细胞周期调节负控蛋白P27在肾小球系膜细胞增殖中的调控作用

目的探讨lL-13,ET-1,甲基强的松龙及肝素钠对肾小球系膜细胞膜表达细胞周期负控p27的变化.方法不同浓度IL-13(10ng/ml,100ng/ml),ET-1(10-7mol/L),甲基强的松龙0.5μg/ml,肝素钠100mg/L和200mg/L,作用于培养的系膜细胞.流式细胞仪检测p27表达水平.结果IL-13 10 ng/ml组和100ng/ml浓度组p27表达为(46.74±3.25)和(23.8±2.56),与对照组比较有明显差异(P＜0.001,P＜0.05),两浓度组之间有显著差异(P＜0.01).ET-1刺激14h和18h后p27的表达分别为(14.76±1.49)和(12.18±1.30),与对照组比较均有明显差异(P＜0.05,P＜0.05).甲基强的松龙48h及72 h p27表达为(9.9±1.01)和(9.12±0.93),与对照组比较明显降低,P＜0.001.肝素钠100mg/L和200 mg/L浓度p27的表达分别为(26.94±1.23)和(28.04±0.99),较对照组明显升高(P＜0.05),不同浓度组间比较无明显差异.结论肾小球系膜细胞受不同因素作用后细胞周期调节负控蛋白p27表达水平不同.p27在调节系膜细胞增殖过程中起重要作用.     

α-硫辛酸抑制高糖诱导的系膜细胞增殖及细胞间黏附分子1的表达

目的:探讨α-硫辛酸对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响.方法:体外条件下采用正常糖浓度(5.6 mmol/L,NG)、高糖浓度(25 mmol/L,HG)及HG 不同浓度α-硫辛酸(50、100、200、300 μmol/L)分别与大鼠系膜细胞共同培养不同时间(12、24、48 h).MTT法测定系膜细胞增殖;RT-PCR法检测细胞ICAM-1 mRNA的表达;ELISA法测定细胞培养上清ICAM-1蛋白的浓度. 结果:50～300 μmol/L的α-硫辛酸可抑制系膜细胞增殖.高糖刺激24 h时, 200 μmol/L的α-硫辛酸干预组ICAM-1的蛋白浓度[(288.4±23.4) ng/ml]明显低于HG组[(542.3±35.6) ng/ml,P<0.01].100 μmol/L及200 μmol/L的α-硫辛酸均可下调高糖诱导的ICAM-1 mRNA的表达.结论:一定浓度的α-硫辛酸可抑制高糖诱导的系膜细胞增殖,并可降低ICAM-1蛋白和mRNA的表达.     

脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨脂联素在糖尿病肾病中可能的保护作用.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为7组:对照组、高糖A组、高糖B组(培养液葡萄糖浓度分别为5.6 mmol/L、15 mmol/L、30 mmol/L);脂联素A、B、C、D组(各组培养液葡萄糖浓度均为30 mmol/L+脂联素,脂联素浓度依次为2.5 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml),作用24 h,RT-PCR法测定各组细胞VEGF mRNA表达水平;ELISA法测定各组上清液中VEGF蛋白的含量.结果 与对照组相比,高糖A组、高糖B组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达升高(P＜0.05);脂联素各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达低于高糖B组(P＜0.05).结论 高糖可刺激大鼠肾系膜细胞VEGF表达增高,脂联素可抑制高糖环境下系膜细胞对VEGF的表达.     

