RNA干扰survivin基因表达对肝癌细胞放射敏感性影响

目的探讨RNA干扰survivin基因表达对肝癌细胞放射敏感性的影响。方法构建针对人肝癌HepG2细胞survivin基因靶序列的shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-387。设置空白对照组(不加载体)、阴性对照组(加入pshRNA-survivin-NC)及siRNA转染组(加入pshRNA-survivin-387),用脂质体2000转染HepG2细胞,采用逆转录聚合酶链反应技术检测各组survivin基因mRNA表达水平。分别设置空白对照组、阴性对照组、siRNA转染组、X线照射组、siRNA转染+X线照射组,收集各组细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT法测定细胞存活分数。结果 siRNA转染组survivin基因mRNA表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组,差异有显著性(F=218.93,q=17.73、18.66,P<0.05)。siRNA转染+X线照射组细胞凋亡率明显高于其他各组,差异有显著性(F=1 421.83,q=13.81～57.48,P<0.05);siRNA转染组及X线照射组与空白组、阴性组比较,细胞凋亡率也明显提高(q=17.55～39.10,P<0.05)。siRNA转染+X线照射组细胞存活分数显著低于其他各组(F=2870.58,q=15.32～72.51,P<0.05);siRNA转染组及单纯X线照射组细胞存活分数与空白对照组、阴性对照组比较也明显降低(q=11.14～73.90,P<0.05)。结论 pshRNA-survivin-387转染能抑制survivin基因表达,诱导肝癌细胞凋亡,增强肝癌细胞的放射敏感性。     

华蟾素通过线粒体途径诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡的机制

目的 探讨华蟾素诱导人鼻咽癌CNE-2细胞增殖抑制、凋亡的作用机制.方法 将人鼻咽癌CNE-2细胞分为阴性、阳性对照组及华蟾素给药组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同水平华蟾素对人鼻咽癌细胞的增殖抑制情况;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法观察药物对细胞形态的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;免疫...     

靶向PTTG和survivin基因共干扰质粒对U251细胞的沉默效率

的：探讨共干扰质粒pGenesil-2.1-PTTG-survivin siRNA对U251细胞人垂体瘤转化基因（PTTG）和生存素（survivin）基因表达的影响。方法：U251细胞分为5组,分别为正常细胞对照组、Lipo2000+ 〖JP〗pGenesil-2.1 HK组(HK阴性对照组)、Lipo2000+pGenesil-2.1-PTTG siRNA、Lipo2000+ pGenesil-2.1- survivin siRNA及Lipo2000+pGenesil-2.1-PTTG-survivin siRNA。应用RT-PCR法、流式细胞术和Western blotting方法检测转染36 h后的各组U251细胞PTTG与survivin基因 mRNA和蛋白表达。结果：3个干扰组的U251细胞中PTTG和survivin基因mRNA和蛋白表达水平均较HK阴性对照组显著降低（P<0.01）,以共干扰质粒pGenesil-2.1-PTTG-survivin siRNA组降低最明显。结论：共干扰pGenesil1-PTTG-survivin siRNA质粒对U251细胞中PTTG与survivin基因的沉默效应强于单独沉默其中某一基因的干扰质粒。     

五味子多糖对甲状腺癌细胞株SW579凋亡及survivin表达的影响

 目的：探讨五味子多糖对人甲状腺癌SW579细胞株的生长抑制作用及其机制。 方法：48只成年雄性Wistar大鼠分为阴性对照组和药物组,阴性对照组予以生理盐水,药物治疗组予以不同剂量的五味子多糖,分别提取其血清。SW579细胞分为空白组、阴性对照组和药物组。空白组为15%小牛血清的RPMI-1640培养液,阴性对照组细胞加入阴性组大鼠的纯化血清,药物组分别加入不同浓度（100、200 和 400 mg·kg^-1）的含药血清,AO/EB荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况,MTT法检测细胞增殖情况,Western blotting检测细胞survivin的表达。 结果：流式细胞术结果显示,低、中和高剂量药物组细胞凋亡率为8.63%、35.63%和38.32%,明显高于空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率(4.23%和4.10%)（P<0.01）,并随剂量增加而增加。阴性对照组细胞生长抑制率为（0.12±0.06）%,低、中和高剂量药物组细胞生长抑制率为（27.51±1.62）%、（34.69±0.79）% 和 （45.83±1.33）%,药物组与阴性对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。Western blotting　检测低、中、高剂量药物组细胞survivin的表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。结论：五味子多糖能有效抑制人甲状腺癌细胞株SW579中survivin基因表达,诱导SW579细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

