RTX诱导神经管畸形动物模型的建立及其相关机制研究

摘要 目的 通过胸苷酸合成酶（Thymidylate synthase,TS）特异性抑制剂——雷替曲塞（RTX）干预孕鼠,建立小鼠神经管畸形（neural tube defects,NTDs）模型,探讨细胞凋亡和增殖、DNA损伤在诱导的NTDs发生中的潜在机制。方法 将孕7.5天 C57BL/6j小鼠随机分为6组,1组对照组,5组RTX干预组。对照组腹腔注射0.9%NaCl,RTX干预组分别腹腔注射不同剂量的RTX（5,10,11.5,13.5,15mg/kg body weight）,孕11.5天取胚胎并观察其发育情况。苏木精-伊红（H& E）染色观察神经管闭合情况,放射性法测定TS活性,高效液相色谱检测胸苷酸(dTMP)及尿苷酸(dUMP）含量,Western-blot分析复制蛋白A2(RPA2)、γ-H 2 AX和caspase-3表达,免疫组化检测细胞增殖。结果 RTX注射剂量为11.5mg/kg时,NTDs胚胎发生率最高;RTX干预后,TS活性较对照组显著降低,dUMP含量逐渐升高,dTMP含量逐渐下降;RTX建立的NTDs模型中,RPA2和γ-H 2 AX磷酸化水平显著升高;caspase-3表达量增加,细胞增殖减少。结论 通过RTX干预孕鼠可建立小鼠NTDs模型,dTMP合成障碍导致DNA损伤、细胞凋亡与增殖失调可能是叶酸缺乏导致NTDs的重要机制之一。     

黄芩苷在原代心肌细胞氧化损伤中的保护作用及机制研究

目的通过体外实验研究黄芩苷在心肌细胞氧化损伤中的保护作用及其机制。方法取SD乳鼠心肌细胞进行原代培养,按各实验需要分组并干预。采用MTT法检测不同剂量黄芩苷对心肌氧化损伤细胞模型中细胞活力的影响,采用Western Blot法检测不同剂量黄芩苷对心肌氧化损伤细胞模型DNA双链断裂损伤指标γ-H2AX和核内β-catenin表达的影响,并用Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl干预,进一步探讨黄芩苷在对心肌氧化损伤细胞模型的保护机制。结果心肌氧化损伤细胞模型的细胞活力显著下降,γ-H2AX和核内β-catenin的蛋白表达明显上调;低剂量黄芩苷对心肌氧化损伤细胞模型的细胞活力和γ-H2AX、核内β-catenin的表达无明显影响;而中、高剂量黄芩苷能够明显阻止受损心肌细胞活力下降,并下调心肌氧化损伤细胞模型的γ-H2AX和核内β-catenin的表达;且高剂量黄芩苷能够下调Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl干预下的原代心肌细胞γ-H2AX和核内β-catenin的表达水平。结论黄芩苷能够通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,阻止心肌细胞氧化损伤。     

γ-H2AX的表达对初诊多发性骨髓瘤患者的预后影响

目的 探讨初诊多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓中γ-H2AX的表达水平及其与患者预后的关系.方法 选择该院初诊的MM患者为病例组,非造血系统肿瘤并经骨髓涂片和活检检查未见明显形态异常者为对照组.采用免疫组织化学染色检测病例组和对照组骨髓中γ-H2AX的表达水平,IPP半定量分析并比较其表达差异,并根据病例组γ-H2AX的表达量将其分为强表达和弱表达两组,探究γ-H2AX表达量与MM患者预后的关系.结果 病例组患者骨髓中γ-H2AX表达显著高于对照组(P＜0.05);且强表达组MM患者γ-H2AX的表达水平明显强于弱表达组(P＜0.05).结论 γ-H2AX在MM患者的骨髓组织中表达水平增多,其强表达预示MM患者较短的生存时间.     

KLF4在伽马刀照射所致大鼠放射性脑损伤中的作用机制

目的研究伽马刀立体定向照射大鼠正常脑组织后星形胶质细胞中KLF4及γ-H2AX随照射剂量变化的表达,探讨KLF4与放射性脑损伤的关系。方法成年雄性Wistar大鼠30只,按随机数字表法分为6组,每组5只,分别以不同照射剂量(0、10、20、30、40、50 Gy)照射大鼠右侧尾壳核,照射30 min后处死,并分析不同照射剂量下KLF4、γ-H2AX阳性细胞占星形胶质细胞的百分比,分析KLF4和γ-H2AX的表达与照射剂量之间、KLF4与γ-H2AX之间的线性回归关系。结果 KLF4、γ-H2AX阳性细胞占星形胶质细胞的百分比随照射剂量增加而上升(P<0.05),且KLF4、γ-H2AX的表达与照射剂量、KLF4与γ-H2AX均有显著线性关系(P<0.05)。结论 KLF4与辐射所致大鼠脑星形胶质细胞DNA双链损伤关系密切,其可能是辐射致DNA损伤的关键分子,通过引起DNA双链损伤导致放射性脑损伤。     

