Wnt/β-catenin信号通路对问充质干细胞衰老的影响及其作用机制

目的:研究不同年龄血清对Wnt/β-catenin信号通路激活水平的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞(MSCs)衰老、增殖、存活能力的作用及其机制.方法:提取年轻(8 ～12周)及老年(64—72周)SD大鼠血清,实验分为4组,分别为年轻血清(Young rat serum,YRS)组,YRS+ Wnt 3a组、老年血清(Old rat serum,ORS)组和ORS+ DKK1组.免疫细胞化学染色和Western blotting检测胞浆、胞核β-catenin的表达.SA-β-半乳糖苷酶染色检测各组细胞衰老,MTT法检测细胞增殖,AO/EB染色法检测MSCs存活和凋亡.为研究Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的作用机制,免疫细胞化学染色和Western blotting检测γ-H2A.X和p53蛋白表达,RT-PCR法检测p53、p21 mRNA表达.结果:ORS组β-catenin表达较YRS组明显增强,尤其是胞核,出现β -catenin聚集现象,而ORS+ DKK1组β-catenin表达减弱.与YRS组相比,YRS+ Wnt 3a组细胞SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著增多(P＜0.01),细胞增殖和存活能力减弱.而ORS+ DKK1组与ORS组相比,SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著减少(P＜0.01),细胞增殖和存活能力增强.免疫细胞化学染色、Western blotting和RT-PCR检测结果显示,ORS组内γ-H2A.X、p53、p21表达较YRS组明显增强,而在ORS内加入DKK1后,γ-H12A.X、p53、p21表达较ORS组明显减弱.结论:ORS培养可以激活MSCs内Wnt/β-catenin信号通路.Wnt/β-catenin信号通路对MSCs衰老发挥重要调控作用.DNA损伤反应和p53/p21途径是Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的重要介导因素.     

Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞衰老的影响及其作用机制

目的:研究不同年龄血清对Wnt/β-catenin信号通路激活水平的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞(MSCs)衰老、增殖、存活能力的作用及其机制。方法:提取年轻(8～12周)及老年(64～72周)SD大鼠血清,实验分为4组,分别为年轻血清(Young rat serum,YRS)组,YRS+Wnt 3a组、老年血清(Old rat serum,ORS)组和ORS+DKK1组。免疫细胞化学染色和Western blotting检测胞浆、胞核β-catenin的表达。SA-β-半乳糖苷酶染色检测各组细胞衰老,MTT法检测细胞增殖,AO/EB染色法检测MSCs存活和凋亡。为研究Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的作用机制,免疫细胞化学染色和Western blotting检测γ-H2A.X和p53蛋白表达,RT-PCR法检测p53、p21 mRNA表达。结果:ORS组β-catenin表达较YRS组明显增强,尤其是胞核,出现β-catenin聚集现象,而ORS+DKK1组β-catenin表达减弱。与YRS组相比,YRS+Wnt 3a组细胞SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞...     

氯化锂通过激活Wnt信号通路促进神经干细胞增殖

目的观察氯化锂（LiCl）作用于神经干细胞（NSCs）后对细胞周期等生物学性状的影响以及经LiCl处理过的神经干细胞在分化过程中Wnt信号通路的主要信号分子β-catenin、GSK-3β的表达改变,评估LiCl激活Wnt信号通路后对NSCs增殖和分化的影响。方法应用分离培养的NSCs体系,流式细胞仪检测不同浓度的LiCl（1、5、10、100mmol/L）处理48h后NSCs细胞周期等生物学性状改变,Western Blot检测LiCl处理后的NSCs中β-catenin、GSK-3β的表达以及动态变化。结果 LiCl处理后的NSCs体系细胞团块分散,呈悬浮状态生长,并能抑制血清诱导下的干细胞分化,分化细胞贴壁时间明显延长。流式细胞仪检测表现为S期、G2/M期细胞数百分比的增加和G0/G1期细胞数百分比的相对减少,其效应呈现一定的剂量依赖关系（P〈0.01）。Western Blot检测显示NSCs中的β-catenin分子在LiCl处理后表达明显增强,GSK-3β分子的表达明显下调,表现出正相关的量效关系（P〈0.01）。结论 LiCl通过激活Wnt信号通路能促进培养NSCs的增殖,抑制干细胞分化,其作用可能与胞内效应分子β-catenin的表达增多有关。     

