大鼠骨髓间充质干细胞体内造血分化过程中加入硝普钠的作用

背景:硝普钠作为血管扩张剂加入骨髓间充质干细胞培养过程中,对其分化潜能发生何种影响?目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞体内向造血细胞分化过程中加入硝普钠后的变化,并与单纯细胞移植的效果进行比较。设计:随机区组,对照观察。单位:广东医学院微生物免疫学教研室,广州医学院病理生理教研室。材料:实验于2006-08在广州医学院完成。选取清洁级出生七八周balb/c小鼠27只作为受体,随机数字表法分为3组:细胞移植组、硝普钠 细胞移植组、空白对照组,9只/组。另选取4周龄SD大鼠1只作为实验用骨髓间充质干细胞的供体来源。注射用硝普钠(50mg/支,北京双鹤现代医药技术有限责任公司,国药准字H11020907)。方法:①无菌条件下取出SD大鼠的股骨,进行骨髓间充质干细胞的分离培养。传至六七代作为供体细胞,消化离心,调整浓度为1×109L-1。细胞悬液中加入荧光素标记的抗体,流式细胞术检测表型。②取50mg/支的注射用硝普钠1支,加入2.5mL生理盐水混匀,从中取出1.0mL液体加入到100mL的生理盐水中,配成终浓度为200mg/L,配置后4h内使用。③各组小鼠细胞移植前均经5.0GyX射线全身照射4h,吸收剂量率为1.45Gy/min。照射完毕后,细胞移植组直接经尾静脉输注0.3mL骨髓间充质干细胞悬液(含1.5×106个细胞);硝普钠 细胞移植组先注射已配好的200mg/L硝普钠液体0.15mL,1min后立即输注骨髓间充质干细胞悬液0.3mL(含1.5×106个细胞);空白对照组输注等量无血清培养液。④移植后60d,各组存活小鼠眼眶外周取血,处死后常规制备骨髓及脾脏单细胞悬液,流式细胞术检测大鼠源性造血细胞CD11a与CD45的植入水平。主要观察指标:①骨髓间充质干细胞培养扩增情况。②不同组织大鼠源性造血细胞的植入水平检测。结果:作为受体的27只balb/c小鼠均存活至实验结束。①骨髓间充质干细胞培养扩增情况:培养3d后细胞贴壁,形态比较均一,长梭形,至第6天细胞90%融合,无重叠。传代后24h内细胞完全贴壁,长梭形,增殖生长迅速,3d即达到完全融合。②不同组织大鼠源性造血细胞的植入水平检测:细胞移植组、硝普钠 细胞移植组在外周血、骨髓、脾细胞悬液中均可检测到低表达的大鼠源性造血细胞CD11a与CD45,且硝普钠 细胞移植组明显强于细胞移植组(t=2.619,P<0.05);空白对照组CD11a与CD45呈阴性表达。结论:大鼠骨髓间充质干细胞具有向造血细胞分化的潜能,硝普钠可促进其分化。     

体外反搏对心肌缺血时血管紧张素转换酶的抑制作用

目的 探讨体外反搏对心肌缺血时犬血管紧张素转换酶（ACE）的影响及机制。方法 采用冠状动脉结扎法复制犬急性心肌缺血模型,外加反博治疗,观测犬血流动力学指标及缺血心肌、主动脉局部血管紧张素Ⅱ水平、ACE活性的改变,用RT-PCR方法检测局部ACE mRNA的表达。结果 体外反搏能改善犬左心室舒缩功能,抑制缺血激活的缺血心肌、主动脉处ACE活性及血管紧张素Ⅱ水平,抑制缺血心肌、主动脉处ACE mRNA的表达。结论 体外反搏能通过抑制心血管局部ACE的表达抑制局部肾素-血管紧张素系统,这可能是体外反搏保护缺血心肌的作用机制之一。     

转LacZ基因骨髓间充质干细胞体内造血分化的初步研究

目的 初步探讨小鼠骨髓间充质干细胞在体内向造血细胞分化的潜能。方法 利用转LacZ基因小鼠MSCs输注X射线亚致死量照射的BALB／C小鼠，2个月后取骨髓细胞作体外甲基纤维素培养和X-Gal染色，取肝脏X-Gal染色。结果 MSCs输注组和对照组骨髓细胞体外集落培养均能形成鹅卵石样造血细胞集落，经X-gal组化染色后，输注组部分造血集落产生蓝绿色，对照组没有颜色变化。肝脏X-Gal染色输注组部分产生蓝色，对照组没有颜色变化。结论 小鼠MSCs具有向造血细胞分化的潜能。     