基于Wnt/β-链蛋白信号通路观察高糖环境对大鼠下颌骨骨髓基质细胞增殖的影响

目的 观察高糖环境对大鼠下颌骨骨髓基质细胞增殖的影响,并结合Wnt/β-链蛋白信号通路初步探讨高糖对骨髓基质细胞增殖的影响。方法 从Wistar大鼠下颌骨中分离培养骨髓基质细胞,分别给予不同糖浓度(5.5和16.5 mmol/L)干预,采用噻唑蓝法观察骨髓基质细胞1、3、5、7 d时的增殖情况,采用流式细胞仪对高糖干预5 d细胞进行细胞周期检测,Western免疫印迹检测5 d时β-链蛋白和细胞周期蛋白D1的表达,实时定量多聚酶链反应检测淋巴增强因子-1和细胞周期蛋白D1的mRNA表达。结果 噻唑蓝法检测结果显示,1 d骨髓基质细胞在两种糖浓度中的光密度值差异无统计学意义(P=0.700),3、5、7 d时16.5 mmol/L组的细胞光密度值显著低于5.5 mmol/L组(P=0.006,P=0.002,P=0.003)。5 d的细胞周期结果显示,与5.5 mmol/L组细胞相比,16.5 mmol/L组细胞可以抑制细胞从G1期向S期转化,16.5 mmol/L组细胞的增殖指数显著低于5.5 mmol/L组(P=0.014)。与5.5 mmol/L组相比,16.5 mmol/L组细胞明显抑制β-链蛋白的表达,同时Wnt/β-链蛋白通路中淋巴增强因子-1 mRNA及下游细胞周期蛋白D1 mRNA和蛋白的表达也受到明显抑制。结论 高糖环境可以通过抑制Wnt/β-链蛋白信号通路中关键因子β-链蛋白、淋巴增强因子-1及下游与细胞增殖相关靶基因细胞周期蛋白D1的表达,进而抑制骨髓基质细胞的增殖。     

尿激酶型纤溶酶原激活物对系膜细胞增殖及α-肌动蛋白表达的影响

目的:研究尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)对高糖诱导系膜细胞(MC)增殖及α-肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法:MC分组:对照组(5 mmol/L D-葡萄糖),高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)和uPA组(30 mmol/L D-葡萄糖+不同浓度uPA).分别用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期情况;激光共聚焦观察α-SMA表达.结果:高糖刺激MC增殖率明显增加,uPA呈剂量依赖性的阻止细胞由G0/G1期进入S期,抑制MC增殖.高糖增加α-SMA表达,随着uPA浓度增加,核周α-SMA表达较高糖组明显减少(P＜0.01).结论:uPA抑制高糖诱导的系膜细胞增殖和表型转化,对糖尿病肾小球硬化有一定的治疗作用.     

葡萄糖对MG63细胞株TRAIL表达的影响

目的:观察在不同浓度葡萄糖环境下人成骨肉瘤MG63细胞株肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)的表达,探讨糖尿病骨质疏松症的发病机制. 方法:用不同浓度葡萄糖(5.5、16.7、33.3 mmol/L)分别刺激培养的MG63细胞24 h,采用RT-PCR法检测TRAIL、OPG、OPGL mRNA的表达,以免疫组织化学法检测MG63细胞中TRAIL的表达及分布.结果:不同浓度葡萄糖环境的MG63细胞中TRAIL、OPGL mRNA的表达,均按照对照组、5.5 mmol/L组、16.7 mmol/L组、33.3 mmol/L组的顺序递增(P＜0.05),OPG mRNA的表达按照此顺序递减(P＜0.05).33.3 mmol/L组TRAIL mRNA的水平明显高于对照组[(1.004±0.070) vs (0.740±0.023),P＜0.05],TRAIL免疫反应阳性物质密度也明显高于对照组.结论:高糖环境可能导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG表达减少.这可能是糖尿病骨质疏松症的重要发病机制之一.     