重组腺病毒载体携带凋亡素基因对肝癌细胞的作用

目的 探讨带有AFP启动子的重组腺病毒载体介导凋亡素基因对肝癌细胞的作用.方法 测定腺病毒AdAFPvp3滴度,并以MOI=100感染Hepal-6肝癌细胞(AFP ),HEK293细胞(AFP-),Lewis肺癌细胞(AFP-),24 h后Hoechst 33258染色观察凋亡形态学改变,RT-PCR检测vp3基因的表达.腺病毒AdAFPvp3以MOI=100感染hepal-6肝癌细胞,FCM检测肝癌细胞不同时段凋亡率.结果 腺病毒AdAFPvp3滴度为5×10(9)PFU/ml.Hoechst 33528染色显示甲胎蛋白阳性的Hepal-6肝癌细胞出现凋亡形态学改变,RT-PCR检测只有甲胎蛋白阳性的Hepal-6肝癌细胞表达vp3mRNA.FCM表明凋亡素基因能有效诱导肝癌细胞凋亡.结论 带有特异性甲胎蛋白启动子的重组腺病毒载体.介导凋亡素基因导入肝癌细胞后,对于能合成甲胎蛋白的肝癌细胞,具有特异性靶向性致凋亡作用.     

氯化镉诱导大鼠心肌细胞 H9c2 凋亡的作用机制

目的：研究不同浓度氯化镉（CdCl₂）引起大鼠心肌细胞 H9c2 凋亡及机制。方法：将培养的大鼠心肌细胞H9c2分为阴性对照组和镉处理组,阴性对照组为DMEM培养液,镉处理组分别暴露于 5﹑10﹑30﹑50和80 μmol•L^-1 CdCl₂ 作用6、12和24 h,采用MTT法检测细胞存活率;Annexin Ⅴ-FITC/ propidium iodide (PI)流式细胞技术(FCM)、丫啶橙（AO）/ 溴化乙啶（EB）双荧光染色法检测细胞凋亡情况。结果：镉处理组细胞存活率随着剂量的加大及时间延长明显下降,与阴性对照比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）;CdCl₂可引起H9c2细胞凋亡,各剂量组凋亡率明显高于阴性对照组（P<0.001）,各剂量组之间凋亡率差异无显著性（P>0.05）;AO/EB 染色镜下可见H9c2细胞呈典型早期凋亡形态学改变。结论：H9c2 细胞对CdCl₂的作用较敏感,低剂量﹑短时间作用即可引起细胞凋亡,但 H9c2 细胞对CdCl₂有一定耐受性。     

纳米SiO2对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡诱导作用及其机制

目的:探讨纳米二氧化硅(SiO₂)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡和周期的影响,阐明其作用机制。方法:选取不同浓度粒径为90 nm的SiO₂颗粒作用于SH-SY5Y细胞,分别为0、3.125、6.250、12.500、25.000、50.000 mg·L^-1 SiO₂组,其中0 mg·L^-1组为对照组。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率;采用AO/EB染色和 Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期百分比和细胞中活性氧(ROS)水平。结果:MTT检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于对照组 (P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于3.125 mg·L^-1 SiO₂组 (P<0.05)。AO/EB染色和 Annexin V-FITC/PI法检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于3.125 mg·L^-1 SiO₂组(P<0.05)。FCM检测,3.125、6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞中ROS水平高于对照组 (P<0.05)。25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₀/G₁期细胞百分比低于3.125 mg·L^-1SiO₂组和对照组(P<0.05),50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₂/M期细胞百分比高于对照组 (P<0.05)。结论:纳米SiO₂ 可降低SH-SY5Y细胞的活力,诱导细胞凋亡,增加细胞中ROS水平,可干扰细胞周期进程,对SH-SY5Y细胞的增殖具有抑制作用。     

