肾缺血再灌注损伤对琥珀酸脱氢酶活性影响的观察

采用琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）组织化学方法，观察大白鼠肾脏在缺血前、缺血６０分钟时及缺血６０分钟再灌注３０分钟时肾脏的形态学变化及肾小管酶活性的改变。发现缺血时ＳＤＨ活性降低，再灌注后ＳＤＨ活性进一步降低。表明肾脏缺血再灌注损伤重于单纯缺血性损伤。     

培养心肌细胞钙矛盾损伤琥珀酸脱氢酶及细胞表面积的定量分析研究

原代培养5天的乳大鼠心肌细胞,用无钙及不含血清的培养基孵育60分钟,在细胞内钙耗竭后加入氯化钙(使钙浓度达2.5mM/ml)造成细胞钙矛盾损伤。实验完毕,按细胞化学染色方法显示各组心肌细胞的线粒体标志酶——琥珀酸脱氢酶。用MPV-3型显微分光光度计测量细胞的琥珀酸脱氢酶染色灰度(它代表了该酶活性的强度)和细胞表面积。结果显示,缺钙孵育时,心肌细胞琥珀酸脱氢酶活性(平均灰度为666.58)及细胞表面积(平均为1743.23)分别与对照组(平均灰度668.12,平均表面积为1789.19)相比(P>0.05),差异无显著性;补钙孵育60分钟后,心肌细胞的琥珀酸脱氢酶活性降低(平均灰度为498.92),细胞极度孪缩,表面积显著减少(平均为1449.14),和对照组和无钙组相比(P<0.01),差异有高度显著性。实验表明钙矛盾损伤中,细胞有极度孪缩和线粒体琥珀酸脱氢酶的损伤变化。     

急性心肌缺血不同时间后再灌注对琥珀酸脱氢酶活性的影响

本文以组织化学方法探讨家兔心肌缺血不同时间后再灌注对琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的影响。结果表明,冠脉结扎15分钟后再灌注,SDH活性接近正常,冠脉结扎45分钟后再灌注,SDH活性明显降低。这说明了再灌注损伤的出现与缺血的时间长短有关。     

丙二醛对大鼠肝线粒体呼吸功能及相关脱氢酶活性影响

目的:探索脂质氧化终产物丙二醛(MDA)在体外对线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性的影响.方法:采用不同浓度MDA 体外干预大鼠肝线粒体,氧电极法检测线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),测定呼吸链复合物及α-酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶活性.结果:线粒体经MDA作用后,以苹果酸/谷氨酸或琥珀酸作底物,线粒体两条呼吸途径对MDA呈现不同的耐受力,前者在MDA 100 μmol/L时RCR显著降低(P<0.05),400 μmol/L时P/O降低(P<0.05);后者MDA浓度达到400和800 μmol/L时,线粒体P/O及RCR值显著降低(P<0.05).丙酮酸脱氢酶及α-酮戊二酸脱氢酶分别在50 μmol/L和100 μmol/L时活性下降(P<0.05),而MDA浓度达到1 mmol/L时,苹果酸脱氢酶活性降低(P<0.05).呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ分别在MDA400和800 μmol/L时最大反应速度(Vm)降低(P<0.05),但MDA(0～3.2 mmol/L)对呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ的Vm及米氏常数(Km)没有影响.结论:MDA对线粒体呼吸链及α-酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶存在不同程度的损伤作用,不同酶对MDA损伤的敏感程度有所差异,本研究中相关酶受MDA 损伤的次序可能是:丙酮酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅰ、呼吸链复合物Ⅱ、苹果酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ.     