高磷诱导及膦甲酸钠干预血管平滑肌细胞钙化的研究

目的 观察不同浓度磷对体外培养的牛主动脉平滑肌细胞钙沉积及骨钙素表达的影响,同时观察膦甲酸钠对高磷诱导该细胞钙化的干预作用.方法 体外培养牛主动脉平滑肌细胞,观察不同磷浓度(Pi 1.5、2.0 mmol·L-1)、不同培养时间(3、6、9 d)血管平滑肌细胞的钙沉积,以及不同磷浓度(Pi 1.5、2.0、2.5 mmol·L-1)培养血管平滑肌细胞72 h骨钙素的表达.同时观察不同浓度膦甲酸钠对高磷(Pi 2.0 mmol·L-1)诱导的钙沉积和骨钙素增加的抑制作用.用甲O-酚酞络合酮方法测定钙含量;放射免疫法测定培养上清液中骨钙素的浓度;BCA法测定蛋白含量,用蛋白含量标化钙含量与骨钙素浓度;RT-PCR测定骨钙素mRNA的表达.结果 在相当于正常血磷浓度(1.5 mmol·L-1)的培养基中,平滑肌细胞钙沉积量小;而在相当于高磷血症(2.0 mmol·L-1)的培养基中,钙沉积明显增加[培养6 d,(77.187±11.692) vs(25.768±1.750) μg·(mg蛋白)-1,P＜0.01],并呈时间和剂量依赖性.与Pi 1.5 mmol·L-1组相比,Pi 2.0 mmol·L-1组培养上清液中骨钙素的水平明显增高[(1.503×10-2±2.601×10-3) vs(2.981×10-3±8.382×10-4) ng·(μg蛋白)-1,P＜0.001];Pi 2.0 mmol·L-1组平滑肌细胞骨钙素mRNA的表达也明显增加(OC/GAPDH,1.906±0.132 vs 0.748±0.0366,P＜0.001).膦甲酸钠能有效地抑制钙沉积[培养6 d,Pi 2.0 mmol·L-1 PFA 1.0 mmol·L-1组vs Pi 2.0 mmol·L-1组,(37.729±5.899) vs(77.187±11.692)μg·(mg蛋白)-1,P＜0.001]和上清液中骨钙素的表达[(4.529×10-3±1.250×10-3) vs(1.503×10-2±2.601×10-3) ng·(μg蛋白)-1,P＜0.001]及平滑肌细胞骨钙素mRNA的表达(OC/GAPDH,0.642±0.092 vs 1.885±0.165,P＜0.01).结论 高磷能直接促进血管平滑肌细胞钙沉积和骨钙素表达的增加,说明高磷血症可能是促进血管钙化的独立危险因素;膦甲酸钠能有效地抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙沉积和骨钙素表达的增加,可以作为一种新的防治高磷诱导血管钙化的药物.     

ERK通路抑制剂对PDGF-BB诱导的大鼠系膜细胞细胞外基质合成的影响

目的:探讨ERK通路在血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质(ECM)合成中的作用.方法:将体外培养大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)分为7组:对照组;PDGF-BB刺激组(终浓度分别为10、25和50 ng/ml);PDGF-BB和ERK通路抑制剂UO126共刺激组(PDGF-BB 25ng/ml UO126 5 μmol/ml,PDGF-BB 25 ng/ml UO126 10 μmol/ml);UO126 10 μmol/ml刺激组.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)和纤连蛋白(FN)mRNA的相对表达量.结果:PDGF-BB能剂量依赖性的上调 PAI-1和FN mRNA的表达(P＜0.05),同时下调MMP-2 mRNA的表达(P＜0.05).U0126则呈剂量依赖性地抑制PDGF-BB诱导的肾小球系膜细胞PAI-1和FN mRNA的表达(P＜0.05),促进MMP-2 mRNA的表达(P＜0.05).结论:PDGF-BB可能通过ERK通路作用于大鼠肾小球系膜细胞,抑制细胞外基质的降解,促进其FN的合成,从而参与肾小球硬化的过程.     

Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响

目的:探讨Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响?方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组(NC组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L)?Resveratrol组(Res组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L)?高糖组(HG组,葡萄糖浓度30mmol/L)和高糖+Resveratrol组(HG+Res组,葡萄糖浓度30 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L),各组细胞分别培养72 h,用比色法测定细胞上清液丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,蛋白含量/细胞数比值评估系膜细胞大小,Western blot法检测细胞内p27蛋白表达的变化?结果:①与NC组相比,HG刺激后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均明显上调(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均降低(P < 0.05)?②与NC组相比,HG刺激72 h后,大鼠肾小球系膜细胞肥大?p27蛋白表达明显增加(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞细胞肥大减轻?p27蛋白表达减少(P < 0.05)?Res组和NC组之间p27蛋白表达无统计学意义(P > 0.05)?结论:Resveratrol可能通过缓解高糖诱导系膜细胞的氧化应激?抑制p27蛋白高表达,减轻糖尿病肾脏疾病早期的肾脏肥大?     