经典Wnt/β-catenin信号通路介导子痫前期滋养细胞氧化应激损伤的机制研究

目的：研究经典Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路参与人滋养细胞氧化应激损伤的机制,探讨其在子痫前期（preeclampsia,PE）发病中的作用。方法：（1）采用免疫组化SP法和蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测胎盘组织中β-catenin信号分子的表达。（2）将HTR8/SVneo分为正常培养对照组、缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）处理组、氯化锂（LiCl）+H/R处理组、LiCl+正常培养组。利用WB法和间接免疫荧光法检测β-catenin在各组细胞中的表达。（3）利用流式细胞仪检测各组细胞凋亡指数及细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平。（4）利用Transwell小室模型和明胶酶谱法分析检测各组HTR8/SVneo的侵袭率及基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2、9的活性。结果：（1）与正常晚孕比较,子痫前期胎盘组织中β-catenin蛋白表达降低（P<0.05）。（2）与正常培养组相比较,H/R处理组的β-catenin蛋白水平显著下降,经LiCl预处理后H/R细胞中的β-catenin蛋白表达增加（P<0.01）。（3）与正常对照组相比,H/R处理可导致HTR8/SVneo凋亡率及ROS水平增加（P<0.01）;予以LiCl预处理可有效抑制H/R导致的细胞凋亡及ROS聚集（P<0.05,P<0.01）。（4）H/R组细胞的体外侵袭能力及MMP-2、9的活性均低于正常培养组;经LiCl预处理后,H/R组细胞的体外侵袭能力及清液中MMP-2、9的活性显著上升（P<0.01）。结论：LiCl通过特异性激活Wnt/β-catenin信号通路,对滋养细胞氧化应激损伤有保护性作用。     

黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜及软骨细胞共培养体系相关因子的调控作用

目的 观察黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系相关因子的调控作用,初步阐释黄芪甲苷治疗骨关节炎的分子作用机制.方法 通过β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,激活其Wnt/β-catenin信号通路.Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞与正常人软骨细胞置于Transwell小室中共培养.黄芪甲苷混悬液干预共培养体系,采用ELISA方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞、软骨细胞培养上清液基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达的影响.结果 黄芪甲苷干预后,ELISA法检测发现滑膜与软骨细胞上清液中MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达与正常对照相比明显升高(P<0.01).结论 黄芪甲苷可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达.黄芪甲苷可能通过抑制骨关节炎滑膜Wnt/β-catenin信号通路,改善滑膜炎症、调控滑膜-软骨共同体系微环境、达到抑制软骨降解,促进软骨细胞功能恢复而治疗骨关节炎.     

KLF4在伽马刀照射所致大鼠放射性脑损伤中的作用机制

目的研究伽马刀立体定向照射大鼠正常脑组织后星形胶质细胞中KLF4及γ-H2AX随照射剂量变化的表达,探讨KLF4与放射性脑损伤的关系。方法成年雄性Wistar大鼠30只,按随机数字表法分为6组,每组5只,分别以不同照射剂量(0、10、20、30、40、50 Gy)照射大鼠右侧尾壳核,照射30 min后处死,并分析不同照射剂量下KLF4、γ-H2AX阳性细胞占星形胶质细胞的百分比,分析KLF4和γ-H2AX的表达与照射剂量之间、KLF4与γ-H2AX之间的线性回归关系。结果 KLF4、γ-H2AX阳性细胞占星形胶质细胞的百分比随照射剂量增加而上升(P<0.05),且KLF4、γ-H2AX的表达与照射剂量、KLF4与γ-H2AX均有显著线性关系(P<0.05)。结论 KLF4与辐射所致大鼠脑星形胶质细胞DNA双链损伤关系密切,其可能是辐射致DNA损伤的关键分子,通过引起DNA双链损伤导致放射性脑损伤。     