Experimental study of the effects of rAd-p53 on theradiosensitivity of human hepatocellular carcionoma

目的 探讨重组p53腺病毒(rAd-p53)对不同p53基因型的肝癌细胞放射敏感性的影响及差异.方法 用rAd-p53、Ad-EGFP(构建方式及载体的结构与rAd-p53完全相同,仅目的 基因不同的腺病毒),分别感染人肝癌细胞HepG2(p53野生型)和人肝癌细胞PLC/PRF/5(p53突变型),MTT法检测细胞存活率;不同剂量X射线照射克隆形成率检测细胞放射敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 15MOI rAd-p53感染48 h后,2种细胞生长抑制率分别为(7.30±1.78)%、(11.51±1.53)%,并且随着病毒滴度或感染时间的增加,生长抑制效应亦逐渐增强(P<0.01); HepG2和PLC/PRF/5细胞放射增敏比(SER值)分别为1.24和1.52;细胞凋亡率分别为(22.19±1.04)%、(30.36±2.74)%;均明显高于空白组和Ad-EGFP组(P<0.01).结论 rAd-p53能显著抑制人肝癌细胞生长、诱导细胞凋亡和提高细胞放射敏感性,并且对PLC/PRF/5细胞(p53突变型)作用强于HepG2(p53野生型).     

喉癌细胞周期和细胞凋亡的同步检测及意义

目的：检测喉鳞癌细胞的细胞周期变化和细胞周期各时相细胞凋亡情况,探讨细胞周期的变化和细胞周期各时相的细胞凋亡在喉癌发生、发展及预后中的作用。方法： 应用流式细胞仪双参数分析结合脱氧核苷酸原位末端标记（TUNEL）技术,检测15例声带息肉和387例喉鳞癌细胞周期和细胞周期各时相的细胞凋亡。结果：与声带息肉组比较,喉鳞癌组在G₀G₁期细胞构成比增加,但差异无显著性（P>0.05）,S期和G₂M期细胞构成比无明显变化,其细胞凋亡指数明显低于声带息肉组（P<0.05）,而且主要是由于G₀G₁期细胞凋亡的下降所引起;低分化鳞癌较高、中分化鳞癌G₂M期细胞构成比显著性增加,S期、G₂M期和总的细胞凋亡指数反而明显增加（P<0.05）;5年内死亡组与复发转移组的G₂M期构成比显著性增加,S期、G₂M期和总的细胞凋亡指数明显增加（P<0.05）;存活5年以上组和未复发转移组G₂M期细胞构成比下降明显,G₀G₁期和总的细胞凋亡指数亦较声带息肉组明显下降（P<0.05）。结论：肿瘤G₂M期细胞比例显著性增加,S期、G₂M期和总的细胞凋亡指数的明显增加可以作为喉癌恶性度高、预后不良、需要辅助治疗的客观指标。     

腺病毒介导的HSV-TK/GCV系统对PVNS滑膜细胞的杀伤作用

目的〓〖HTK〗探讨腺病毒介导HSV-TK/GCV系统对色素沉着绒毛结节滑膜炎(PVNS)滑膜细胞的体外杀伤作用。〖HTW〗方法〓〖HTK〗将含LacZ基因的重组腺病毒载体Ad-LacZ转染PVNS滑膜细胞, X-gal染色法确定腺病毒对该细胞的转染效率，PCR检测转染细胞中HSV-TK基因的表达，MTT法检测TK阳性细胞对GCV的体外敏感性及旁观者效应，流式细胞仪检测HSV-TK/GCV系统作用后细胞的凋亡及坏死。〖HTW〗结果〓〖HTK〗感染复数为120时，近100％的细胞可被转染。HSV-TK/GCV系统对PVNS滑膜细胞的杀伤作用十分明显，且存在明显的旁观者效应。HSV-TK/GCV系统作用后细胞出现明显的凋亡及坏死。〖HTW〗结论〓〖HTK〗HSV-TK/GCV系统可明显杀伤PVNS中过度增殖滑膜细胞，可望用于PVNS的治疗。     