不同浓度葡萄糖对MG63细胞株TRAIL表达的影响

目的: 观察不同浓度葡萄糖环境下人成骨肉瘤MG63细胞株肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)的表达,探讨糖尿病骨质疏松症的发病机制. 方法: 用不同浓度葡萄糖(5.5, 16.7, 33.3 mmol/L)分别刺激培养的MG63细胞24 h, RT-PCR法检测TRAIL, OPG, OPGL mRNA的表达,免疫组织化学法检测MG63细胞中TRAIL的表达及分布. 结果: 葡萄糖对MG63细胞中TRAIL, OPGL mRNA的表达,均按照对照组、5.5 mmol/L组、16.7 mmol/L组、33.3 mmol/L组顺序递增(P＜0.05),OPG mRNA的表达按照此顺序递减(P＜0.05). 33.3 mmol/L组TRAIL mRNA的水平明显高于对照组[(1.004±0.070) vs (0.740±0.023), P＜0.05], TRAIL免疫反应阳性物质密度也明显高于对照组. 结论: 高糖环境可能导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG的表达减少,这可能是糖尿病骨质疏松症的重要发病机制之一.     

罗格列酮对高糖培养的大鼠系膜细胞增生及p27表达的影响

目的:探讨罗格列酮对糖尿病肾病保护作用的机制。方法:体外培养的大鼠系膜细胞分为正常对照组(NG,含5.6mmol/L D-葡萄糖),NG+甘露醇(25 mmol/L)组,高糖组(HG,含30mmol/L D-葡萄糖),HG+罗格列酮(5μmol/L)组,HG+罗格列酮(10μmol/L)组,HG+罗格列酮(20μmol/L)组。用MTT法测定细胞增生,免疫细胞化学法测定p27Kip1表达。结果:(1)培养72小时后,在模拟高血糖的高糖培养基中,各浓度罗格列酮均可抑制大鼠系膜细胞增生,且此作用与渗透压改变无关。(2)与NG组相比,HG组培养24小时p27表达降低(P<0.05),与其增生活跃相一致,随时间延长,p27表达量逐渐增加,48、72小时无明显差异。与HG组相比,5μmol/L罗格列酮组作用24、48小时无明显差异,作用72小时p27表达增加(P<0.05);10μmol/L、20μmol/L罗格列酮组在各时间点均增加p27表达,有统计学意义。随着罗格列酮剂量增加,p27表达也明显增加。结论:在高糖环境下罗格列酮至少部分通过增加p27表达引起系膜细胞增生抑制,从而对糖尿病肾病起保护作用。     

高糖环境对HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞IL-18、TGF-β1表达的影响

目的:观察高糖环境下肾小球系膜细胞白细胞介素18(IL-18)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的变化及其相互关系。方法:将HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞分别培养在正常葡萄糖(NG组:葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)和高糖浓度(HG组:葡萄糖浓度为25 mmol/L)环境中,荧光定量PCR检测各组IL-18和TGF-β1 mRNA的表达量,而后分组加入不同浓度的IL-18(浓度分别为1、10、50、100 ng/dL)和IL-18抗体(浓度为100μg/dL),荧光定量检测TGF-β1 mRNA的表达量。结果:与NG组比较,HG组细胞IL-18、TGF-β1表达增加,TGF-β1表达水平随IL-18浓度增高而增加,用IL-18抗体阻断IL-18后TGF-β1的表达受到抑制。结论:高糖可导致IL-18、TGF-β1表达升高;TGF-β1表达升高依赖于IL-18,且有剂量依赖性;阻断IL-18可抑制TGF-β1的升高。     

