性肿瘤患者于治疗前进行血栓弹力图（TEG）及常现凝血象的检测。结果：恶性肿瘤患者TEG大多数表现为高凝图象：γ值、K值、M值明显缩短，均值分别为2．80±0．81（分）、1．10±0．30（分）、26．40±5．98（分）。Ma值明显增宽，均值为66．42±8．11（mm）。少部分晚期肿瘤患者TEG表现为低凝图象：γ值、K值、M值明显延长，均值分别为8．88±1．51（分）、5．63±1．33（分）、38．89±6．95（分）。Ma值明显变窄，均值为46．08±4．85（mm）。结论：恶性肿瘤患者体内存在凝血功能异常，临床可根据TEG的改变来判断恶性肿瘤患者临床所处凝血状态，正确指导治疗。     

发色底物法测定血浆凝血酶活性的研究

近年来的研究表明,血栓栓塞性疾病已成为危害人类健康和生命的主要疾病之一.国内外学者为谋求预测血栓形成的有效实验指标已做了大量的研究.其中最受关注的就是对人体内凝血酶活性的测定。正常人体内仅存在极微量有活性的凝血酶。如果机体受到某种疾病的损害,凝血和抗凝平衡失调,体内凝血酶活性即有所改变。国外多采用单克降抗体测定人体内凝血酶—抗凝血酶复合物。国内采用测定凝血酶的作用产物来间接了解其在体内的活性改变。本文介绍发色底物法直接测定血浆内凝血酶活性的方法。实验原理     

骨髓红系细胞凋亡、增殖及促红细胞生成素受体表达在恶性淋巴瘤贫血中的意义

目的　探讨骨髓红系凋亡、增殖状态及促红细胞生成素受体 (EPOR)表达在恶性淋巴瘤贫血发病机理中的意义。方法　以转铁蛋白受体 (CD71)和血型糖蛋白A(GPA)作为红系标志 ,采用流式细胞术检测骨髓红系细胞的凋亡率、增殖率及EPOR的表达。结果　恶性淋巴瘤骨髓红系CD+ 71细胞和GPA+ 细胞凋亡率明显高于正常对照组 ,差异具有非常显著意义 (4 4 .2 8± 2 4.5 2对 11.0 7± 7.16,P <0 .0 0 1和 47.79± 2 8.3 7对 11.3 5± 5 .98,P <0 .0 0 1) ;增殖率也明显高于正常对照组 (4 9.63± 3 1.68对 2 8.47± 13 .63 ,P <0 .0 5和 5 0 .63± 2 8.74对 2 9.5 9± 9.81,P <0 .0 5 ) ;EPOR表达的平均荧光强度 (MFI)低于正常对照组 ,但差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。CD+ 71细胞和GPA+ 细胞凋亡率与血红蛋白 (Hb)水平呈一定的负相关 (r =-0 .60 0 9,P <0 .0 5和r =-0 .612 2 ,P <0 .0 5 ) ;EPOR表达与Hb水平无明显相关。结论　红系细胞凋亡率增高可能同恶性淋巴瘤贫血的发病机制有关 ,红系的明显增殖可能是对凋亡的反馈调节。EPOR表达水平降低可能不是恶性淋巴瘤贫血发病的普遍机制。     

Effect of Xiaoyu Zhixue Tablet (消瘀止血片) on Expression of Platelet Membrane Glycoproteins in Patients with Hemorrhagic Thrombopathy

Objective: To observe the effect of Xiaoyu Zhixue tablet (消瘀止血片,XYZXT) on the expression of platelet membrane glycoproteins in patients with hemorrhagic thrombopathy, and to explore its possible mechanism. Methods: The total of 148 patients with hemorrhagic thrornbopathy were randomly divided into two groups, the traditional Chinese medicicne (TCM) group (n=98) treated with XYZXT and the Western medicine (WM) group (n = 50) treated with adrenosin, vitamins C, K and P, both for 6 months.The therapeutic effect and the recovery rate of platelet aggregation in the two groups were observed. And platelet membrane glycoprotein (GP) Ⅰ b/Ⅸ, GP Ⅱ b/Ⅲ a complexes, GP Ⅰ b, GP Ⅱ b, GPⅢ a and P-selectin were analyzed by flow cytometry in both groups before and after treatment and also in 34 normal healthy subjects. Results: The total effective rate of hemostasis was 89.8% in TCM group and 54.0% in the WM group (X2 =45.83, P＜0.01), and the recovery rate of platelet aggregation was 72.4% and 4.0% respectively (X2 = 62.06, P＜0.01). The fluorescence intensity of GP Ⅰ b/Ⅸ, GP Ⅱ b/Ⅲ a complexes, GP Ⅰ b, GP Ⅲ a and P-selectin were lower in both groups before treatment than those in the healthy subjects. Expression of above-mentioned marks was elevated in TCM group after 6 months' therapy, which was insignificantly different as compared with the healthy subjects (P＞0.05) and higher than those in the WM group (P＜0.05).Conclusion: One of the mechanisms in treating hemorrhagic thrombopathy with XYZXT is that it could regulate the expression of GP Ⅰ b/Ⅸ, GP Ⅱ b/Ⅲ a complexes, GP Ⅰ b, GPⅢ a and P-selectin at the level of receptor protein.     

SJAMP诱导血小板聚集功能缺陷症患者血浆βTG,PF_4,TXB_2和6-酮-PGF_1α含量的改变

本文检测本病患者15例,健康对照者19例,SJAMP诱导前后血浆中βTG、PF_4、TXB_2和6-酮-PGF_(1α)的含量。结果经配对t检验处理,两组部分资料有显著性差异。表明本病SJAMP诱导血小板聚集异常与血小板膜SJAMP受体异常有关。