益生注射液对人内皮细胞缺氧再给氧损伤的拮抗机理研究

目的　探讨内皮细胞缺血再灌注损伤及中药益生注射液对其的拮抗机理。方法　用无糖培养基在无氧条件下培养使人脐静脉内皮细胞株 ECV30 4缺氧 1.5小时 ,然后以含糖培养基 ,在 5 % CO2 和 37℃条件下给氧培养 5小时 ,建立内皮细胞缺氧再给氧模型 ,以模拟体内缺血再灌注对血管内皮细胞的损伤 ,并用益生注射液干预其缺氧再给氧过程 ,荧光染色显示胞内钙离子与线粒体 ,细胞化学染色显示胞内琥珀酸脱氢酶 (SDH)和乳酸脱氢酶 (L DH)活性 ,并检测细胞培养液中超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)和一氧化氮 (NO)浓度。结果　缺氧再给氧使 ECV30 4细胞变圆、收缩、脱落 ,细胞内钙离子含量增高 ,线粒体膜电位减弱 ,SDH活性下降 ,L DH活性增高 ,培养液中 SOD与 NO含量减少 ,而 MDA浓度增高 ;用益生注射液干预后 ,ECV30 4细胞形态基本恢复正常 ,上述多项检测指标的改变得以逆转。结论　缺氧再给氧导致 ECV30 4细胞发生脂质过氧化 ,胞内钙离子超载、SOD活性及 NO水平降低、线粒体功能受损 ,益生注射液可使上述变化得以逆转 ,从而拮抗内皮细胞缺氧再给氧损伤     

益生注射液对人内皮细胞缺氧再给氧损伤的拮抗机理研究

目的 探讨内皮细胞缺血再灌注损伤及中药益生注射液对其的拮抗机理。方法 用无糖培养基在无氧条件下培养使人脐静脉内皮细胞株ECV304缺氧1.5小时，然后以含糖培养基，在5%CO2和37℃条件下给氧培养5小时，建立内皮细胞缺氧再给氧模型，以模拟体内缺血再灌注对血管内皮细胞的损伤，并用益生注射液干预其缺氧再给氧过程，荧光染色显示胞内钙离子与线粒体，细胞化学染色显示胞内琥珀酸脱氢酶（SDH）和乳酸脱氢酶（LDH）活性，并检测细胞培养液中超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）浓度。结果 缺氧再给氧使ECV304细胞变圆，收缩、脱落，细胞内钙离子含量增高，线粒体膜电位减弱，SDH活性下降，LDH活性增高，培养液中SOD与NO含量减少，而MDA浓度增高；用益生注射液干预后，ECV304细胞形态基本恢复正常，上述多项检测指标的改变得以逆转。结论 缺氧再给氧导致ECV304细胞发生脂质过氧化，胞内钙离子超载，SOD活性及NO水平降低，线粒体功能受损，益生注射液可使上述变化得意以逆转，从而拮抗内皮细胞缺氧再给氧损伤。     

草氨酸盐对胰腺癌细胞糖代谢和线粒体膜电位的影响

目的探讨草氨酸盐对胰腺癌细胞panc-1糖代谢和线粒体膜电位的影响。方法体外培养人胰腺癌细胞panc-1,分别加入不同浓度的草氨酸盐培养48 h后,行酶组织化学染色及罗丹明123染色,观察细胞糖酵解关键酶乳酸脱氢酶(LDH)活性及线粒体膜电位。结果随着草氨酸盐浓度的升高,细胞LDH染色反应颗粒逐渐减少,细胞数目减少,细胞结构明显不规则;线粒体膜电位随草氨酸盐浓度增加而逐渐降低(P<0.05)。结论草氨酸盐可以抑制人胰腺癌细胞panc-1的LDH活性,阻断其糖酵解,进而影响其能量代谢杀伤肿瘤;同时可能通过降低细胞线粒体膜电位而导致细胞凋亡。     

EGB对缺血心肌线粒体膜脂质过氧化与ATP酶活性的影响

目的　探讨银杏叶提取物 (EGB)对缺血心肌的细胞保护机制。方法　用垂体后叶素 (2 0U/kg,腹腔内注射 )复制小鼠急性心肌缺血模型 ,观察不同剂量 (10 0mg/kg ,2 0 0mg/kg)EGB对心肌缺血 6 0min线粒体获得率 ,膜磷脂含量 ,Ca2 + ATP酶 ,Mg2 + ATP酶活性 ,MDA及胞浆SOD活性变化的影响。结果　预先给予EGB可有效抑制缺血所致线粒体膜磷脂含量减少 ,MDA水平增高 ,提高线粒体Ca2 + ATP酶及胞浆SOD酶活性 ,其部分作用表现为剂量依赖性。结论　EGB对缺血心肌的保护作用可能与其增加胞液SOD活性 ,防止线粒体膜脂质过氧化 ,维持线粒体膜Ca2 + ATP酶活性 ,改善缺血心肌细胞Ca2 + 转运有关。     

