Gli抑制剂诱导胃癌细胞凋亡作用的研究

目的 研究Gli抑制剂GANT61对人胃癌细胞AZ521和AGS凋亡的作用.方法 应用不同浓度(0、10、20μmol/L)的GANT61处理AZ521和AGS细胞24 h后,蛋白免疫印迹法(Western blot)观察GANT61作用于AZ521和AGS细胞后对Gli-1、Gli-2、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响.流式细胞术观察细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达.结果 Western blot结果显示GANT61可以剂量依赖性显著下调AZ521和AGS细胞Gli-1、Gli-2和Bcl-2蛋白表达和增加Caspase-3蛋白表达.流式细胞术检测显示10 μmol/L GANT61作用AZ521,AGS细胞后凋亡率为(19.37±0.81)％和(16.1±0.26)％,显著高于0 μmol/L GANT61凋亡率(4.23±0.35)％和(6.00±0.87)％(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GAN761的AZ521细胞中Bcl-2蛋白表达水平分别为355.33±10.12、312.67±7.37,与0μmol/L GANT61 423.33±11.37相比显著降低(P＜0.05);10μmol/L和20 μmol/L GAN761的AGS细胞中Bcl-2蛋白表达水平分别为306.67±4.16、273.33±8.02,与0 μmol/L GANT61388.33±11.06相比显著降低(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GANT61的AZ521细胞中Caspase-3蛋白表达水平分别为305±9.64、360.24±8.54,与0 μmol/L GANT61 261.12±11.53相比显著增高(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GANT61的AGS细胞中Caspase-3蛋白表达水平分别为255.00±6.56、310.67±8.50,与0μmol/L GANT61 198.33±2.50相比显著增高(P＜0.05).结论 GANT61通过特异性抑制Gli-1,Gli-2蛋白表达从而调节AZ521和AGS细胞中Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平,诱导细胞凋亡.     

C3G在卵巢癌组织中的表达及其在SKOV3细胞增殖中的作用

目的 探讨鸟苷酸交换因子C3G(Crk SH3-domain-binding guanine nucleotide-releasing factor)在卵巢癌组织中的表达及在卵巢癌SKOV3细胞增殖中的作用.方法 采用Western blot检测比较40例卵巢癌、8例卵巢良性肿瘤及4例正常卵巢组织中C3G的表达水平.应用特异性siRNA下调SKOV3细胞中C3G的表达,通过MTT法和平板克隆实验检测细胞增殖,建立裸鼠皮下种植瘤模型观察移植瘤生长情况.结果 卵巢癌组织中C3G的表达显著高于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织,其在卵巢癌、卵巢良性肿瘤分别是正常卵巢组织中的(1.832±0.200) (P＜0.05)、(0.893±0.147)倍.siRNA干扰可使SKOV3细胞中内源性C3G的表达下调79.2％;与野生型细胞组、阴性对照组及空载体对照组相比,C3G干扰组细胞增殖变慢(P＜0.05),克隆形成率下降(P＜ 0.05),移植瘤的平均体积和质量显著下降(P＜0.05).结论 鸟=苷酸交换因子C3G在大多数上皮性卵巢癌中过表达,并促进卵巢癌细胞增殖.     