miRNA-124-3p抑制剂通过Wnt/β-catenin信号通路调节缺氧缺糖心肌细胞凋亡的研究

目的 利用缺氧缺糖(OGD)诱导心肌细胞损伤的模型,探讨miRNA-124-3p抑制剂对Wnt/β-catenin信号通路及心肌细胞凋亡的影响.方法 利用低氧培养箱与低糖DMEM培养基建立OGD细胞模型,细胞分为正常对照组、OGD组、NC-siRNA组、miRNA-124-3p抑制剂组和Wnt1 siRNA组,利用Western blot检测miRNA-124-3p抑制剂与Wnt1 siRNA对模型细胞中Wnt1及β-catenin表达的影响;利用CCK-8实验检测miRNA-124-3p抑制剂与Wnt1 siRNA对心肌细胞活性的影响;利用Western blot检测miRNA-124-3p抑制剂与Wnt1 siRNA对凋亡相关的蛋白p53、Bcl-2、Bax及裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)的影响.利用ELISA检测各组细胞悬液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6与IL-1β的水平.结果 miRNA-124-3p抑制剂组和Wnt1 siRNA组心肌细胞Wnt1及β-catenin表达水平降低.CCK-8检测结果显示,与OGD组比较,miRNA-124-3p抑制剂组和Wnt1 siRNA组心肌细胞活性增高,而二者比较,差异无统计学意义(P>0.05).Western blot结果显示,与OGD组比较,miRNA-124-3p抑制剂组和Wnt1 siRNA组p53、Bcl-2表达水平升高,Bax及cleaved-caspase-3蛋白表达水平降低,而二者比较,差异无统计学意义(P>0.05).ELISA结果显示,miRNA-124-3p抑制剂组和Wnt1 siRNA组TNF-α、IL-6与IL-1β水平降低,而二者比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 miRNA-124-3p抑制剂通过调节Wnt1及β-catenin表达来调控Wnt/β-catenin信号通路,进而调控OGD条件下诱导的心肌细胞的凋亡,减轻细胞损伤,降低炎性因子的释放,发挥心肌保护作用.     

ITGB4BP对Wnt/β-catenin信号通路活性的下调作用

目的 探讨β4整合素结合蛋白ITGB4BP 对Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 将对照组空载体pCMV-3B质粒和实验组pCMV-ITGB4BP质粒分别转染至HEK293细胞中,用Western blot和激光共聚焦技术检测细胞中β-catenin含量的变化,用含TCF/LEF启动子的荧光素酶TOPFlash质粒和内参pRL-TK质粒共转染对照组和实验组的HEK293细胞,用荧光素酶活性分析法检测ITGB4BP转染后HEK293细胞TCF/LEF活性的变化.设不转染质粒组为正常组,对照组和实验组均分别设未加LiCl组和加LiCl组.结果 Western blot检测结果:与正常组或对照组比较,实验组细胞β-catenin表达显著减少(P<0.05).加LiCl之后,β-catenin的表达显著增强(P<0.05),与未加有LiCl的正常组或对照组比较,加LiCl的实验组细胞内β-catenin仍有较高的表达,但差异无显著性.激光共聚焦技术观察:实验组β-catenin(绿色荧光)表达较对照组降低.加LiCl之后,β-catenin(绿色荧光)表达增强,与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光强度.荧光素酶活性分析法检测:实验组的荧光素酶活性较对照组显著降低(P<0.05).LiCl作用之后,Wnt/β-catenin信号通路活性明显增强(P<0.05),与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光素酶活性(P<0.05).结论 ITGB4BP可以下调Wnt/β-catenin信号通路的活性.     

槲皮素减轻坐骨神经慢性缩窄性损伤大鼠的神经病理性疼痛及其相关机制

目的 探究槲皮素对坐骨神经慢性缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)模型大鼠神经病理性疼痛的影响及其机制.方法 构建CCI大鼠模型,用不同浓度槲皮素干预,通过行为学实验检测机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL),ELISA试剂盒检测大鼠脊髓中炎性因子的表达,Western blot和qRT-PCR分别检测iNOS、COX-2和Wnt3a、β-catenin的蛋白以及mRNA的表达.结果 与对照组相比,模型组大鼠MWT和TWL值明显下降(P＜0.05),脊髓TNF-α、IL-1β,疼痛相关分子iNOS、COX-2,WNT通路Wnt3a、β-catenin蛋白水平均显著上升(P＜0.05),而槲皮素使模型组大鼠MWT和TWL值显著提高,TNF-α和IL-1p,iNOS和COX-2,Wnt3a和β-catenin水平均显著下降(P＜0.05),并呈现一定的剂量依赖效应.而Wnt/β-catenin通路激活剂可阻断槲皮素对CCI大鼠的作用.结论 槲皮素可能通过抑制Wnt/β-catenin通路及其下游靶分子COX-2和iNOS的表达减轻CCI大鼠的神经病理性疼痛.     