siRNA抑制STAT3基因对人乳腺癌细胞的影响

[摘要]　目的　应用RNAi干扰技术沉默MCF-7乳腺癌细胞信号转导及转录活化因子3 (STAT3),观察乳腺癌细胞生长及凋亡情况。方法　采用MTT法观察不同浓度的重组质粒（A组：0.1 μg/mL psilencer3.0-H1-STAT3-siRNA重组质粒转染组、B组：0.2 μg/mL psilencer3.0-H1-STAT3-siRNA重组质粒转染组、C组：0.3 μg/mL psilencer3.0-H1-STAT3-siRNA重组质粒）转染MCF-7乳腺癌细胞株后对乳腺癌细胞生长抑制作用的情况;采用半定量RT-PCR法,检测重组质粒对STAT3基因表达的影响;吖啶橙染色、流式细胞术观察细胞凋亡。结果　A、B、C三组的重组质粒对乳腺癌MCF-7细胞株有抑制作用,三组的生长抑制率48 h分别为27.17%、40.21%、26.08%,72 h分别为41.30%、65.21%、42.39%;48 h、72 h生长抑制率与空白组、空质粒对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);在不同浓度的重组质粒组,STAT3 mRNA表达均下降,与空白组、空质粒对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),其中以B组表达下降更明显;吖啶橙染色结果空白组及阴性组细胞呈绿色或黄绿色荧光,实验组细胞可见较多黄色荧光,偶见红色荧光, 提示实验组细胞较多呈早中期凋亡。细胞周期分析显示重组质粒组细胞出现G0-G1期阻滞,且B组(0.2 μg/mL )细胞凋亡最明显。结论 STAT3 siRNA可以下调MCF-7乳腺癌细胞STAT3 mRNA的表达水平,抑制MCF-7细胞的生长。     

P27RF-Rho基因沉默对肝癌Bel7402细胞增殖的影响

目的:构建靶向新分子P27RF-Rho基因的慢病毒RNA干扰载体,研究P27RF-Rho基因对肝癌Bel7402细胞增殖能力的影响。方法:将合成的寡核苷酸片段克隆入RNAi载体,并转染肝癌Bel7402细胞,以沉默P27RF-Rho基因表达。实验分为空白对照Bel7402组、阴性对照Scramble-siRNA组和P27RF-Rho-siRNA组。荧光显微镜观察细胞转染情况;RT-PCR法检测各组Bel7402细胞中P27RF-Rho基因沉默效果;绘制生长曲线,检测转染细胞的增殖情况;平板克隆实验检测细胞的克隆形成能力;RT-PCR法检测细胞增殖能力相关基因P16、Cyclin E、MMP-9和CDK-5 mRNA的表达水平。结果:P27RF-Rho-siRNA组P27RF-Rho基因表达水平明显低于空白对照Bel7402组和阴性对照Scramble-siRNA组(P<0.01)。P27RF-Rho-siRNA组肝癌细胞的生长速度明显低于空白对照Bel7402组和阴性对照Scramble-siRNA组(P<0.05)。与2个对照组比较,P27RF-Rho-siRNA组细胞中CyclinE、MMP-9和CDK-5 mRNA表达水平降低(P<0.01),P16 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。结论:抑制P27RF-Rho基因的表达能够降低肝癌细胞的增殖能力。     

siRNA沉默survivin对人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用

目的: 探讨siRNA沉默survivin基因表达对胃癌细胞生长的抑制作用及其机制,为胃癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法: 针对survivin　mRNA 序列设计合成编码siRNA的DNA模板,构建2个重组质粒pGCsilencerU6/GFP/survivin siRNA-１和-２;实验分为脂质体对照、空质粒转染对照及survivin siRNA重组质粒转染治疗组,转染胃癌细胞SGC-7901,采用RT-PCR法检测survivin　mRNA的表达,Western blotting检测蛋白表达,观察重组质粒对其转染的SCG-7901细胞survivin基因表达的影响;用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测量细胞生长情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果: Western blotting、RT-PCR结果证实转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-1 的SCG-7901细胞survivin蛋白质及mRNA抑制率（78.25%及88.75%）均高于脂质体对照组（5%及2%）和空质粒对照组（1%及6%）（P<0.01）;转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-2的SCG-7901细胞survivin蛋白质及mRNA抑制率（42%及77%）也均高于脂质体对照组和空质粒对照组（P<0.01）;MTT法检测结果显示转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-1组细胞体外生长的抑制率（64%）高于空质粒对照组（11%）（P<0.01）;流式细胞术检测的转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-1组细胞凋亡率（21.20±3.21）高于脂质体对照组（0.830±0.001）和空质粒对照组（1.98±0.67）（P<0.01）。结论:重组质粒pGCsilencerU6/GFP/survivin-siRNA可抑制胃癌细胞中survivin的表达,并抑制胃癌细胞生长,促进其凋亡。     