Gli通过PI3K/AKT促进食管鳞癌KYSE-30上皮-间质转化研究

目的 探讨Gli调节食管鳞癌KYSE-30细胞上皮-间质转化(EMT)的机制.方法 通过应用实时荧光定量PCR技术检测GANT61处理过的食管鳞癌KYSE-30细胞中Gli1、Gli2、Vimentin和N-cadherin mRNA的表达;通过Western blot法检测 GANT61 处理的食管鳞癌 KYSE-30 细胞中 Gli1、Gli2、p-AKT、AKT、Vimentin和N-cadherin蛋白表达;再通过侵袭实验检测GANT61处理过的食管鳞癌细胞KYSE-30侵袭能力的变化;应用N-Shh刺激Hedgehog通路,最后同时应用GANT61和 N-Shh 刺激 Hedgehog 通路.结果 GANT61与对照组DMSO相比可以显著下调食管鳞癌KYSE-30细胞相应mRNA指标表达( P＜0. 001);同时Western blot检测显示GANT61 可以下调 KYSE-30 的相应蛋白表达( P ＜0. 001).侵袭实验显示经 GANT61 处理后显著抑制了KYSE-30细胞的侵袭能力(P＜0. 001).应用N-Shh可以显著上调相应mRNA及蛋白的表达,同时可以促进肿瘤细胞的侵袭能力(P＜0. 001). GANT61&N-Shh组相比 GANT61组得到了部分恢复.结论 Gli1、 Gli2 表达下调可能通过PI3K/AKT途径抑制细胞的EMT过程而抑制食管鳞癌细胞的侵袭转移. Gli有望成为抑制食管肿瘤转移的有效靶点.     

震颤同系物-5过表达对卵巢癌细胞A2780增殖和凋亡的影响

目的:探讨RNA结合蛋白震颤同系物-5(QKI-5)在卵巢癌细胞中的表达以及对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:通过免疫印迹实验(Western blot)检测正常卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞中QKI-5的表达差异，并选取QKI-5相对表达水平最低的卵巢癌细胞进行过表达慢病毒感染，构建稳定转染细胞系后通过细胞增殖和毒性分析(CCK8)和平板克隆实验检测细胞增殖和克隆能力的变化，通过流式细胞仪检测过表达QKI-5对卵巢癌细胞凋亡的影响。结果:Western blot实验结果显示，在卵巢癌细胞中QKI-5的表达水平相比正常卵巢上皮细胞显著降低，三株卵巢癌细胞中A2780细胞的QKI-5表达水平相对最低，通过慢病毒感染成功构建了稳定过表达QKI-5的A2780细胞系。CCK8和平板克隆实验结果显示，过表达QKI-5基因后A2780细胞增殖活力和克隆形成能力受到抑制(P<0.05)。流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示，QKI-5表达水平的增加能够显著促进A2780细胞的凋亡(P<0.05)。结论:RNA结合蛋白QKI-5在卵巢细胞中表达水平异常降低，QKI-5表达特异性扩增后能够抑制卵巢...     

阻滞Hedgehog信号通路及自噬协同抑制去势抵抗性前列腺癌细胞生长的实验研究

目的探讨阻滞Hedgehog信号通路及抑制自噬对去势抵抗性前列腺癌细胞生长的影响及可能的机制。方法设立对照组、GANT61（5、10、25、50μmol/L）、3-MA（0.2μmol/L）及两者联合组分别给药48～72h后采用MTT实验检测去势抵抗性前列腺癌PC-3细胞及22RV1细胞增殖能力; 22RV1细胞4组分别处理72h后流式细胞仪检测细胞凋亡以及细胞周期、Western blot检测细胞中Gl I1、p62以及Bax蛋白的表达水平。结果 （1）GANT61抑制前列腺癌PC-3细胞及22RV1细胞增殖呈时间和剂量依赖性,加入自噬抑制剂3-MA后细胞生长抑制增强;（2）GANT61使22RV1细胞凋亡增加,加入自噬抑制剂3-MA后细胞凋亡进一步增加;（3）GANT61对前列腺癌22RV1细胞周期明显阻滞于G1期,加入3-MA后使细胞周期于G1期进一步增加;（4）GANT61使GLI1蛋白及p62蛋白表达水平降低,使Bax蛋白表达水平增加,加入自噬抑制剂3-MA后Bax蛋白表达水平进一步增加,p62蛋白表达水平较单用GANT61组有所增加。结论抑制Hedgehog信号通路及自噬协同抑制去势抵抗性前列腺癌细胞生长。     