高浓度葡萄糖条件下肾小球系膜细胞内源性烟酰胺磷酸核糖转移酶对波形蛋白表达的调控作用

目的：探讨高浓度葡萄糖条件下肾小球系膜细胞过度表达的内源性烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）对波形蛋白（Vimentin）表达的调控作用,阐明糖尿病并发肾脏炎症纤维化的形成机制。方法：取患严重自发性糖尿病的C57/BL6小鼠肾脏,以野生型C57/L86小鼠作为对照组,行病理切片和组织荧光染色,应用免疫共聚焦方法检测肾小球系膜细胞中内源性Nampt和Vimentin表达及定位;肾小球膜HBZY-1细胞随机分为4组,即0.56 mmol·L^-1低浓度葡萄糖（LG）对照组、200 mmol·L^-1高浓度葡萄糖（HG）处理组、HG+FK866组和HG+NMN组;高浓度葡萄糖干预5 d后,分别施加FK866（10 μmol·L^-1）和NMN（1 mmol·L^-1）作用24 h后,通过免疫荧光和免疫印迹法检测细胞内源性Nampt、Vimentin、核因子κB p65（NF-κBp65）和依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）的组蛋白去乙酰化酶1（Sirt1）表达水平;应用RT-PCR和免疫印迹等方法检测细胞Nampt和Vimentin表达水平。结果：与野生型C57/BL6小鼠组比较,严重糖尿病组小鼠肾小球明显萎缩,肾小球细胞内Vimentin表达水平随内源性Nampt表达水平升高而增加（P < 0.01）;与0.56 mmol·L^-1低浓度葡萄糖对照组比较,高浓度葡萄糖冲击细胞Nampt、NF-κBp65和Vimentin表达水平明显升高（P < 0.01）,Sirt1表达水平明显降低（P < 0.01）。HG+FK866和HG+NMN组肾小球系膜细胞中Nampt、Vimentin和NF-κBp65表达水平均较对照组明显降低（P < 0.01）。结论：高浓度葡萄糖冲击条件下肾小球系膜细胞过度表达的内源性Nampt能够通过NF-κBp65和Sirt1信号通路促进Vimentin表达。     

硫氢化钠对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞的影响

目的 观察硫氢化钠(NaHS,外源性的H2S供体)对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的作用。方法 以0.125%胰酶和0.01%EDTA灌注法获得HUVECs,分别用5.5mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS及50μmol/L NaHS处理72h,采用MTT法检测各组细胞的存活率,Western blot法检测H2S生成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-Iyase,CSE)的变化。结果 MTT检测表明,25mmol/L葡萄糖组的HUVECs存活率比5.5mmol/L葡萄糖组下降28.37%(P<0.05),而50μmol/L NaHS和25mmol/L葡萄糖共同处理组的细胞存活率比25mmol/L葡萄糖组上升30.3%(P<0.05),50μmol/L NaHS组与5.5mmol/L葡萄糖组无明显差异(P>0.05)。与5.5mmol/L葡萄糖组相比,以25mmol/L葡萄糖处理72h后能使CSE蛋白的表达下降(P<0.05),而25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS 则能改善这种损害作用(P<0.05),CSE蛋白的表达比25mmol/L葡萄糖组增强。结论 高浓度葡萄糖降低人原代脐静脉内皮细胞的生长和存活率,减少CSE蛋白的表达,而NaHS能够减轻高浓度葡萄糖对CSE的作用。     

葡萄糖浓度波动对INS-1细胞胰岛素分泌的影响

目的初探葡萄糖浓度波动对大鼠胰岛素瘤INS-1细胞胰岛素分泌功能影响机制。方法将INS-1细胞随机分为正常糖组（5.5 mmol/L葡萄糖培养液培养）、持续高糖组（16.7 mmol/L葡萄糖培养液培养）、波动组（用16.7 mmol/L葡萄糖培养液培养2 h,再换5.5 mmol/L培养3 h,每天重复3次,夜间9 h维持在5.5 mmol/L的培养液中）、N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）＋正常糖组、NAC＋持续高糖组、NAC＋波动组,后3组的培养基中均预先负载终浓度为1.0 mmol/L的NAC,余干预措施相同,均干预72 h。荧光素酶方法检测细胞内三磷酸腺苷（adenosine-triphosphate,ATP）含量,放射免疫分析法测定胰岛素分泌水平。结果 INS-1细胞ATP含量及胰岛素分泌水平在持续高糖组及波动组均较正常糖组显著下降,且波动组下降更明显,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。NAC＋波动组及NAC＋持续高糖组细胞ATP含量及胰岛素分泌水平分别较波动组及持续高糖组显著增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论持续性高糖及波动性高糖损伤INS-1细胞的胰岛素分泌可能与减少细胞ATP含量有关,且波动性高糖较前者更严重,氧化应激可能是波动性高糖及持续性高糖导致INS-1细胞ATP减少的机制。     

