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1.
背景:脐带间充质干细胞的临床应用面临移植前保存的问题,而临床保存介质对移植前细胞活性的影响直接关乎移植后疗效,目前却缺乏对临床介质保存效果的系统性研究。目的:评价临床常用保存介质对脐带间充质干细胞活性的影响。方法:在4℃与室温(25℃)条件下,将脐带间充质干细胞在临床常用保存液(0.9%氯化钠注射液,5%葡萄糖注射液和1%人血白蛋白溶液)中保存2,4,6h,观察上述保存介质对脐带间充质干细胞活性、凋亡,死亡率、多向分化能力及DNA损伤的影响。结果与结论:无论在4℃还是室温条件下,细胞在临床常用保存介质中的活性均在短期内呈时间依赖性下降。此外,不同保存介质引起细胞死亡而非凋亡,且死亡率呈时间依赖性增加;经不同介质保存后,细胞出现DNA损伤,但其增殖与多向分化能力未受明显影响,提示细胞核DNA损伤为细胞活性下降的关键因素。  相似文献   
2.
3.
目的了解地龙祛痰组份的纯化效率,检测其对不同类型核酸的降解作用、溶菌酶活性以及EDTA对其溶菌活性的影响。方法酸、碱变性沉淀及丙酮沉淀法制备祛痰组份粗提物,Bradford法检测蛋白含量,Yasuda法检测比活力,紫外光吸收法、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳检测对不同类型核酸的降解作用,比浊法检测地龙祛痰组份对溶壁微球菌的降解作用,将所得数据用多因素方差分析,比较EDTA对酶比活力的影响。结果 1000g鲜地龙纯化出4.12g粗提物,比活力纯化倍数为69。对环状、线状双链和单链DNA均有降解作用。对RNA无降解作用。含和不含EDTA的反应体系中,溶菌酶样比活力分别为400U/mg和410U/mg;EDTA对溶菌酶样作用没有差异(P0.05)。结论地龙祛痰组份纯化后蛋白含量减少,脱氧核糖核酸酶样活性提高,对不同类型的DNA具有降解作用,不能降RNA,具有溶菌酶样活性。EDTA不影响其溶菌酶样活性。  相似文献   
4.
目的 研究抗HBsAS单链抗体A-15在大肠埃希菌中的高效表达,增加该抗体在培养基中的产量.方法 改变工程菌的诱导时机、诱导剂浓度和诱导时间,以观察这些因素对单链抗体表达的影响.另外,加入不同浓度的蔗糖、甘氨酸和Triton X-100,以考察三种化学物质对单链抗体在培养基中分泌量的影响.结果 工程菌培养4 h后,加终浓度0.5 mmol/L IPTG诱导表达8 h为抗HBsAS单链抗体A-15较佳的表达条件.终浓度0.3 mol/L蔗糖,2%甘氨酸和1%Triton X-100同时加入诱导时的培养基中,可使培养基中表达的单链抗体亲和活性分别增加16.78倍.经测定抗HBsAg单链抗体A-15在培养基中最终表达量为7.4 mg/L.结论 抗HBsAg单链抗体A-15的分泌表达条件得到优化,表达量明显提高,这为更有效地制备该抗体用于其结构和功能研究提供了一个切实可行的方法.  相似文献   
5.
背景: 间充质干细胞移植技术快速发展,需要异地移植病例不断增加,但是关于细胞保存运输条件的研究甚少.目的: 比较几种临床常用输注液及实验室配制的输注液对间充质干细胞生存和生长的影响.方法: 抽取健康志愿者髂骨骨髓,采用密度梯度离心和贴壁筛选相结合的方法,分离培养骨髓间充质干细胞.对骨髓间充质干细胞进行细胞形态、细胞表面标记和多向分化能力的鉴定.25℃条件下,用10%FBS-DMEM、细胞输注液和5种临床常用细胞输注液(9 g/L氯化钠注射液、50 g/L葡萄糖注射液、50 g/L葡萄糖氯化钠注射液、2%和5%的人血自蛋白溶液)保存第3代骨髓间充质干细胞,检测1,2,4和6 h细胞的存活率.然后4℃条件下,以细胞输注液保存骨髓间充质干细胞,检测2,4,8,12,24 h细胞的存活率和存活细胞的生长曲线.结果与结论: 第3代骨髓间充质干细胞呈均匀一致的长梭形,平行或旋涡状紧密排列.细胞表面标记CD44、CD105表达阳性,CD45表达阴性.成骨诱导3周后,长梭形骨髓间充质干细胞变成多角形,von Kossa染色可见典型的黑色钙化小结;成脂诱导2周后,细胞变成短梭形或椭圆形,油红O染色可见胞浆内密集的被染成红色的脂滴.在25℃条件下,细胞输注液中保存的骨髓间充质干细胞,其存活率远高于在上述5种临床常用输注液中所保存细胞;4℃条件下,细胞输注液和完全培养基中保存的骨髓间充质干细胞存活率和再生长能力基本相同.提示细胞完全培养基成分配制的输注液是维持间充质干细胞脱离培养环境后保持细胞活性,且延长细胞存活时间最适宜的溶液.  相似文献   
6.