Smac过表达增强氯化镉对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制和促凋亡作用

目的:研究Smac过表达联合氯化镉(CdCl2)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响,为以Smac为基础的肿瘤基因治疗以及镉作为抗肝癌药物的开发提供实验依据.方法:实验共设立5组,分别为对照组、pcDNA3.1+组、pcDNA3.1+-hSmac组、CdCl2组以及CdCl2联合Smac组.对照组细胞不进行细...     

RNA干扰抑制MDR1表达并逆转Bel7402/5-Fu肝癌细胞耐药性的研究

目的：研究小片段RNA干扰对肝癌耐药细胞系Bel7402／5-Fu中多药耐药基因（muhidrug resistance 1,MDR1）及其蛋白产物P-gP表达的抑制作用和逆转其耐药性的效果。方法：合成针对MDR1启动子区域的RNA干扰小片段,转染肝癌耐药细胞Bel7402／5-Fu。通过RT-PCR和Westem blot方法,在mRNA和蛋白水平评价RNA干扰对MDR1表达的影响。MTT法检测RNA干扰逆转Bel7402／5-Fu细胞耐药性的效果,按实验组和对照组细胞的半数抑制剂量（IC50）计算RNA干扰对细胞耐药倍数的改变和RNA干扰组细胞的耐药逆转倍数。以流式细胞仪比较各组细胞在相同浓度化疗药物作用时细胞的凋亡情况。结果：在耐药肝癌细胞Be17402／5-Fu中,RNA干扰明显抑制了MDR1 mRNA和蛋白产物P-gP的表达水平,其表达仅为对照组细胞的22．55％和25．49％（P〈0．01）。在相同浓度化疗药物的作用下,RNA干扰组Bel7402／5-Fu细胞凋亡比例显著高于对照组（P〈0．01）,表明细胞耐药性显著下降,对5-Fu的耐药逆转倍数为14．88倍。结论：肝癌耐药细胞Bel7402／5-Fu中,RNA干扰对MDR1 mRNA及其蛋白产物P-gP的表达水平有显著抑制作用,具有良好的逆转耐药性的效果。     

ARK5在肝癌组织中的表达及其对肝癌SMMC-7721细胞生长的影响

目的： 检测ARK5在肝癌组织及肝癌SMMC-7721细胞中表达水平,探讨其对肝癌细胞生长的作用。 方法： 采用PCR和Western blotting法检测30例肝癌组织及癌旁组织、正常肝细胞LO2及肝癌SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白表达水平;合成ARK5 的小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,转染至SMMC-7721细胞分别为实验组和阴性对照组,同时设空白对照组,采用MTT法和流式细胞术检测各组肝癌细胞的增殖活性和细胞凋亡率。 结果： PCR和Western blotting法检测,肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁组织和LO2细胞(P＜0.05)。MTT法检测,实验组24、48和72　h细胞生长抑制率分别为(19.39±5.42)%、(23.19±0.53)%和(20.74±1.23)%,均高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01);流式细胞术检测,实验组细胞凋亡率为(15.017±0.945)%,与空白对照组［(8.770±0.656)%］和阴性对照组［(8.763±1.201)%］比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论：ARK5在肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中表达水平明显升高,抑制其表达可抑制肝癌细胞生长,促进肝癌细胞凋亡,提示ARK5可能作为一种癌基因促进肝癌的形成。     