逆转录病毒介导外源基因高效感染大鼠骨髓间充质干细胞

目的 通过逆转录病毒系统将小鼠同源盒基因Soxl转移至大鼠骨髓间充质干细胞（rMSC）。检测外源基因的表达，感染效率及感染时间。方法 常规分子生物学亚克隆技术构建重组逆转录病毒载体，转染至包装细胞株PT67，制备含目的基因的重组逆转录病毒液，感染rMSC，并用带EGFP表达盒的pLEGFP-N1载体的逆转录病毒系统作为平行对照，评估感染率；使用Westernblot以及免疫组织化学的方法检测携带目的基因的重组逆转录病毒在rMSC中的感染和表达情况。结果 本实验成功地制备了pLXSN—Soxl重组逆转录病毒载体并制备出高滴度病毒颗粒；将病毒上清感染rMSC，EGFP阳性细胞为21％，感染时间持续20d，而对照脂质体转染法EGFP阳性细胞仅为3％。免疫组化及Westernblot显示用重组逆转录病毒液感染的rMSC可表达外源基因产物Soxl蛋白。结论 采用逆转录病毒介导的方法可以将外源性基因高效转移至rMSC中，并有外源性基因的稳定表达。     

病理生理学实验教材的建设及效果

为了体现病理生理学桥梁学科以及理论性和实践性都较强的特点,我们扩充了实习指导的内容,包括概述、实验、自学及复习等部分。实习指导既能指导学生完成实验,又能有针对性的训练学生基本操作等技能;既是实验教材,又是培养学生临床思维及理论复习的辅导材料。     

卡介苗对豚鼠实验性哮喘的预防性治疗作用

目的:观察卡介苗(BCG)对哮喘豚鼠的预防治疗作用。方法:采用31只豚鼠,分为3组进行处理,分别为对照组、卵蛋白(OVA)致敏组和BCG处理组。用OVA(Ⅲ级)致敏豚鼠复制豚鼠哮喘模型。结果:本模型采用10%的OVA致敏,1%的OVA激发,所有动物都表现有不同程度的过敏反应症状。实验动物在接受BCG注射后,表现为以下特点:一是外周血淋巴细胞和单核细胞增加;二是BALF中细胞分类的变化,支气管肺泡灌洗液(BALF)中以淋巴细胞的增加最为明显。 经过OVA致敏的动物BALF和肺组织中嗜酸性粒细胞(EOS)明显增加,BCG不同程度地降低肺组织EOS的气道浸润及减轻OVA致敏豚鼠的气道反应。结论:[HTSS]使用本实验体系BCG可以减轻实验性哮喘的气道炎症反应。     

多种中药成分诱导大鼠骨髓间质干细胞转变为神经元样细胞

目的　体外定向诱导大鼠骨髓间质干细胞 (MSCs)分化为神经元样细胞。方法　通过贴壁法分离大鼠MSCs,体外扩增培养 ,流式细胞仪检测其表面抗原表达 ,中药成分定向诱导MSCs分化为神经元样细胞。光镜下观察细胞形态 ,免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志。结果　大鼠MSCs可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。流式细胞仪检测结果显示CD1 4、CD1 1α、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性 ,CD2 9、CD44、CD90、CD1 0 5、CD1 66呈阳性。黄芪、天麻、人参、当归、脑新舒、人参蜂王浆等多种中药诱导 1～ 3h后大部分MSCs转变为神经元样细胞 ,出现胞体和突起 ,免疫细胞化学染色神经元特异性烯醇酶 (NSE)、巢蛋白 (nestin)呈阳性 ,胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)阴性。结论　多种传统中药成分及中药制剂体外能诱导大鼠MSCs分化为神经元样细胞     

在病理生理学实验刘可培养学生的综合能力 …

多年来，我们修订了实验内容、结合有关实验介绍科研的基本知识、要求同学们以医学论文格式完成实验报告、开设实验设计和综述练习等措施。这些措施不但能激发同学们的学习兴趣，还使同学们的综合能力有较明显提高。     

CT测量气胸肺压缩程度的动物实验研究

目的探讨CT测量气胸肺压缩程度的计算方法并评价其准确性。方法通过穿刺胸膜腔建立6只新西兰兔人工气胸模型,分次从穿刺管注入10ml,25ml,40ml空气后,同时行胸部CT平扫和X线摄影检查。CT片采用棱台的体积计算公式、X线胸片分别采用面积测量法和线段估算法计算求出肺压缩比值,对所得数据进行统计学处理和分析。结果CT体积计算法与X线胸片面积测量法和线段估算法计算的肺压缩比值进行组间比较,结果有统计学差异,(P<0.05)理论计算值与CT实测值无显著性差异(P<0.05),两者有高度相关性(左肺r=0.898,P<0.001;右肺r=0.919,P<0.001)。结论CT体积计算法比X线胸片面积测量法和线段估算法测量结果更准确,更能反映实际情况。因此更具科学性和临床应用价值。     

眼镜蛇毒对油酸型呼吸窘迫综合征的保护作用

实验组小白鼠先从腹腔注射眼镜蛇毒(200μg/kg),然后从尾静脉注射油酸(0.07ml/kg),对照组先从腹腔注射生理盐水(200μl/kg),再从尾静脉注入同剂量油酸。结果表明,实验组的肺湿重、肺干重、肺系数及肺含水量等指标均比对照组显著下降。增加静脉注射的油酸剂量至0.1ml/k8,重复实验,结果相同。说明适量的眼镜蛇毒可缓解油酸型呼吸窘迫综合征(RDS)。