下调ARPC2通过抑制Wnt/β-catenin通路激活水平降低卵巢癌OVCA429细胞恶性转移潜能

目的 探讨下调肌动蛋白相关蛋白复合体2(ARPC2)对卵巢癌OVCA429细胞恶性转移潜能的影响和机制。方法 qRT-PCR和Western blot检测卵巢癌Skov3、A2780、OVCA429细胞和正常卵巢IOSE386细胞中ARPC2表达变化。在卵巢癌OVCA429细胞中转染ARPC2 siRNA,MTT测定细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭,用Western blot方法检测细胞中ARPC2、β-catenin、c-myc、MMP-9、MMP-2蛋白表达变化。用Wnt/β-catenin激活剂LiCl处理转染ARPC2 siRNA后的卵巢癌OVCA429细胞,同样利用上述方法测定细胞增殖、迁移、侵袭变化。结果 卵巢癌Skov3、A2780、OVCA429细胞中ARPC2表达水平明显高于正常卵巢IOSE386细胞。卵巢癌OVCA429细胞中ARPC2表达水平最高。转染ARPC2 siRNA后的卵巢癌OVCA429细胞增殖能力下降,细胞迁移和侵袭能力也下降,细胞中ARPC2、β-catenin、c-myc、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平均降低。Wnt/β-catenin激活剂LiCl可以逆转ARPC2 siRNA对卵巢癌OVCA429细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 下调ARPC2通过抑制Wnt/β-catenin通路激活水平降低卵巢癌OVCA429细胞恶性转移潜能。     

沉默环状RNA PIP5K1A通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来降低口腔鳞癌细胞生长与转移

目的 研究环状RNA PIP5K1A(circPIP5 K1 A)对口腔鳞癌(OsCC)细胞生长和转移的影响及可能的作用机制.方法 用RT-qPCR法检测OSCC组织和细胞中circPIP5K1A的表达情况.将si-circPIP5 K1A转入OSCC细胞后,CCK-8法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞集落形成能力,An-nexin V-FITC/PI染色流式细胞术法检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移与侵袭,Western blot法检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达.Wnt/β-catenin信号通路激动剂LiCl处理已转染si-circPIP5 K1A的OSCC细胞后,分别检测细胞活力、集落形成能力、凋亡、迁移与侵袭.结果 circPIP5K1A在OSCC组织和细胞中上调表达(P＜0.05).沉默cir-cPIP5 K1A后,OSCC细胞的细胞活力、集落形成、迁移与侵袭的能力均降低(P＜0.05),细胞凋亡增加(P＜0.05),Wnt1和β3-catenin蛋白表达降低(P＜0.05).LiCl能抑制沉默cir-cPIP5 K1A对OSCC细胞的生长与转移的抑制作用(P＜0.05).结论 沉默circPIP5 K1 A能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来发挥抑制OSCC细胞的生长与转移的作用.     

淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路对卵巢癌细胞CAOV3增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖。方法 通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验选择适当的淫羊藿苷浓度并探讨其对卵巢癌细胞CAOV3生长、增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用荧光实时定量PCR(RT-PCR)法检测β-catenin及Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclinD1 mRNA的表达水平,利用Western blot法检测β-catenin、c-myc和cyclinD1的蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,淫羊藿苷能显著抑制CAOV3的生长增殖;倒置显微镜下发现淫羊藿苷能使CAOV3细胞形态发生明显变化;RT-PCR检测结果表明淫羊藿苷可降低β-catenin的mRNA的表达以及抑制Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclinD1 mRNA的表达;Western blot法检测结果表明淫羊藿苷可下调β-catenin、c-myc和cyclinD1的蛋白表达。结论 淫羊藿苷可以抑制人卵巢癌细胞CAOV3增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现的。     