Gli抑制剂GANT61对肺癌细胞上皮-间质转化作用的研究

目的：研究GANT61对人肺癌细胞 H1703和 A549的上皮‐间质转化（EMT）的影响,并初步探讨其作用机制。方法以二甲基亚砜（DMSO）作为对照（DMSO组）,用GANT61处理H1703和A549细胞24 h后,采用实时荧光定量PCR法检测Gli‐1、Gli‐2、E‐cadherin和Vimentin基因变化;蛋白质印迹法（Western blotting）观察GANT61作用于 H1703和A549细胞后对E‐cadherin和Vimentin蛋白表达的影响,划痕愈合实验观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对肿瘤细胞侵袭能力的影响。结果与DMSO组比较,实时荧光定量PCR结果显示GANT61可下调H1703和A549细胞Gli‐1、Gli‐2及Vimentin mRNA的表达,升高E‐cadherin mRNA的表达（P＜0．01）;Western blotting显示,GANT61可以下调H1703和A549细胞Vimentin蛋白表达,升高E‐cadherin蛋白表达（P＜0．01）;划痕愈合实验显示,GANT61处理组 H1703和A549细胞的侵袭能力明显下降（P＜0．01）。结论肺癌的EMT与 Hedgehog信号转导通路中Gli‐1和Gli‐2的异常激活有关,GANT61通过下调Gli‐1和Gli‐2的表达影响肺癌细胞的EM T能力,Gli可能成为抑制肺癌细胞转移的新的分子靶点。     

卵巢上皮性肿瘤组织中caspase-3,bcl-2的表达及其与细胞凋亡和增殖的关系

目的探讨caspase-3,bcl-2与卵巢上皮性肿瘤发生、发展的关系.方法利用免疫组化(SP)法和TdT介导的dUTP的缺口末端标记(TUNEL)技术,检测72例卵巢上性肿瘤组织中caspase-3和bcl-2蛋白、PCNA的表达水平及细胞凋亡情况.结果 caspase-3在卵巢恶性肿瘤中的表达(44.2%),明显低于良性肿瘤(83.3%,P＜0.05);在低分化卵巢癌中的表达(76.7%),明显高于高分化卵巢癌(47.1%,P＜0.05).bcl-2蛋白在卵巢恶性肿瘤中的表达(76.6%),明显高于良性肿瘤(25.0%,P＜0.01);在低分化卵巢癌中的表达(42.1%),明显低于高分化卵巢癌(90.0%,P＜0.01).凋亡指数与增殖指数呈正相关(r=0.482,P＜0.01),与caspase-3的表达呈正相关(r=0.647,P＜0.01),与bcl-2的表达呈负相关(r=-0.531,P＜0.01).结论 caspase-3,bcl-2与卵巢上皮性肿瘤的细胞凋亡密切相关,参与细胞凋亡的调节机制,在卵巢上皮性肿瘤恶变的过程中发挥作用,并与恶性程度关系密切,有可能成为卵巢癌预后评估的参考.     

上皮性卵巢癌组织中COX-2表达及塞来昔布对卵巢癌细胞株生长抑制作用的研究

目的：探讨环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）在上皮性卵巢癌中的表达及其选择性抑制剂塞来昔布对卵巢癌细胞株生长的影响.方法：应用免疫组化的方法检测正常卵巢、卵巢良性肿瘤、上皮性卵巢癌组织及卵巢癌细胞株0VCAR3、SKOV3中COX-2的表达,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）快速比色法、吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色结合荧光显微镜等技术,研究塞来昔布对0VCAR3细胞增殖和凋亡的影响.结果：COX-2在上皮性卵巢癌组织中高表达,阳性率为71.1%,而在正常卵巢和良性卵巢肿瘤中未见表达.COX-2在上皮性卵巢癌组织中的表达与临床分期、组织学类型、组织学分级无关（P＞0.05）,而与淋巴结转移有关（P＜0.05）.塞来昔布可抑制OVCAR3、SKOV3细胞生长,呈浓度和时间依赖性,S-N-K分析及最小显著差（LSD）检验组间两两比较,P均＜0.05.荧光显微镜下见典型的凋亡形态学改变,凋亡比例呈剂量和时间依赖,S-N-K分析组间两两比较,P均＜0.05.结论：上皮性卵巢癌组织及细胞株0VCAR3、SKOV3中存在COX-2表达,塞来昔布可抑制卵巢癌细胞增殖,并诱导细胞凋亡,塞来昔布可能成为卵巢癌化疗的有效药物.     