IncRNA-TUG1促进放射后人骨髓间充质干细胞衰老

目的 探讨IncRNA-TUG1在放射导致的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)衰老中所起的作用.方法 实验分为IncRNA-TUG1干扰组、IncRNA-TUG1对照组,用γ射线造成放射损伤后,采用实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测IncRNA-TUG1在2组的表达变化,采用Western blot检测2组的γ-H2AX蛋白反映DNA损伤,检测衰老相关蛋白p53表达以及β-半乳糖苷酶染色反映细胞衰老.结果 γ射线放射显著增加了BM-MSCs中IncRNA-TUG1表达(P＜0.01),BM-MSCs中迅速出现γ-H2AX磷酸化,p53蛋白水平升高,BM-MSCs衰老明显增加;而干扰IncRNA-TUG1后,放射后BM-MSCs的DNA损伤修复加快,p53蛋白水平下降,细胞衰老明显减少(P＜0.01).结论 放射可能通过IncRNA-TUG1促进BM-MSCs的衰老.     

牡荆苷对MPTP诱导的帕金森病模型小鼠行为学、神经递质及脑黑质多巴胺能神经元凋亡的影响

目的探究牡荆苷对帕金森病(PD)模型小鼠行为学、血清胱抑素-C(Cys-C)和神经元特异烯醇化酶(NSE)、神经递质及多巴胺能神经元氧化应激和凋亡的影响。方法 32只小鼠随机分为空白组、模型组、美多芭组、牡荆苷组。除空白组外,其余各组均腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),连续7 d。空白组和模型组灌胃生理盐水,美多芭和牡荆苷组分别灌胃美多芭片和牡荆苷,连续干预30 d。爬杆实验和游泳实验检测小鼠行为学,酶联免疫吸附法(ELISA)检测多巴胺(DA)、二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、5-羟色胺(5-HT)水平以及Cys-C和NSE含量;分光光度法检测小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的水平,Tunel染色检测多巴胺能神经元凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑黑质Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白表达。结果与正常组相比,模型组小鼠游泳实验评分、Cys-C、DA、DOPAC、HVA、5-HT、SOD、GSH-PX、Bcl-2蛋白表达均降低,爬杆实验评分、NSE、MDA、神经元凋亡率、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达均升高(P0.01);与模型组相比,牡荆苷组和美多巴组小鼠游泳实验评分、Cys-C、DA、DOPAC、HVA、5-HT、SOD、GSH-PX水平、Bcl-2蛋白表达均显著升高,而爬杆实验评分、NSE、MDA、多神经元凋亡率、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达均显著降低(P0.01);与美多巴组比较,牡荆苷组小鼠5-HT、SOD、GSH-Px和Bcl-2蛋白显著增加,MDA、神经元凋亡率、Bcl-2蛋白表达显著降低。结论牡荆苷对MPTP诱导的帕金森病模型小鼠行为学症状和神经损伤具有保护作用,机制可能与改善儿茶酚胺类神经递质,抑制脑黑质神经元氧化损伤和细胞凋亡有关。     

奥拉帕利联合GANT61对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨胶质瘤相关癌基因同源物(glioma-associated oncogene homolog 1, GLI1)抑制剂GANT61,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly-ADP Ribose polymerase, PARP)抑制剂奥拉帕利(olaparib)以及olaparib联合GANT61对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法通过Western印迹法检测正常卵巢上皮组织和上皮性卵巢癌组织中GLI1的表达情况以及正常卵巢上皮细胞(IOSE-80)和卵巢癌细胞系(SKOV3、ES2、HEY、A2780)中GLI1的表达水平。选取高表达GLI1的卵巢癌细胞系进行实验,设置实验分组: 对照组、GANT61组、olaparib组和olaparib联合GANT61组。通过CCK8法、平板克隆实验、EDU实验检测各处理组细胞增殖情况。通过流式细胞术检测各处理组细胞中Annexin V+/7AAD+细胞比例。通过Western印迹法以及免疫荧光分别检测DNA损伤标志物γ-H2AX的表达水平和灶点形成情况。结果与正常上皮性卵巢组织相比,GLI1在上皮性卵巢癌组织中显著高表达(P＜0.001);与IOSE-80正常卵巢上皮细胞相比,卵巢癌细胞中GLI1蛋白表达水平显著升高(P＜0.05)。CCK8、平板克隆实验、EdU实验以及流式细胞术结果表明,相较于对照组,GANT61组和olaparib组细胞抑制率和凋亡率均增高(P＜0.05),且联合组较olaparib组细胞抑制率和凋亡率增高(P＜0.05)。免疫荧光和Western印迹法的结果表明,相较于对照组,GANT61组和olaparib组细胞γ-H2AX的灶点数量与蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),且联合组较olaparib组细胞γ-H2AX的灶点数量与蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05)。结论olaparib联合GANT61能够显著诱导卵巢癌细胞DNA损伤、抑制细胞增殖以及诱导细胞凋亡。     