7.
Kringle 5是血浆纤维蛋白溶酶原的第五个饼环区结构域,在体外具有抑制内皮细胞增殖和迁移、在体内具有抑制血管新生和肿瘤生长的生物活性,在实体瘤、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎等疾病的治疗中有广泛的应用前景.  相似文献   
8.
神经管畸形(neural tube defects,NTDs)是由遗传因素与环境因素共同作用而导致的复杂的多基因遗传病,大量的流行病学研究发现叶酸缺乏和NTDs密切相关,但其确切的机制尚未明确.叶酸代谢与DNA损伤及修复功能有密切的关系,叶酸缺乏时不仅引起DNA低甲基化;而且还可导致胸苷酸二钠(dTMP)合成受阻、尿嘧啶核苷过量掺入DNA,产生碱基错配、DNA断裂、甚至染色体畸变等损伤变异.本文就DNA修复途径与NTDs研究进展作一综述,以期揭示DNA修复系统在NTDs发生中的作用及意义,为阐明NTDs发病机制的提供新思路.  相似文献   
9.
 目的 分析以健康人AB血清与rhCD40L体外诱导健康人外周血树突状细胞(DC)的功能。方法 对健康人外周血单个核细胞进行体外培养,在以健康人AB血清为基础的培养体系中加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、 重组人白细胞介素(rhIL)-4、rhCD40L等细胞因子,诱导单个核细胞分化形成DC,采用倒置显微镜及瑞特-吉姆萨染色观察,流式细胞术行DC表型鉴定,四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法进行混合淋巴细胞反应(MLR),检测其抗原刺激能力,酶联免疫吸附(ELISA) 法检测DC 培养上清IL-12的分泌。结果 培养7 d后的细胞具有典型的DC 形态,并上调表达DC 特征性表面分子CD83及共刺激分子CD40、CD80、CD86,第0、1 、3、5、7天,5个时间点间CD83、CD40、CD80、CD86、CD14表达差异有统计学意义(F值分别为50.253、243.769、248.181、191.267、226.339,均P<0.05)。培养后的DC 可较强地刺激同种自体淋巴细胞增殖,GM-CSF加rhIL-4、rhCD40L组较GM-CSF加rhIL-4 组刺激反应能力强。培养的DC 自培养第5天始即有IL-12 分泌,未加CD40L组IL-12 p40分泌量为(42.92±1.54)pg/ml,加CD40L组为(136.18±5.27) pg/ml;培养第7天,IL-12 p40分泌明显增多,两组分别为(60.09±2.27) pg/ml及(322.30±30.60) pg/ml,差异有统计学意义(t=-44.941、-22.611,均P<0.05)。结论 健康人外周血单个核细胞可在以健康人AB血清与rhCD40L为主的培养体系中诱导成DC。  相似文献   
10.
目的 探讨肌醇多聚磷酸5- 磷酸酶(INPP5E)基因影响小鼠胚胎神经管闭合的分子机制。 方法 采用前期复制的神经管缺陷(NTD)小鼠模型,在体视显微镜下观察胚胎表型、苏木精- 伊红染色情况, 测量胚胎顶臀长、体重等指标;重亚硫酸盐测序法检测NTD 组及对照组胚胎发育第11.5 天小鼠胚胎神经组 织中INPP5E 基因启动子区DNA 甲基化情况;实时荧光定量聚合酶链反应和Western blotting 检测胚胎神经组 织中INPP5E 蛋白和mRNA 相对表达量;超高效液相色谱串联质谱法检测胚胎神经组织中叶酸(FA)、5- 甲 基四氢叶酸(5-MeTHF)、5- 甲酰四氢叶酸(5-FoTHF)及同型半胱氨酸(Hcy)水平。结果 NTD 组小 鼠胚胎神经组织INPP5E 基因启动子区甲基化水平、INPP5E 蛋白和mRNA 相对表达量在胚胎发育第11.5 天 时较对照组低(P <0.05)。NTD 组胚胎神经组织的FA 和Hcy 水平较对照组升高(P <0.05),而5-MeTHF 和5-FoTHF 水平较对照组低(P <0.05)。结论 INPP5E 基因在调节小鼠胚胎神经管闭合中起重要作用。FA 代谢紊乱引起的INPP5E 基因启动子区甲基化水平降低,可能通过影响其表达水平参与NTD 的发生。  相似文献   
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