脂质体莪术醇联合顺铂抗人卵巢癌细胞作用和机制研究

目的 研究脂质体莪术醇(LC)联合顺铂抗人卵巢癌细胞的作用和机制.方法 实验以卵巢癌细胞株SKOV3和HO8910为研究对象,以10 μg/ml LC为基准,联合不同浓度的顺铂(0、2、4、8、16、32、64 μg/ml)进行分组,MTT、Transwell和流式法分别检测各组细胞增殖、侵袭、迁移能力和凋亡率的变化,Western blot检测各组AKT、p-AKT和cleaved-Caspase8、9、3蛋白表达的变化.结果 MTF结果显示,与单用顺铂或者LC组比较,联合用药组的肿瘤细胞增殖率降低(P＜0.05),联合用药中顺铂对SKOV3的IC50为(12.67±2.03)μg/ml[单用顺铂的IC50:(38.28±5.98)μg/ml];联合用药中顺铂对HO8910的IC50为(10.55±1.55)μg/ml[单用顺铂的IC50:(26.41 ±2.30) μg/ml].联合组(8μg/ml的顺铂+ 10 μg/ml的LC)的卵巢癌细胞侵袭和迁移率均降低(P＜0.05),凋亡率最高(P＜0.05).Western blot结果提示联合用药组卵巢癌细胞的p-AKT蛋白的表达水平降低(P＜0.05),cleaved-Caspase8、9、3蛋白水平上升(P＜0.05).结论 低剂量LC可以增强顺铂抑制人卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进肿瘤细胞凋亡,联合用药可能通过PI3K/AKT通路促进卵巢癌细胞凋亡.     

LncRNA-ATB对上皮性卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究被转化生长因子β活化长链非编码RNA(LncRNA-ATB)对人上皮性卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法通过荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人正常卵巢组织细胞系及上皮性卵巢癌系A2780和OVCAR3中LncRNA-ATB表达。将OVCAR3细胞系分为对照组、LncRNA-ATB NC组和转染LncRNA-ATB inhibitor组,采用MTT试剂盒检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移及侵袭能力,Western blot检测下调LncRNAATB表达对TGF-β表达的影响,qRT-PCR法检测TGF-β处理对LncRNA-ATB表达的影响。结果与正常卵巢细胞组相比,上皮性卵巢癌A2780组、OVCAR3组LncRNA-ATB相对表达量显著升高(P0.05);与A2780组相比,OVCAR3组LncRNA-ATB相对表达量升高(P0.05);转染后与空白组、LncRNA-ATB NC组相比,LncRNA-ATB inhibitor组LncRNA-ATB表达、细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P0.05);下调LncRNA-ATB表达对TGF-β的表达无影响(P0.05);TGF-β处理后LncRNA-ATB表达显著降低(P0.05)。结论 LncRNA-ATB在上皮性卵巢癌细胞中高表达,下调LncRNA-ATB后抑制上皮性卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

Superior virological efficacy of ritonavir-boosted protease inhibitor regimens compared to single protease inhibitor therapy

