氯化镉诱导大鼠心肌细胞 H9c2 凋亡的作用机制

目的：研究不同浓度氯化镉（CdCl₂）引起大鼠心肌细胞 H9c2 凋亡及机制。方法：将培养的大鼠心肌细胞H9c2分为阴性对照组和镉处理组,阴性对照组为DMEM培养液,镉处理组分别暴露于 5﹑10﹑30﹑50和80 μmol•L^-1 CdCl₂ 作用6、12和24 h,采用MTT法检测细胞存活率;Annexin Ⅴ-FITC/ propidium iodide (PI)流式细胞技术(FCM)、丫啶橙（AO）/ 溴化乙啶（EB）双荧光染色法检测细胞凋亡情况。结果：镉处理组细胞存活率随着剂量的加大及时间延长明显下降,与阴性对照比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）;CdCl₂可引起H9c2细胞凋亡,各剂量组凋亡率明显高于阴性对照组（P<0.001）,各剂量组之间凋亡率差异无显著性（P>0.05）;AO/EB 染色镜下可见H9c2细胞呈典型早期凋亡形态学改变。结论：H9c2 细胞对CdCl₂的作用较敏感,低剂量﹑短时间作用即可引起细胞凋亡,但 H9c2 细胞对CdCl₂有一定耐受性。     

大鼠Smac基因的克隆及其在心肌细胞H9C2中的表达

目的：克隆大鼠促凋亡基因Smac,构建真核表达载体pcDNA3.1⁺-rSmac,并在心肌细胞中表达。方法：应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术从大鼠肾组织中扩增到大鼠Smac基因的CDs片段,构建含Smac基因的真核表达载体pcDNA3.1⁺-rSmac并将此重组质粒、空载体pcDNA3.1⁺、pcDNA3.1⁺-EGFP通过脂质体介导转染大鼠心肌细胞H9C2,荧光显微镜、流式细胞术间接检测转染效率,RT-PCR法检测外源基因的表达。结果：经测序目的基因序列与GenBank（NM_001008292）公布的结果一致,所构建的重组质粒pcDNA3.1⁺-rSmac经PCR和酶切鉴定所释放的片段大小与预期结果相符。荧光显微镜和流式细胞术检测,细胞转染有效,转染效率达38.36%。转染重组载体pcDNA3.1⁺-rSmac 48 h后,H9C2细胞Smac的mRNA水平明显升高。其中,对照组Smac/β-actin为1.19,空载体组Smac/β-actin为1.31,二者之间差异无显著性（P>0.05）;转染pcDNA3.1⁺-rSmac组Smac/β-actin为1.67,与对照组比较差异具有显著性（P<0.01）。结论：克隆大鼠Smac基因成功,成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1⁺-rSmac,并在转染后的心肌细胞中表达,为研究Smac基因在心肌细胞凋亡过程中的调控作用奠定基础。     

氯化镉对人肝癌细胞SMMC-7721抑制作用

目的 研究氯化镉（CdCl2）对人肝癌细胞（SMMC-7721）的抑制作用并探讨其作用机制。方法应用生长曲线法、四甲基偶氮噻唑蓝法（MTT）、流式细胞术（FCM）检测CdCl2对SMMC-7721的生长抑制及对细胞周期的影响。结果CdCl2对肝癌细胞SMMC-7721有明显的生长抑制作用，且存在剂量-效应关系；影响细胞周期进程并出现G0／G1期阻滞。结论CdCl2能有效抑制肝癌细胞株的生长，其抑制作用可能与影响细胞周期进程有关。     

镉致大鼠心肌细胞H9c2凋亡作用

目的 研究不同浓度氯化镉(CdCl2)引起大鼠心肌细胞H9c2凋亡作用.方法 采用姬姆萨染色法观察氯化镉对细胞毒作用的形态学改变;采用Annexin V-FITC/propidium iodide(PI)流式细胞技术(flowcytometric,FCM)检测氯化镉对H9c2细胞凋亡的影响;采用流式细胞术法检测线粒体膜电位(MMP)的变化;采用免疫细胞化学法检测细胞色素C表达.结果 5,10,30,50,80 lamol/L的氯化镉分别作用H9c2细胞6,12,24 h可以诱导细胞凋亡;随着镉剂量的加大及作用时间的延长,线粒体膜电位明显下降,与阴性对照比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着镉剂量增加,CytC表达增强.结论 镉可以通过线粒体途径诱导H9c2细胞凋亡.     

苯并（a）芘对肝细胞凋亡及脂质过氧化作用

目的探讨苯并（a）芘（BaP）对小鼠肝细胞凋亡及其与脂质过氧化的关系。方法ICR小鼠灌胃染毒,染毒剂量分别为0、5、10、20,40mg／kg,应用吖啶橙／溴化乙啶（AO／EB）荧光双染法检测肝细胞凋亡情况并测定肝组织脂质过氧化主要终产物丙二醛（MDA）的含量。结果BaP各染毒剂量组肝细胞凋亡发生率与对照组比较,差异均有统计学意57．（P〈0.05）,MDA含量40mg／kg BaP染毒剂量组与对照组比,较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论BaP可诱发小鼠肝细胞发生凋亡和脂质过氧化,氧化损伤参与了介导细胞凋亡的过程。     

高效液相色谱法同时测定白带丸中芍药苷和盐酸小檗碱的含量

目的观察高效液相色谱法(HPLC)同时测定白带丸中芍药苷和盐酸小檗碱的含量。方法采用高效液相色谱法。色谱柱:Agilent XDB-C_(18)(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速:1.0m L/min,柱温30℃,检测波长:245nm。结果芍药苷和盐酸小檗碱线性范围分别为0.18~0.42μg、1.26~2.94μg,芍药苷平均回收率为99.0%,RSD为1.1%(n=6),盐酸小檗碱平均回收率98.8%,RSD为1.1%(n=6)。结论本法准确可靠、重现性好,为白带丸的质量控制和评价提供了依据。     

氯化汞对人肝细胞HL-7702细胞毒性作用

目的 研究氯化汞(HgCl2)对人肝细胞HL-7702细胞增殖、DNA损伤、细胞周期及金属硫蛋白(MT)表达的影响.方法 采用四甲基偶氮噻唑蓝法(MTT)、单细胞凝胶电泳(SCGE)、流式细胞术(FCM)及免疫细胞化学方法进行检测.结果 HgCl2对HL-7702细胞具有细胞毒性,能够明显抑制HL-7702细胞增殖,并有剂量依赖关系(P<0.05).HgCl2对HL-7702细胞的抑制率随染毒时间延长而增高.HgCl2可诱导HL-7702细胞产生DNA损伤,随着HgCl2浓度增大和染毒时间延长,DNA损伤率升高(P<0.05).HgCl2可影响HL-7702细胞DNA合成过程和细胞周期进程.HgCl2染毒导致HL-7702细胞出现G0/G1期阻滞,进入S期的细胞数量减少(P<0.05).HgCl2可以诱导保护蛋白MT的表达.随HgCl2浓度增大,MT表达较对照组明显增加(P<0.05).结论 HgCl2能够对HL-7702细胞产生细胞毒作用,降低含巯基酶活性、损伤DNA、影响细胞周期进程.