山奈酚对高糖诱导大鼠肾系膜细胞增殖的影响

目的探讨山奈酚对高糖诱导大鼠肾系膜细胞（HBZY-1）增殖、纤维化的影响,并研究其相关的作用机制。方法将HBZY-1细胞分为正常糖浓度组〔葡萄糖（Glu）5.5 mmol/L〕即对照组、高糖（Glu 25 mmol/L)组、10 μmol/L山奈酚+高糖组和 30 μmol/L山奈酚+高糖组。分组处理细胞后,采用MTT实验检测正常糖浓度和高糖下山奈酚对HBZY-1细胞增殖的影响;流式细胞仪检测各组细胞周期变化;Real-time PCR检测各组细胞纤维连接蛋白 (FN)、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达,Western blot检测FN、CTGF、细胞周期相关蛋白以及p38 MAPK信号通路蛋白的表达。结果山奈酚(10、30 μmol/L)对正常糖浓度培养的HBZY-1细胞增殖影响不大(P>0.05),高糖能够增强细胞的增殖能力（P<0.05）, 而山奈酚(10、30 μmol/L)可抑制高糖引起的增强细胞增殖作用（P<0.05）。高糖能减少G0/G1期细胞比例,增加S期细胞比例,并降低细胞周期相关蛋白p21Cip1以及p27Kip1蛋白表达,山奈酚(10、30 μmol/L)能够阻止高糖引起的细胞周期改变以及细胞周期相关蛋白表达的下调。山奈酚(10、30 μmol/L)同时能够抑制高糖引起的细胞FN、CTGF mRNA和蛋白表达水平的上调。高糖能够增加磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)蛋白水平,而山奈酚(10、30 μmol/L)处理能够剂量依赖性的抑制高糖诱导的p-p38MAPK蛋白的表达上调。结论山奈酚对高糖诱导的HBZY-1细胞增殖起抑制作用,其作用机理可能是通过调控p38 MAPK信号通路,对高糖培养下的HBZY-1细胞起到保护作用。     

单宁酸对高糖下大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨单宁酸（GLTN）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖的抑制作用及对细胞周期的影响,阐明GLTN对糖尿病肾病（DN）发生发展的延缓作用。方法：实验细胞分成正常糖对照组（D-葡萄糖5.5 mmol·L^-1,NC组）、高糖组（D-葡萄糖30 mmol·L^-1,HC组）、高糖+5 mmol·L^-1 3-氨甲苯甲酰胺（3-AB,AB组）、高糖+20 μmol·L^-1GLTN（G20组）和高糖+40 μmol·L^-1 GLTN（G40组）。MTT法观察不同时间点（4、8、24、48和72 h ）各组GMC的增殖情况,流式细胞术观察细胞周期,Western blotting法检测转化生长因子β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）的蛋白表达情况。结果：与NC组比较,高糖组GMC增殖水平升高（P<0.01）,于48 h时达高峰;S期细胞百分比明显升高（P<0.01）。与HC组比较,各给药组GMC增殖水平均明显下降（P<0.01）,S期细胞百分比降低（P<0.01）。与NC组比较,各给药组S期细胞百分比明显升高（P<0.05或P<0.01）,TGF-β1和CTGF蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,但与HC组比较明显下降（P<0.01）。结论：单宁酸可通过阻滞细胞周期,下调TGF-β1和CTGF的表达,抑制高糖诱导的大鼠GMC的增殖,从而对DN的发生发展起到一定的延缓作用。     