Low dose-ritonavir boosted protease inhibitors are increasingly being used for the first-line antiretroviral treatment, though their virological efficacy has just poorly been compared to alternative antiretroviral therapies. Here, we retrospectively investigated the virological responses of 316 protease inhibitor-naive HIV patients receiving highly active antiretroviral treatment based on a single (n = 256) or a ritonavir-boosted protease inhibitor (n = 60), both in the background of two nucleoside analogues. - By intent-to-treat analysis, a complete initial virological response was achieved in 71.8% of all patients in the single protease inhibitor group (indinavir: 76%, ritonavir: 67.5%, nelfinavir: 70.6%) and in 88.3% (p = 0.008) of patients treated with a boosted protease inhibitor (saquinavir/r: 71.4%, indinavir/r: 92.1%, lopinavir/r: 86.6%). The multivariate risk analysis identified boosted PI treatment as an independent predictor of a complete virological response (OR = 2.8, p=0.02). Viral rebound after an initial complete virological response was observed in 28% and 17% (p = 0.06) of patients receiving a single or a dual protease inhibitor, respectively. The rate of durable viral suppression over 12 months was 44.5% and 56.7% (p = 0.09) in the respective study cohorts. Ritonavir-boosted protease inhibitors therefore seem to induce a superior virological response rate and a higher degree of sustained virological suppression.     

人表皮角质形成细胞中PAI-3/PCI的表达及作用

目的探讨人表皮角质形成细胞(KERATINOCYTE,KC)中,PAI-3/PCI的表达及作用。方法利用免疫细胞化学、RT-PCR方法,检测高CA2 浓度作用下,培养的人分化表皮KC及KC提取物角质壳中PAI-3的表达变化。结果高CA2 浓度下培养24H后,分化标记物K10弱阳性表达,PAI-3呈阳性表达;培养48H后,K10强阳性表达,而PAI-3的阳性表达明显增加,72H后,表达开始降低,在低CA2 浓度下阳性染色主要位于细胞核膜周围而高CA2 浓度下主要位于细胞质,同时,PAI-3存在终末分化KCS角质壳中。结论人表皮KC分化过程中,PAI-3的表达随着分化的增加而增加,PAI-3存在终末分化KCS角质壳蛋白中,表明PAI-3参与KC分化的作用。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA的合成研究

目的:改进组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA的合成工艺。方法:以辛二酸为起始原料,经缩合、活化、氨解合成SAHA。结果:经3步反应得到目标化合物。结论:改进后的合成工艺简便、条件温和、原料易得。     

端粒酶抑制剂研究进展

端粒是真核细胞染色体末端的DNA 蛋白质结构 ,人类端粒含有了TAGGG重复序列[1] ,在体细胞中该重复序列随着细胞的生长分化逐渐缩短。端粒酶是一种能延长端粒末端的核糖核酸蛋白酶 ,近年来的研究表明 ,端粒酶的活化与癌症及一些增生病的发生与发展密切相关 ,肿瘤细胞及一些增殖活跃的细胞由于端粒酶的激活维持了端粒长度而延长细胞的存活时间获得永生。自 193 0年Muller和McClintock发现并提出端粒以来 ,端粒和端粒酶系统的研究亦越来越深入 ,端粒 端粒酶假说被越来越多的证据所证明 ,端粒酶活性成为影响永生化细胞和肿瘤细胞形成的重…     