白芍总苷对皮肤机械屏障障碍小鼠皮肤屏障功能的影响

目的:研究白芍总苷对小鼠皮肤机械屏障受损的修复作用及可能机制。方法:雌性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、白芍总苷低剂量(0.2 mg/g)组、白芍总苷高剂量(0.4 mg/g)组和糠酸莫米松(1 mg/g)组,每组12只。除正常组外,其余各组采用胶带法诱导小鼠皮肤机械屏障损伤模型,连续5 d。第6天起,各组给予相应药物外用干预,0.3 g/只,正常组和模型组给予等量水凝胶基质,连续14 d。末次给药后,检测受损皮肤的含水量、油脂含量及pH值。分离受损皮肤组织,HE染色后光镜下观察皮肤组织形态学变化,试剂盒检测皮肤组织白介素-6(IL-6)和神经酰胺的含量。结果:①HE染色观察显示,模型组小鼠皮肤炎症细胞浸润,角质层增厚,腺上皮细胞增多;白芍总苷干预后上述病变情况明显改善,高剂量组作用更为显著。②与正常组相比,模型组小鼠受损皮肤的含水量、油脂含量及pH值明显降低(P0.01);与模型组相比,糠酸莫米松组及白芍总苷高、低剂量组小鼠的皮肤含水量均显著升高(P0.05,P0.01),糠酸莫米松组及白芍总苷高剂量组小鼠皮肤的油脂含量亦显著升高(P0.01)。③与正常组相比,模型组小鼠皮肤组织IL-6含量显著升高(P0.05),神经酰胺含量显著降低(P0.01);与模型组相比,白芍总苷高剂量组和糠酸莫米松组小鼠皮肤组织的IL-6含量明显降低(P0.05,P0.01),神经酰胺含量明显升高(P0.01)。结论:白芍总苷可修复皮肤机械屏障受损,其机制可能与降低角质层中炎症介质IL-6的含量、增加角质层中神经酰胺的含量有关。     

Apg-2对H_2O_2诱导的BaF3-P210细胞损伤的影响

目的 探讨Apg-2对H2O2诱导的Bcr/Abl阳性BaF3-P210细胞损伤的影响.方法 以H2O2诱导的pMIGR1 空载体感染细胞BaF3-MIGR1和稳定表达Bcr/Abl的BaF3-P210细胞为损伤模型,Western blot和RT-PCR检测H2O2损伤后2组细胞Apg-2表达;建立过表达Apg-2的BaF3-MIGR1细胞(BaF3-MIGR1-Apg2)和BaF3-P210细胞(BaF3-P210-Apg2)H2O2诱导的损伤模型,Western blot检测磷酸化组蛋白(γ-H2AX)的表达,免疫荧光法检测γ-H2AX焦点数.结果 H2O2作用后的BaF3-MIGR1和BaF3-P210细胞的Apg-2蛋白和mRNA水平表达均升高(P<0.05).H2O2作用BaF3-MIGR1和BaF3-MIGR1-Apg2细胞后其γ-H2AX蛋白表达升高,γ-H2AX焦点数亦增加;BaF3-P210和BaF3-P210-Apg2细胞H2O2损伤后γ-H2AX蛋白表达和焦点数均无明显变化.结论 Apg-2可减少H2O2诱导的BaF3-P210细胞γ-H2AX表达,从而可能降低其细胞损伤.     

DNA-PKcs在DNA双链断裂应答过程中对H2AX磷酸化起主导作用

目的 研究在DNA双链断裂(double strand break,DSB)情况下,DNA-PKcs和ATM在磷酸化H2AX中所发挥的作用.方法 在HeLa细胞中,以高效的DNA双链断裂诱导剂新制癌菌素(neocarzinostatin,Ncs)诱导DSB形成,Western blot分析H2AX磷酸化的时间,剂量依赖及其去磷酸化的动态变化.DNA-PKcs抑制剂NU7026及ATM抑制剂Ku55933分别作用细胞,Western blot检测其对H2AX磷酸化的影响.以α-satellite序列为对象,γ-H2AX CHIP检测DNA-PKcs或ATM抑制前后H2AX磷酸化情况,得出定量数据.结果 γ-H2AX生成呈Ncs作用时间及剂量依赖过程.Ncs短时间作用后,γ-H2AX能够去磷酸化恢复.抑制DNA-PKcs明显影响γ-H2AX生成,而抑制ATM使得γ-H2AX生成高峰延迟.CHIP显示抑制DNA-PKcs后其DNA富集倍数仅为抑制前的27％,而抑制ATM后其富集倍数为抑制前的63％.结论 DNA-PKcs可能在DNA双链断裂应答过程中对H2AX磷酸化起主导作用.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。      

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

人体寄生虫学多媒体教学效果的初步评估

通过分析多媒体辅助教学方法与传统教学方法在人体寄生虫学教学中的应用,指出多媒体辅助教学对于提高教学质量效果显著,受到了绝大部分同学的赞同和欢迎.     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

头孢他啶用于胸外科感染的疗效分析

目的 观察和评价头孢他啶（泰得欣）应用于普通胸外手术的临床疗效和安全性。方法 采用对比试验，观察2005年8-10月96例普胸手术预防和治疗的疗效和不良反应。结果 泰得欣在预防和治疗术后感染中总有效率95．9％，不良反应发生率为5．2％。结论 泰得欣临床效果满意，使用安全，值得在普胸手术中选用。