狭基线纹香茶菜水提部位对免疫肝损伤小鼠NF-κB蛋白表达水平及核转位的影响

目的:研究狭基线纹香茶菜水提部位对免疫肝损伤小鼠核因子κB(NF-κB)蛋白表达水平及核转位的影响。方法:小鼠尾静脉注射刀豆蛋白A(ConA)25mg·kg-1复制肝损伤模型,免疫组化法检测NF-κB在肝组织的表达,以及NF-κB从细胞浆向细胞核转位的情况。结果:复制模型4、8h后小鼠NF-κB蛋白表达显著增加(P<0.01),吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)和狭基线纹香茶菜水提部位9.2g·kg-1在4、8h均可显著降低模型小鼠NF-κB的蛋白表达量(P<0.01)。ConA能显著促进NF-κB自细胞浆向细胞核转位(P<0.01)。PDTC和狭基线纹香茶菜提取物9.2g·kg-1能显著减少NF-κB在细胞核表达,使其在细胞浆表达显著增多(P<0.01)。结论:狭基线纹香茶菜可抑制免疫肝损伤小鼠NF-κB蛋白的表达,并抑制NF-κB的核转位。狭基线纹香茶菜对抗免疫肝损伤的作用机制可能与其抑制核NF-κB的激活有关。     

脂质体转染TRPM7 siRNA对Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞分泌炎症因子的影响

目的利用小干扰RNA(siRNA)抑制TRPM7基因的表达,研究TRPM7对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞分泌炎症因子的影响。方法通过Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞构建阿尔采末病体外模型,MTT法测定Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞最佳作用浓度与时间点,将人工合成抑制TRPM7基因的siR-NA片段,通过脂质体LipofectamineTM2000转染到SH-SY5Y细胞内;RT-PCR检测TRPM7、NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA表达,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒的测定细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)的含量;ELISA测定细胞上清中TNF-α、IL-6的含量。结果转染siRNA后SH-SY5Y细胞的TRPM7、NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA表达较模型组明显下降,细胞上清中TNF-α、IL-6、LDH的含量表达较模型组明显下降。结论应用siR-NA干扰靶向抑制TRPM7基因,可以下调TNF-α、IL-6等炎症因子的释放,这一过程可能是通过抑制NF-κB信号转导通路的激活,从而减少炎症因子的释放,进而减轻Aβ对SH-SY5Y细胞的毒性作用。     

核因子-κB p65与心肌素在子宫肌瘤中的表达及作用机制

目的探讨核因子(NF)-κB p65亚型和心肌素在子宫肌瘤发生中的作用机制。方法蛋白印迹法检测29例子宫肌瘤和相应肌层组织以及15例原代子宫肌瘤细胞和相应肌层细胞中NF-κB p65、心肌素的表达;RNA干扰技术抑制子宫肌瘤细胞中NF-κB p65基因表达,光镜观察细胞生长状况,蛋白印迹法检测干扰后子宫肌瘤细胞中NF-κB p65和心肌素的表达。结果与正常肌层相比,子宫肌瘤组织和细胞中的NF-κB p65相对表达量增高(P<0.05),而心肌素的相对表达量降低(P<0.05)。RNA干扰后,与未转染的子宫肌瘤细胞相比,NF-κB p65的相对表达量降低(P<0.05),而心肌素的表达量相对增高(P<0.05)。结论 NF-κB p65与心肌素可能相互作用共同参与了子宫肌瘤的形成。     

NF-κB/IκB在二苯乙烯苷抑制过氧化氢诱导内皮细胞凋亡中的表达变化

目的探讨二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制因子(IκB)基因表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为对照组、H2O2组、TSG组,采用Ho-echst 33258染色观察细胞凋亡形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NF-κB与IκB mR-NA表达,Western blot检测NF-κB p65、IκB蛋白表达。结果与对照组比较,H2O2组凋亡细胞数增多,细胞凋亡率增加,细胞增殖降低;NF-κB mRNA和蛋白表达增加,IκB mRNA和蛋白表达降低,差异均有显著性(P<0.01)。经TSG预处理后,细胞的增殖率较H2O2组增加,细胞凋亡率减少;NF-κBmRNA和蛋白表达减少,IκB mRNA和蛋白表达增加(P<0.01)。结论二苯乙烯苷能抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调节NF-κB/IκB表达有关。     