EGB对缺血心肌线粒体膜脂质过氧化与ATP酶活性的影响

目的：探讨银杏叶提取物（EGB）对缺血心肌的细胞保护机制。方法：用垂体后叶素（20U／kg,腹泻内注射）复制小鼠急性心肌缺血模型, 观察不同剂量（100mg/kg,200mg/kg)EGB对心肌缺血60min线粒体获得率,膜磷脂含量,Ca^2 -ATP酶,Mg^2 -ATP酶活性,MDA及胞浆SOD活性变化的影响。结果：预先给予EGB可有效抑制缺血所致线粒体膜磷脂含量减少,MDA水平增高,提高线粒体Ca^2 ATP酶及胞浆SOD酶活性,其部分作用表现为剂量依赖性,结论：EGB对缺血心肌的保护作用可参与其增加胞液SOD活性,防止线粒体膜脂质过氧化,维持线粒体膜Ca^2 -ATP酶活性,改善缺血心肌细胞Ca^2 转运有关。     

急性高眼压对兔视网膜钙—ATP酶,苹果酸脱氢酶的影响

用酶组织化学法观察兔急性高眼压后视网膜钙—ATP酶、苹果酸脱氢酶、乙酸胆碱酯酶和5’—核普酸酶活性的变化。结果：钙—ATP酶、苹果酸脱氢酶活性降低，这种变化在高眼压后持续30天，以第7天至15天最明显，提示急性高眼压可致视网膜能量代谢障碍，而对核酸代谢及胆碱能神经传导方面影响较小。     

小鼠全脑缺血再灌注损伤模型的研究

目的: 探讨结扎双侧颈总动脉、颈部软组织加压人工通气等方法,制作小白鼠脑缺血再灌注损伤动物模型的成功率和可靠性。方法: 结扎双侧颈总动脉,并用粗棉线在颈部血管、神经和气管下方绕颈后结扎加压,以脑电波变平作为全脑完全缺血的标志,造成全脑缺血30 min,然后解除结扎、恢复血液灌流60 min;使用微通气量小动物呼吸机进行人工通气;测大脑皮质乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CPK)的活性;观察大脑皮质和海马的形态学变化。结果: 缺血后数秒钟内脑电波变为一条直线,缺血30 min和再灌60 min内未见恢复。LDH和CPK活性,缺血组和再灌组显著低于对照组(P<0.01);再灌组CPK活性明显低于缺血组(P<0.01)。病理检查:缺血30 min,大脑皮质和海马锥体细胞固缩,少数神经元变性,轻度充血、水肿;再灌60 min,上述损伤进一步加重。结论: 本文建立的改进模型方法简便易行,缺血和再灌注损伤显著,模型成功率高,动物死亡率低。     

实验性大鼠脑缺血的病理组织学和超微结构变化

本实验观察不同时期的大鼠全脑缺血期与再灌流期神经元的选择性损害,其结果大脑皮层第Ⅲ、Ⅴ层、海马H_1段等神经元对缺血最敏感;再灌流时,膜结构改变颇为突出,还呈现严重的脑水肿等改变,讨论了发病机理。     

高血糖对大鼠局灶性脑缺血细胞外钙离子的影响

应用钙离子选择性微电极测定血糖对大鼠局灶性脑缺血后细胞外钙离子浓度的影响。结果发现正常血糖组（n＝8）和高血糖组（n＝8）在缺血早期已发生细胞外钙离子浓度下降（P＜0．01），而缺血15～30min时高血糖组较正常血糖组下降更为显著（P＜0．05）。提示高血糖加重脑缺血损伤可能与加强细胞外钙离子内流有关。     

大脑中动脉阻塞脑缺血病变发展及MDA含量变化

在30只大鼠中用热凝造成大脑中动脉阻塞而致脑局灶性缺血。电镜观察发现,在缺血2min后,神经细胞粗面内质网与线粒体即出现改变,其体积密度明显升高。光镜检查,缺氧10min后出现神经细胞缺血改变;梗死灶周边微血管体积密度在缺血24h后即明显升高,3天可见到毛细血管芽。肉眼检查,于缺血2h后可见梗死灶。在缺血2min后,脑组织内丙二醛(MDA)即升高,说明自由基在缺血性脑损伤中起重要作用。     