氯化锂对高糖致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制

目的： 观察不同浓度氯化锂（LiCl）对高糖环境培养下乳鼠心肌细胞的影响,探讨经典Wnt信号途径对高糖致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用。方法： 40只1~3 d SD乳鼠,原代心肌细胞培养后,随机分为对照组、高糖损伤组、氯化锂5、10 mmol/L组。倒置显微镜下观察心肌细胞形态学改变,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫细胞化学方法检测心肌细胞磷酸化糖原合成酶激酶-3β（p-GSK-3β）、β-连环蛋白(β-catenin)的表达变化。结果： 与高糖损伤组比较,LiCl 5 、10 mmol?L-1组心肌细胞的搏动频率趋于正常,心肌细胞的凋亡减少（P<0.05）,p-GSK-3β和β-catenin的表达增多（P<0.05）。随着LiCl浓度的增加,p-GSK-3β和β-catenin的表达增强。结论： LiCl明显抑制高糖致乳鼠心肌细胞的损伤,该效应可能与经典Wnt信号途径的激活有关。     

下调lncRNA KCNQ1OT1抑制 H2O2诱导的心肌细胞凋亡和氧化损伤

摘要:目的 探讨下调长链非编码 RNA(lncRNA)KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对过氧化氢(H2O2)诱导的 心肌细胞凋亡和氧化损伤的影响。方法 心肌细胞 H9c2分成 Control组、H2O2组(H2O2 处理)、si-NC 组(转染siRNA control,H2O2 处 理)、si-KCNQ1OT1 组 (转 染 KCNQ1OT1siRNA,H2O2 处 理)、si-KCNQ1OT1+LiCl组 (转 染 KCNQ1OT1siRNA,Wnt信号激活剂 LiCl和 H2O2处理)。CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,硫代巴比 妥酸法检测丙二醛(MDA)水平、黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平、微量法检测过氧化氢酶(CAT)水平、比 色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,Westernblot法检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(CCaspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(C-Caspase-9)、β-连环蛋白(β-catenin)、原癌基因(c-Myc)蛋白表 达水平。结果 与 Control组比较,H2O2组心肌细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中 C-Caspase-3、C-Caspase-9、βcatenin、c-Myc蛋白表达水平升高,MDA 水平升高,SOD、CAT、GSH-Px水平降低。与si-NC 组比较,si-KCNQ1OT1组 心肌细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,细胞中 C-Caspase-3、C-Caspase-9、β-catenin、c-Myc蛋白表达水平降低,MDA 水 平降低,SOD、CAT、GSH-Px水平升高。与si-KCNQ1OT1组比较,si-KCNQ1OT1+LiCl组心肌细胞存活率降低,细胞 凋亡率升高,细胞中 C-Caspase-3、C-Caspase-9、β-catenin、c-Myc蛋白表达水平升高,MDA 水平升高,SOD、CAT、GSH-Px 水平降低。结论 下调 KCNQ1OT1可以抑制 H2O2诱导的心肌细胞凋亡和氧化损伤,其机制与抑制 Wnt信号通路有关。     