脉冲Nd：YAG激光对培养肥厚性瘢痕成纤维细胞胶原合成的选择性抑制作用研究

目的：探讨脉冲Nd:YAG激光对培养肥厚性瘢痕成纤维细胞胶原合成的选择性抑制作用。方法：以不同能量密度（500J/cm^2、1000J/cm^2、1500J／cm^2和2000J/cm^2)脉冲Nd:YAG激光（波长1064nm,脉宽150μs）照射培养肥厚性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞,照射后24h分别用^3H-脯氨酸掺入法和斑点杂交法检测成纤维细胞胶原合成和I型前胶原基因表达水平。结果：肥厚性瘢痕与正常皮肤成纤维细胞胶原合成、I型前胶原mRNA水平在500J／cm^2照射后无变化,1500J／cm^2、2000J／cm^2照射后显著降低（P＜0．001）;1000J/cm^2照射后,肥厚性瘢痕成纤维细胞胶原合成与I型前胶原基因表达水平显著下降（P＜0．001）,而正常皮肤 成纤维细胞胶原合成 和I型前胶原基因表达水平却无变化（P＞0．05）。结论：一定能量密度（1000J／cm^2）脉冲Nd:YAG激光对体外培养肥厚性瘢痕成纤维细胞胶原合成具有选择性抑制作用。     

Dobesilate is an angiogenesis inhibitor

Aberrant angiogenesis is essential for the progression of solid tumors and hematological malignancies. Antiangiogenic therapy is one of the most promising approaches to treat such diseases. Dobesilate is an oral agent for treatment of vascular complications of diabetic retinopathy. We have examined the possibility that this compound could interfere with the process of angiogenesis in a mouse gelatine sponge assay using acidic fibroblast growth factor (aFGF) as an inducer of neovascularization. According to the results reported here, dobesilate remarkably reduced vessel ingrowth in aFGF-containing subcutaneous sponges in mice. These findings suggest that dobesilate could be an effective agent in the treatment of angiogenesis-dependent diseases involving FGFs.     

醛糖还原酶抑制剂筛选模型的建立

目的:建立醛糖还原酶抑制剂筛选模型,提供筛选醛糖还原酶抑制剂的方法。方法:从大鼠晶状体中提取醛糖还原酶,设定10 mmol/L DL-甘油醛为底物,0.15 mmol/L NADPH为辅酶等条件建立初始酶促反应体系,维持其它条件不变改变底物浓度、辅酶浓度、反应温度和反应时间,选择酶活性峰值点建立模型,通过比较槲皮素与芦丁对醛糖还原酶的抑制作用检验此模型。结果:醛糖还原酶酶促反应体系组成:总体积1 ml,各反应液的终浓度分别为:DL-甘油醛10 mmol/L,NADPH0.15 mmol/L,缓冲液PBS的pH=6.2,120 mmol/L,醛糖还原酶提取物100μl,反应温度37℃,反应时间3 min。IR50槲皮素相似文献   

HIV病毒抑制剂中间体Olivetol的简易合成

目的用简易方法合成Olivetol。方法以3,5-二甲氧基溴苯为原料,经金属化、耦联、脱甲基化反应制得Olivetol。结果成功地合成了Olivetol,总收率为63.1%;目标化合物的结构经核磁共振氢谱及元素分析确证。结论本法合成步骤短,反应条件温和,收率较高。     

特异性COX-2抑制剂--塞来昔布

特异性COX－2抑制剂－塞来昔布不仅保持了很好的抗炎镇痛作用,而且具有良好的胃肠道耐受性,与使用传统非甾体类抗炎药（NSAID)比较所 导致的消化道不良反应的发生率低。     

新的凋亡抑制因子livin

0 引言凋亡蛋白抑制因子(inhibitor of apoptosis protein, IAP)是一类重要的抗细胞凋亡因子,该家族结构的共同特点是N端含有一个或多个(目前发现最多为3个)串联的杆状病毒IAP重复序列(baculovirus IAP repeat, BIR),C端含或不含有一个环指(ring finger)结构.目前人类IAP家族已发现有8个成员,即NAIP,XIAP(ILP-1/MIHA),cIAP-1(HIAP-2/MIHB),cIAP-2(HIAP-1/MIHC),survivin(TIAP),apollon(Bruce),ILP-2(Ts-IAP)和livin(ML-IAP/KIAP)[1].Livin是新近发现的一个IAP家族成员,我们就其分子生物学特性、抗细胞凋亡作用、信号传导途径及调节机制、在正常组织中的表达分布以及与肿瘤的关系等研究现状作一简要介绍.