吡格列酮抗高糖诱导H9c2心肌细胞炎性损伤的机制研究

目的 探讨PPAR-γ激动剂吡格列酮（pioglitazone, PGZ）通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路减轻高糖诱导的H9c2大鼠心肌细胞炎性损伤。方法 离体培养的H9c2细胞随机分6组,分别为低糖组（5.5 mmol/L葡萄糖,NG组）、高糖组（35 mmol/L葡萄糖,HG组）、高糖+不同浓度PGZ组（HG+5 μmol/L PGZ 、HG+10 μmol/L PGZ、HG+15 μmol/L PGZ、HG+20 μmol/L PGZ）,采用CCK8法检测各组细胞干预24、48 h后细胞活性变化;据CCK8结果选取NG组、HG组、HG+10 μmol/L PGZ （Low组）、HG+20 μmol/L PGZ （High组） 4组细胞干预48 h,ELISA检测各组细胞炎性因子TNF-α、IL-1β的含量,Western-blot检测各组细胞p-p38、p-p65蛋白的表达。结果 CCK8检测结果显示,与NG组比较,24、 48 h后HG组明显活力下降（P<0.01）,表明高糖可诱导心肌细胞损伤;与HG组比较,48 h后HG+10 μmol/L PGZ、HG+ 15 μmol/L PGZ两组细胞活力均升高（P<0.05）,HG+20 μmol/L PGZ组细胞活力明显升高（P<0.01）,提示PGZ可对高糖环境下心肌细胞起保护作用。干预48 h后ELISA结果显示,HG组TNF-α、IL-1β含量与NG组比明显升高（P<0.01）,提示高糖环境可致心肌细胞发生炎性损伤;与HG组比较,Low组IL-1β含量降低（P<0.05）,High组TNF-α含量降低（P<0.05）,IL-1β含量明显降低（P<0.01）。提示PGZ可减轻高糖诱导心肌细胞炎性损伤。干预48 h后Western-blot结果显示,与NG组比较,HG组p-p65和p-p38蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）;与HG组比较,Low组p-p65和p-p38蛋白表达均降低（P<0.05）,High组p-p65和p-p38蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）。提示PGZ可下调高糖诱导心肌细胞NF-κB/p38MAPK通路的表达。结论 PPAR-γ激动剂吡格列酮可以减轻高糖诱导H9c2大鼠心肌细胞的炎性损伤,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB信号转导通路有关。     

大黄素对高糖环境下系膜细胞收缩功能的影响

目的 探讨高糖环境下大黄素能否通过抑制系膜区p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的过度活化而改善系膜细胞的收缩功能。方法 培养系膜细胞,调整培养液为以下5组：正常糖组（糖浓度5.6mmol/L,NG组）、高糖组（糖浓度30mmol/L,HG组）、低质量浓度大黄素组（50mg/L大黄素+高糖,LE组）、高质量浓度大黄素组（100mg/L大黄素+高糖,HE组）和过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）抑制剂GW9662组（10μmol/L GW9662+高糖+高质量浓度大黄素,GW组）。系膜细胞收缩力以细胞收缩前后表面积的变化表示,采用Western blot和Real time PCR法测定p38MAPK的活性及PPARγ的表达水平。 结果 高糖组p38 MAPK的活性增加,系膜收缩功能明显下降（P<0.05）;大黄素组能明显抑制p38MAPK的过度活化进而改善系膜细胞的收缩功能,且具有剂量依赖性（50mg/L大黄素组p38活性降低了40%,100mg/L组降低了73%,P均<0.05）;大黄素组PPARγmRNA水平及其蛋白水平均明显升高（P均<0.05）;PPARγ抑制剂GW9662能有效地阻断大黄素所产生的保护效应（P<0.05）。结论 高糖环境下,大黄素通过激活PPARγ抑制系膜区p38MAPK的过度活化进而改善系膜细胞的收缩功能。     

商陆皂苷甲对IL-1β诱导的肾小球系膜细胞ERK1/2-AP-1通路活化的影响

目的 观察商陆皂苷甲(EsA)含药血清对大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖及其对IL-1β诱导rGMC的ERK1/2-AP-1通路活化的影响.方法 用不同剂量EsA(5、10、20、40 mg/kg)将SD大鼠灌胃后获取含药血清,并设对照组(0.5％羧甲基纤维素钠灌胃);用上述各组浓度的EsA含药血清处理rGMC,并设对照组血清组.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组EsA含药血清对rGMC增殖的影响;将rGMC分为空白对照组、IL-1β单独作用组、IL-1ββ+ EsA双重作用组、IL-1β+U016双重作用组、IL-1β+U0126+EsA共同作用组,同步化后培养48 h,Western Blot法检测p-ERK1/2、AP-1的表达并成像分析.结果 EsA(5～10 mg/kg)含药血清抑制了细胞增殖(P＜0.05或P＜0.01);ILqβ组促进了rGMC的p-ERK1/2、AP-1表达(P＜0.05),IL-1β+EsA组、IL-1β+ U0126组,IL-1β+U0126+EsA组作用rGMC后,其p-ERK1/2、AP-1表达均降低(P＜0.05).结论 EsA含药血清(5～10 mg/kg)显著抑制了rGMC的增殖;EsA通过下调p-ERK1/2、AP-1表达,抑制了IL-1β诱导的rGMC增殖,EsA作用于ERK1/2-AP-1通路是其抑制rGMC增殖的机制之一.