三甲氧基二苯乙烯对小鼠巨噬细胞产肿瘤坏死因子-α及细胞核因子-κB活性的作用研究

目的研究三甲氧基二苯乙烯（BTM）对小鼠巨噬细胞经脂多糖（LPS）诱导后产生肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及细胞核因子-κB（NF-κB）活化的调控作用。方法培养RAW246．7小鼠巨噬细胞,加入不同浓度的BTM或白藜芦醇,再加入LPS活化细胞,收集细胞上清液用L929细胞结晶紫染色法检测TNF-α的活性,制作细胞爬片用免疫细胞化学法检测巨噬细胞中NF-κB的表达。结果BTM和白藜芦醇本身对L929细胞无细胞毒性;经不同浓度BTM和白藜芦醇处理后巨噬细胞产生TNF-α的水平及表达NF-κB的阳性率呈剂量依赖性减少,BTM抑制巨噬细胞产生TNF-α及表达NF-κB的能力大于白藜芦醇,巨噬细胞产生TNF-α的活性及NF-κB的阳性细胞率均与药物浓度呈负相关,TNF-α的活性和NF-κB的阳性细胞率呈正相关。结论BTM和白藜芦醇在浓度为5～80μmol／L范围内,呈浓度依赖性地通过抑制NF-κB的活化来抑制TNF-α的产生,且BTM抑制巨噬细胞产生TNF-α和NF-κB活化的能力犬于白藜芦醇。     

白芍总苷对免疫性肝纤维化大鼠肝组织NF-κB和TGF-β1蛋白表达的影响

目的研究免疫性肝纤维化大鼠肝组织中核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和转化生长因子β1(trans-forming growth factor beta1,TGF-β1)的变化以及白芍总苷(TGP)对两者蛋白表达的影响。方法采用猪血清诱导建立大鼠肝纤维化模型,肝组织HE染色和V-G染色观察肝组织损伤及胶原表达变化;免疫组化S-P法观察NF-κB p65和TGF-β1蛋白表达;显微摄像及图像分析检测胶原、NF-κBp65和TGF-β1蛋白的表达量。结果与正常组比较,模型组大鼠肝组织明显破坏,胶原合成增加,NF-κB p65和TGF-β1表达增强(P<0.01);与模型组比较,TGP治疗组肝组织破坏减轻,纤维化程度也明显改善,胶原面积、NF-κB p65和TGF-β1表达均明显减少(P<0.01),三者呈相关性。结论NF-κB介导TGF-β1产生或活化在免疫性肝纤维化过程中可能发挥着重要作用,而TGP抑制纤维化大鼠肝组织NF-κB和TGF-β1的表达可能是TGP的抗肝纤维化主要作用机制之一。     

硼替佐米对人胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB表达的影响及与其侵袭力关系

目的硼替佐米对人胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB表达的影响及与其侵袭力关系。方法 Brdu ELISA法测细胞增殖活性;Boyden小室培养测细胞的迁移率;Western blot测细胞uPA、NF-κB的蛋白水平;细胞免疫化学测NF-κB细胞表达及细胞定位。结果 (1)与对照组(无血清培养基组)相比,10%FCS组细胞增殖活性与迁移率明显增高(P<0.05);与10%FCS组相比,硼替佐米呈浓度依赖性抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖及迁移,硼替佐米浓度为(4μg.L-1),人胃癌SGC-7901细胞增殖活性与迁移率均明显降低(P<0.05);与PDTC组(10μmol.L-1)相比,两者无明显差别;(2)与10%FCS组相比,硼替佐米呈浓度依赖性抑制胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB蛋白表达,硼替佐米浓度为(4μg.L-1)时uPA、NF-κB蛋白表达均明显降低(P<0.05);与NF-κB特异性抑制剂PDTC组相比,两组uPA、NF-κB表达均无明显差别;硼替佐米浓度为(4μg.L-1)能明显降低NF-κB核蛋白含量,与PDTC组相比,两者无显著差异(P>0.05);(4)细胞免疫化学结果示:硼替佐米(4μg.L-1)抑制10%FCS诱导人胃癌SGC-7901细胞NF-κB核移位。结论①硼替佐米抑制血清诱导胃癌SGC-7901细胞增殖迁移及uPA、NF-κB蛋白表达,②硼替佐米降低胃癌SGC-7901细胞侵袭力可能与其抑制NF-κB活性,降低UPA水平有关。     