神经肽Y/Y1受体激活β⁃catenin信号通路介导心肌细胞损伤

目的：研究神经肽Y（neuropeptide Y,NPY）/Y1受体信号转导在心肌细胞损伤中的作用及机制。方法：C57BL/6J小鼠皮下注射异丙肾上腺素（isoprenaline,ISO）构建心肌损伤模型,腹腔注射Y1受体特异性拮抗剂BIBO3304干预。小鼠随机分为对照组（生理盐水）、ISO组［20 mg/（kg·d）ISO］、BIBO3304+ISO组［0.1 mg/（kg·d）BIBO3304+20 mg/（kg·d）ISO］、BIBO3304组 ［0.1 mg/（kg·d）BIBO3304］,每组10只,连续给药14 d。实时定量PCR和Western blot检测小鼠心肌组织中NPY表达。HE染色和Masson染色观察各组小鼠心肌纤维结构变化和纤维化程度;定量PCR检测小鼠心肌肥大基因心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide,ANP）、β-肌球蛋白重链（β-myosin heavy chain,β-MHC）mRNA表达。采用Y1受体特异性激活剂［Leu31,Pro34］-NPY刺激 H9C2 细胞,检测 ANP、β-MHC mRNA 表达;CCK-8 检测心肌细胞活力。Western blot 检测各组小鼠心肌组织和 H9C2 细胞中 active β-catenin、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（phospho-glycogen synthesis kinase 3β,p-GSK3β）、总糖原合成酶激酶-3β（total glyco- gen synthesis kinase 3β,t-GSK3β）蛋白表达。免疫荧光染色检测心肌细胞β-catenin 入核情况。利用β-catenin 特异性抑制剂 ICG001处理细胞,检测［Leu31,Pro34］-NPY诱导的心肌细胞肥大和细胞活力变化。结果：与对照组比较,ISO组小鼠心肌组织 NPY mRNA 和蛋白表达均显著增加（P < 0.05）,心肌纤维排列紊乱,心肌纤维化程度高,心肌肥大基因表达增加。与 ISO 组比较,BIBO3304+ISO组小鼠心肌损伤和纤维化得到有效缓解,心肌肥大基因表达下降（P < 0.01）。与对照组比较,［Leu31, Pro34］-NPY 增加 H9C2 细胞 ANP、β-MHC mRNA 表达,降低心肌细胞活力（P < 0.01）。与对照组比较,ISO 组小鼠心肌组织 active β-catenin、p-GSK3β表达明显上调,p-GSK3β/t-GSK3β增加;与 ISO 组比较,BIBO3304+ISO 组心肌组织 active β-catenin、 p-GSK3β表达降低（P < 0.05）。与对照组比较,［Leu31,Pro34］-NPY 显著增加心肌细胞 active β-catenin、p-GSK3β表达（P < 0.05）,促进细胞核β-catenin 积累。与［Leu31,Pro34］-NPY 组比较,BIBO3304 抑制细胞核β-catenin 表达,ICG001 显著缓解 ［Leu31,Pro34］-NPY诱导的心肌细胞肥大和细胞活力下降（P < 0.01）。结论：NPY通过Y1受体转导激活β-catenin信号通路介导心肌细胞损伤和心肌纤维化。     

MicroRNA-21 对肺高压血管 平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究microRNA-21（miRNA-21）在Wnt/β-catenin 信号通路中抑制肺高压（PH）血 管平滑肌细胞增殖的可能机制。方法 复制外源性miRNA-21 干扰的野百合碱大鼠肺高压原代肺动脉平滑 肌细胞（PASMCs）模型,分别用Western blot 和实时荧光定量PCR 检测外源性miRNA-21 对Wnt 通路 中β-catenin、Cyclin D1 和拮抗剂DDK1 表达的影响。结果 外源性抑制miRNA-21 表达时,PASMCs 中 β-catenin、Cyclin D1 表达水平增高,拮抗剂DDK1 表达降低,拮抗作用减弱;而外源性上调miRNA-21 表达时,PASMCs 中β-catenin、Cyclin D1 表达水平降低,拮抗剂DDK1 表达增高,拮抗作用增强。结论 miRNA-21 的早期干预可通过调控Wnt 通路的拮抗剂DKK1 作用与Wnt/β-catenin 信号通路参与PH 肺血 管重构。     

过氧化物酶体增殖激素型受体对AngⅡ诱导肥厚心肌细胞的影响

目的 探讨同时激活PPARα、PPARs激活剂对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肥大心肌细胞的影响.方法 体外原代培养新生大鼠心肌细胞,分别以不同浓度非诺贝特(PPARα激活剂)和或吡格列酮(PPARγ激活剂)预处理24 h后,加用AngⅡ刺激诱导肥大心肌细胞模型.采用软件分析细胞表面积,以MTT比色法测定心肌细胞活力,用RT-PCR法检测α-MHC和胚胎基因β-MHC mRNA的表达.结果 与对照组相比,非诺贝特、吡格列酮显著逆转了AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,抑制AngⅡ引起细胞活力改变,增加α-MHC mRNA表达,降低β-MHC mRNA的表达,α/β-MHC mRNA比值明显增加;相对两药处理组,上述指标与两药合用组无显著差异(P＞0.05).结论 PPARs信号通路激活能有效预防心肌细胞肥大,PPARαγ配体合用未见明显叠加效应.     