Survivin-ASODN对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的促进作用及其机制

目的：应用反义寡核苷酸（ASODN）技术靶向抑制生存素（survivin）基因,研究其对肝癌 SMMC-7721细胞凋亡的影响,阐明survivin反义寡核苷酸（survivin-ASODN）促进SMMC-7721细胞凋亡的作用机制。方法：设计合成survivin-ASODN序列（FAM荧光素标记）。利用脂质体介导法分别用浓度为100、200、300、400和600 nmol?L-1 survivin-ASODN转染SMMC-7721细胞(ASODN转染组),并设空白对照组、空脂质体对照组 和正义寡核苷酸（SODN）对照组。应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度survivin-ASODN体外转染SMMC-7721细胞24、48和72 h后SMMC-7721细胞凋亡率及细胞周期;Western blotting法检测survivin蛋白表达水平。结果：与各对照组比较,荧光素标记的ASODN转染SMMC-7721细胞24 h后,细胞生长开始受到抑制,细胞凋亡率增加,呈现剂量-时间依赖性（P<0.05）;作用48 h后,ASODN转染组细胞在G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰,G0/G1期细胞明显减少（P<0.05）,G2/M期细胞显著增加（P<0.05）,细胞被阻滞于G2/M期。与各对照组比较,不同浓度ASODN转染组SMMC-7721细胞survivin蛋白表达水平下降（P<0.05）,且随作用时间的延长而降低（P< 0.05）。结论：survivin-ASODN通过抑制survivin蛋白表达、改变细胞周期进程等机制促进SMMC-7721细胞凋亡,并且呈现时间-剂量依赖性。     

3-溴丙酮酸对肝癌Bel7402细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:观察糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸对肝癌Bel7402细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测3-溴丙酮酸对Bel7402细胞的增殖抑制效应,PI单染流式细胞术检测不同浓度3-溴丙酮酸（0、50、100、200 μmol/L）对Bel7402细胞凋亡的影响,ATP检测试剂盒分析细胞内ATP水平,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:3-溴丙酮酸可浓度和时间依赖性地抑制Bel7402细胞的增殖（P<0.01）,作用24、48、72 h的IC₅₀值分别为422.9、143.9、85.0 μmol/L。3-溴丙酮酸可诱导Bel7402细胞发生明显的细胞凋亡,50、100、200 μmol/L 3-溴丙酮酸作用24 h的细胞凋亡率均明显高于对照组（P<0.01）。ATP水平检测结果表明,3-溴丙酮酸可明显降低Bel7402细胞内的ATP水平（P<0.01）。Western blot结果显示,3-溴丙酮酸可下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,并上调凋亡诱导蛋白Bax的表达。结论:3-溴丙酮酸具有诱导肝癌Bel7402细胞凋亡的作用,其机制可能是通过引起细胞内ATP降低、调节细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。     

Effect of all-trans retinoic acid on drug sensitivity and expression of survivin in LoVo cells

Background All-trans retinoic acid （ATRA） can influence the tumor cell proliferation cycle, and some chemotherapeutic drugs are cycle specific. In this study, we hypothesize that ATRA can enhance chemotherapeutic drug sensitivity by affecting the cell cycle of tumor cells.
Methods The cell cycle of LoVo cells was evaluated using flow cytometry （FCM）. Cell viability was analyzed using the MTT assay. The morphologic changes in the treated LoVo cells were measured with acridine orange （AO）/ethidium bromide （EB） staining. Expression of survivin in LoVo cells was analyzed by immunofluorescence assay.
Results After LoVo cells were treated with ATRA, the G0/G1 ratio of the tumor cells increased and the cell ratio of S-and G2/M-phase decreased. Viability of the cells decreased significantly after combined treatment with ATRA and 5-fluorouracil （5-FU） or mitomycin c （MMC） and was evaluated by fluorescence microscopy. Expression level of survivin in the tumor cells decreased after ATRA combination treatment.
Conclusions ATRA enhances drug sensitivity of the LoVo cell line to cell cycle-specific agents and inhibits the expression of survivin in LoVo cells. The combination of ATRA and 5-FU or MMC promoted cell apoptosis, and the mechanism involved in apoptosis may be related to inhibition of survivin gene expression.