热休克蛋白70激动剂SW02对脂多糖诱导的巨噬细胞iNOS表达的调控及机制

目的观察热休克蛋白70(Hsp70)激动剂SW02对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及一氧化氮(NO)生成的作用,并探讨其作用机制。方法采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症模型,将细胞随机分为DMSO组、DMSO+LPS(1 mg·L~(-1))组、SW02组和SW02+LPS(1 mg·L(-1))组。Western blot法测定蛋白表达;Griess试剂法测定NO含量;实时定量PCR法测定iNOS mRNA表达;染色质免疫共沉淀法(ChIP)检测核因子κB(NF-κB)与iNOS启动子结合能力变化。结果 SW02明显抑制由LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS蛋白、mRNA表达和NO释放(SW02+LPS组iNOS表达量和NO生成量明显低于DMSO+LPS组,P<0.01或P<0.05);SW02不影响由LPS诱导的RAW264.7细胞κB-α抑制子(IκB-α)降解(SW02+LPS组IκB-α表达量与DMSO+LPS组比差异无显著性,P>0.05)和NF-κB入核(SW02+LPS组细胞质、细胞核NF-κB表达量与DMSO+LPS组比差异无显著性,P>0.05);SW02明显抑制由LPS诱导的NF-κB与iNOS启动子结合(SW02+LPS组NF-κB与iNOS启动子结合量明显低于DMSO+LPS组,P<0.05)。结论 SW02抑制巨噬细胞iNOS表达和NO生成,其机制可能与抑制NF-κB与iNOS启动子结合有关。     

姜黄素通过阻断NF-κB减少IL-1β诱导的内皮脂酶表达

目的观察姜黄素对培养的人血管内皮细胞内皮脂酶表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法不同浓度的姜黄素处理HUVEC-12细胞。RT-PCR检测内皮酯酶(endo-thelial lipase,EL)mRNA的表达;Western blot检测核因子-κB抑制因子-α(inhibitor of nuclear factor-κB-α,IκB-α)蛋白的表达;间接免疫荧光检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)蛋白的活化。结果IL-1β处理HUVEC-12细胞可以明显上调EL mRNA的表达,同时降低胞质蛋白IκB-α的表达水平,激活核转录因子NF-κB,增加胞核蛋白NF-κB的水平。姜黄素预处理HUVEC-12细胞可以抑制IL-1β对EL的上调作用,同时逆转IL-1β诱导的IκB-α蛋白降解和NF-κB活化。结论姜黄素可以通过阻断NF-κB活化减少IL-1β诱导的人血管内皮细胞EL的表达。     

NF-kB的研究进展

核因子 κB(NF- κB)是能调节多种炎症和免疫基因表达的一种重要的转录调节因子 ,它在胞浆内与 NF- κB抑制蛋白 (IκB)结合呈非活性状态 ,一旦被病毒、氧化剂、炎症细胞因子等刺激剂激活后便与 IκB解离而转入核内与特异的启动子结合 ,从而调控基因的表达。 NF-κB过度激活与许多病理现象有关 ,例如类风湿性关节炎、哮喘、艾滋病、动脉粥样硬化、神经退行性疾病等 ,而 NF-κB被抑制则与癌症、免疫细胞发育不全、细胞生长延迟等有关。因此 ,针对 NF-κB活性的激活与抑制 ,从不同环节去寻找药物用于治疗和预防与 NF- κB有关的疾病 ,是当前药物研究的一个新靶点     

原白头翁素衍生物诱导人乳腺癌细胞的凋亡机制

目的:探讨原白头翁素衍生物诱导MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡的作用机制。方法:采用体外培养方法培养MCF-7人乳腺癌细胞;应用免疫组织化学技术检测实验组和对照组中死亡受体蛋白(Fas),天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、Caspase-8,细胞核转录因子(NF)-κB的表达。结果:对照组中Fas、Caspase-3和Caspase-8蛋白低表达于细胞质或细胞核,呈弱阳性;实验组细胞这些蛋白表达增高,呈强阳性;2组3种蛋白阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。对照组细胞中NF-κB高表达于细胞浆和细胞核,而实验组NF-κB表达较对照组下降,呈弱表达于细胞质。结论:原白头翁素衍生物通过外源性途径即死亡受体通路完成凋亡的启动和执行,抑制NF-κB信号转导途径可能是促进MCF-7细胞凋亡的原因。     