脑再灌流对大鼠脑水肿的影响

使用大鼠4—动脉阻断模型,观察脑缺血30min,再灌15、30、60和180min各组动物脑含水量,伊文思蓝血管外渗和超微结构的改变。结果发现脑含水量增加,再灌流时较单纯缺血明显。单纯缺血和再灌流15min为细胞性脑水肿,再灌30～180min时,细胞性和血管源性脑水肿同时存在。     

缺血时间对肾脏影响的实验研究

目的：研究不同热缺血时间大鼠肾脏的变化及移植肾的存活情况，方法：选择不同热缺血时间点（零时、15min,30min,60min)，观察缺血后光镜下和透射电镜下肾脏组织的病理改变以及肾组织谷胱肽过氧化物酶（GSH－PH），Na^ -K^ ATP酶和Ca^2 -ATP酶活性，丙二醛（MDA）水平的变化，也测定缺血后肾静脉血和肾组织乳酸脱氢酶（LDH）的水平。并在不同热缺血时间，分别进行大鼠肾移植，观察手术后的存活率和肾功能的变化，结果：随缺血时间的增加，肾脏病理改变逐渐加重，在缺血30min肾组织内GSH－PX，Na^ -K^ ATP酶，Ca^2 -ATP酶的活力明显下降，而LDH在缺血15min后就已经明显升高，缺血30min开始肾组织内MDA水平就已明显增高，不同热缺血时间的肾脏进行大鼠肾移植，随着缺血时间的延长，所需要的灌注液使用量增加，术后24h血肌酐的水平升高，而灌洗的效果，以及术后的存活率均下降，结论：单纯低温保存在鼠肾移植热缺血时间以不超过30min为宜。     

氯胺酮对缺血再灌注脑组织兴奋性氨基酸递质及钙含量的影响

用“四动脉闭塞法”制成兔脑缺血再灌注损伤模型，测定其组织兴奋性氨基酸递质、脑组织钙及线性粒体钙含量变化，同时观察兴奋性氨基酸受体拮抗剂氯胺酮对上述指标的影响。结果提示：缺血２０ｍｉｎ，脑组织兴奋性氨基酸递质谷氨酸和天门氨酸明显降低，再灌注后其降低更加明显。     

褪黑素对大鼠局灶性脑缺血后NO含量和NOS活性的影响及其机制

目的：探讨褪黑素对大鼠局灶性脑缺血后NO含量和NOS活性变化的影响及机制。方法：用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型。大鼠随机分为假手术组（阴性对照组），缺血组，褪黑素组（给药组）（4mg/kg)，尼莫地平组（阳性药物对照组）（0.2mg/kg)，缺血前30分钟舌下静脉给药。持续性缺血30分钟，6小时，24小时后处死动物，测定NO含量和NOS活性（用分光光度法）。结果：MCAO后，缺血30分钟NO含量及NOS活性升高，缺血6小时降低，24小时再度升高。与模型组比较，缺血30分钟，褪黑素使NO含量及NOS活性或高，6小时，24小时降低。结论：褪黑素对大鼠局灶脑缺血有一定的保护作用，其机制可能与降低脑组织中NO含量与NOS活性，减轻脑组织自由基的损伤有关。     

姜黄素对缺血再灌注大鼠脑组织SOD,MDA和亚硝酸盐含量的影响

目的：通过观察姜黄素对脑缺血再灌注时脑组织中丙二醛,亚硝酸盐,超氧化物歧化酶含量的影响,探讨其对再灌注损伤保护作用的机制。方法：选用大鼠４血管结扎缺血再灌注模型,用化学发光法测定大鼠脑组织中ＳＯＤ的活性,用比色法测定ＭＤＡ和亚硝酸盐的含量。姜黄素于缺血前３０ｍｉｎ腹腔注射给予。结果：缺血３０ｍｉｎ再灌注１５ｍｉｎ后,模型组的动物脑组织中ＭＤＡ和亚硝酸盐的含量明显升高。