Wnt/β-catenin信号通路调控人神经干细胞衰老过程的研究

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路对人神经干细胞（neural stem cells, NSCs）衰老的调控作用。方法将人胚胎干细胞分化为NSCs,经MPTP（1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶）处理后,检测细胞的衰老表型和Wnt/β-catenin相关蛋白表达变化。分别应用AR-A014418、DKK1蛋白激活、抑制Wnt/β-catenin通路后,检测Wnt/β-catenin信号通路改变对细胞衰老表型的影响。检测各实验组和对照组中促炎因子CCL3、CXCL10、CXCL11、TNF-α的表达变化。结果经MPTP处理后,NSCs显示衰老表型,表现为SA-β-gal阳性细胞明显增多,胞内ROS水平明显升高、细胞增殖活性受到抑制（P<0.01）。同时,Wnt1、β-catenin蛋白表达降低,磷酸化GSK3β表达升高。AR-A014418激活了Wnt/β-catenin通路,缓解了细胞的衰老表型;DKK1蛋白抑制了Wnt/β-catenin通路,加重了细胞的衰老表型。Wnt/β-catenin通路能调控NSCs衰老过程中促炎因子的表达。结论Wnt/β-catenin信号通路能够调控MPTP诱导的NSCs衰老过程。     

Wnt/β-catenin信号通路在成人睾丸支持细胞增殖中的作用及其机制

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在成人睾丸支持细胞增殖中的作用及其作用机制。方法取成人睾丸组织采用两步酶法消化,分离纯化支持细胞,后行传代培养,并经波形蛋白免疫荧光染色鉴定其纯度。将支持细胞分为3组:正常对照组(Con组)、添加Gsk-3β特异性抑制剂SB216763组(SB组)和添加氯化锂组(LiCl组)。通过BrdU标记和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期;采用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR和Western blot-ting检测细胞中β-catenin和c-myc的表达状况;采用RNA干扰技术,下调支持细胞中c-myc基因表达。结果BrdU标记和流式细胞仪检测结果显示,SB和LiCl组支持细胞增殖明显高于Con组;加入SB216763和LiCl可明显促进细胞β-catenin和c-myc入核,c-myc mRNA和蛋白水平明显高于Con组;转染c-myc siRNA后,可明显降低SB216763引起的支持细胞增殖。结论激活Wnt/β-catenin信号通路可促进成人睾丸支持细胞的增殖,其作用机制可能是通过上调c-myc基因表达来实现的。     

氯化锂激活的Wnt/β-catenin信号通路对激素型骨质疏松的防护作用

目的 研究氯化锂(LiCl)激活的Wnt/β-catenin信号通路对糖皮质激素引发的小鼠骨丢失的防护作用.方法 将C57BL6/J小鼠随机分为3组:对照组、骨质疏松模型组和LiCl组.骨质疏松模型组及LiCl组小鼠皮下注射地塞米松(50 mg/kg),对照组小鼠皮下注射同等剂量生理盐水.LiCl组小鼠在注射地塞米松同时通过饮用水给予LiCl(200mg/kg).处理5周后处死小鼠做骨组织切片,用免疫组化染色检测活性β-catenin蛋白的表达,鉴定体内Wnt/β-catenin通路激活情况;用H-E染色鉴定骨组织形态.同时取小鼠股骨进行microCT扫描,测定骨形态计量学参数.用钙黄绿素荧光标记实验鉴定新骨形成能力,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定骨吸收情况.结果 LiCl组小鼠体内活性β-catenin蛋白水平高于骨质疏松模型组,其骨量、骨小梁数量、骨小梁间隙及骨密度均得到改善(P＜0.05),但与对照组相比差异仍有统计学意义(P＜0.05).钙黄绿素荧光标记实验证实LiCl组小鼠新骨形成能力比骨质疏松模型组有所提高,但仍低于对照组.TRAP染色证实各组小鼠骨吸收活性未发生明显改变.结论 口服LiCl能有效激活体内Wnt/β-catenin信号通路,促进新骨形成,对糖皮质激素引发的骨丢失有一定的防护作用.