蚤休薯蓣皂苷对内皮细胞的保护作用涉及TLR4/NF-κB途径

目的观察蚤休薯蓣皂苷(Rhizome Dioscin,RD)对氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HU-VEC)损伤对细胞生长、炎症反应Toll样受体4(TLR4)和细胞核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)表达的影响,探讨RD抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法体外培养HUVEC,RD 3个浓度预处理,加入ox-LDL,运用流式细胞术PI染色检测细胞周期,激光共聚焦显微镜JC-1染色检测线粒体电位(ΔΨm),Western blot检测TLR4和NF-κB蛋白的表达。结果与正常对照组相比,经ox-LDL损伤后HU-VEC细胞周期阻滞在G0/G1期,表现为G0/G1期细胞比例明显升高(P<0.01),S期细胞比例明显下降(P<0.01);细胞ΔΨm明显下降;TLR4和NF-κB的表达与正常组比较均升高。RD预处理能抑制ox-LDL诱导的细胞生长停滞,使细胞周期S期细胞比例增加(P<0.01),ΔΨm上升,TLR4和NF-κB的表达与损伤组相比均下降。结论抑制TLR4/NF-κB信号转导途径可能是RD抗内皮细胞氧化损伤、阻止经线粒体途径的细胞生长停滞的可能机制之一。     

绿脓菌素通过PKC-NF-κB信号传导通路诱导人NCI-H292细胞表达IL-8

目的探讨绿脓菌素(PCN)对人气道上皮细胞株(NCI-H292细胞)表达IL-8的诱导作用及通过蛋白激酶C(PKC)和核因子κB(NF-κB)的调控机制。方法采用ELISA法对PCN诱导NCI-H292细胞分泌IL-8进行分析,应用Western blot检测NF-κΒ的蛋白表达,观察PKC和NF-κB阻断剂对IL-8表达的影响。结果PCN可促进NCI-H292细胞IL-8的分泌,而且具有明显的量效关系。PKC阻断剂钙感光蛋白(Cal C)及NF-κB阻断剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)均能抑制IL-8的表达(P<0.01)。PCN能直接诱导并迅速活化NF-κB,60~90 min表达明显。结论PCN可能通过PKC信号通路促进NF-κB的活化,从而启动IL-8的高效表达。     

活化蛋白C通过NF-κB抑制TNF-α介导的炎症反应

目的观察活化蛋白C(APC)是否能够通过核因子-κB(NF-κB)途径抑制TNF-α介导的炎症反应。方法分离培养正常组、TNF-ɑ组、TNF-ɑ+rhAPC组的人脐静脉内皮细胞细胞(HUVECs)。用ELISA法,检测细胞上清液中的细胞内粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)及选择素浓度。用逆转录聚合酶链反应、Western bloting技术检测HUVECs NF-κBmRNA、NF-κB蛋白的表达。结果细胞上清液中ICAM-1、VCAM-1及E选择素浓度,TNF-ɑ组较正常组显著升高(均P<0.05);而TNF-ɑ+rhAPC组较TNF-ɑ组显著降低(均P<0.05)。HUVECs NF-κB mRNA、蛋白表达水平,TNF-ɑ组较正常组均显著升高(均P<0.05);而TNF-ɑ+rhAPC组较TNF-ɑ组均显著降低(均P<0.05)。结论 APC通过抑制黏附分子的产生来调节TNF-α介导的炎症反应,其可能是通过NF-κB途径来实现。     

EGb761对NMB诱导的小鼠妊娠子宫平滑肌细胞中NF-κB活性和IL-6表达的影响

目的探讨银杏叶提取物EGb761对神经调节素B(Neuromedin B,NMB)诱导的分娩期小鼠子宫平滑肌细胞中NF-κB活性和IL-6表达的影响。方法应用原代培养的、NMB受体(Neuromedin B receptor,NMBR)表达阳性的分娩期小鼠子宫平滑肌细胞,联合NMBR和核因子κB(Nuclearfactor kappa B,NF-κB)p65的RNA干扰技术、real-time PCR和磷酸化ELISA等方法,确定EGb761对NMB诱导的小鼠子宫平滑肌细胞中NF-κB和IL-6表达的影响。结果高浓度的EGb761(100 mg.L-1)组,NF-κB p65DNA结合活性明显低于对照组及低浓度组(P<0.01),中、低浓度EGb组与对照组比较差异均无统计学意义。高浓度的EGb761预处理,可明显下调NMB诱导的子宫平滑肌细胞中NF-κB活性和IL-6的表达(P<0.01),且二者的变化呈正相关(r=0.892,P<0.01)。EGb761对NMB诱导的NF-κB活性和IL-6表达的调节作用可被NMBR及NF-κB基因沉默所阻断,且沉默两基因的阻断效率无差异。结论 EGb761可借助NMBR通路,抑制NF-κB活性和IL-6表达的上调,影响平滑肌细胞的活动。     

齐墩果酸对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭、转移的影响及其作用机制研究

目的:探讨齐墩果酸抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭、转移的作用及其机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度齐墩果酸(10、20、40、60、80、100μmol/L)作用12、24、36、48 h对卵巢癌SKOV3细胞增殖能力的影响;采用Transwell实验观察低、高剂量齐墩果酸(20、40μmol/L)作用24 h对SKOV3细胞迁移及侵袭能力的影响;采用Western Blotting法检测低、高剂量齐墩果酸对SKOV3细胞中核因子κB p65(NF-κB p65)、肝再生磷酸酶3(PRL-3)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、上皮钙黏着蛋白E(E-cadherin)等蛋白表达的影响;运用脂多糖(LPS)诱导和NF-κB p65质粒转染SKOV3细胞,采用Western blotting法和实时荧光定量PCR考察低、高剂量齐墩果酸对NF-κB/PRL-3通路相关蛋白及其mRNA表达的影响。结果:随着齐墩果酸给药浓度的增加和作用时间的延长,SKOV3细胞的增殖能力有随之降低的趋势,各剂量组的细胞存活率均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。低、高剂量的齐墩果酸组的迁移和侵袭细胞数均显著减少(P<0.05或P<0.01),且其NF-κB p65、PRL-3、TNF-α、IL-6蛋白的相对表达量均显著降低,E-cadherin蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。经LPS刺激后,LPS模型组细胞中NF-κB p65、PRL-3、TNF-α、IL-6蛋白及其m RNA的相对表达量较对照组显著升高,E-cadherin蛋白及其m RNA的相对表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01);低、高剂量齐墩果酸组细胞中NF-κB p65、PRL-3、TNF-α、IL-6蛋白及其mRNA的相对表达量均显著降低,E-cadherin蛋白及其m RNA的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。在NF-κB p65过表达SKOV3细胞中,低、高剂量齐墩果酸同样能够显著下调NF-κB p65、PRL-3、TNF-α、IL-6蛋白的表达,显著上调E-cadherin蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:齐墩果酸能够通过调控NF-κB/PRL-3信号通路来抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖、侵袭、转移。     

自发性糖尿病小鼠肾小球细胞Nampt和骨形态发生蛋白7的表达及烟酰胺单核苷酸在高糖条件下对大鼠肾小球系膜HBZY-1细胞纤维化的影响

目的探讨糖尿病肾小球细胞烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)与骨形态发生蛋白7(BMP7)表达的关系及烟酰胺单核苷酸(NMN)缓解糖尿病肾小球细胞炎症纤维化的作用机制。方法 (1)动物实验:C57/BL6自发性糖尿病小鼠和C57/BL6野生型小鼠,均采取普通饲料喂养,当自发性糖尿病小鼠血糖>(34.2±1.9)mmol·L~(-1)并出现明显肾组织损伤时,取肾组织进行病理切片,免疫共聚焦法检测肾小球细胞Nampt、核转录因子κB p65(NF-κB p65)、沉默调节蛋白1(SIRT1)和BMP7的表达。(2)细胞实验:葡萄糖200 mmol·L~(-1)培养大鼠肾小球系膜HBZY~(-1)细胞,在不同时间(24,48和72 h)以及不同浓度NMN(50,100和200μmol·L~(-1))处理24 h时后,免疫印迹法检测Nampt和BMP7的表达;葡萄糖200 mmol·L~(-1)处理HBZY~(-1)细胞96 h,免疫荧光法检测NF-κB p65和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;应用NMN 100μmol·L~(-1)和Nampt特异抑制剂FK866 10μmol·L~(-1)作用HBZY~(-1)细胞24 h后,免疫印迹法检测HBZY~(-1)细胞Nampt,BMP7和NF-κB p65表达。结果 (1)动物实验:自发性糖尿病小鼠肾小球明显萎缩,肾小球细胞Nampt和NF-κB p65的荧光强度比野生型小鼠明显升高(P<0.05),而BMP7和SIRT1的荧光强度显著降低(P<0.01)。(2)细胞实验:Western蛋白印迹检测显示,葡萄糖200 mmol·L~(-1)培养48和72 h,HBZY~(-1)细胞Nampt表达增加(P<0.01),BMP7表达下降(P<0.01,P<0.05)。葡萄糖200 mmol·L~(-1)条件下加NMN 50,100和200μmol·L~(-1)作用24 h,各组BMP7表达均增加(P<0.01);免疫荧光结果显示,与细胞对照组比较,葡萄糖200 mmol·L~(-1)处理HBZY~(-1)细胞,NF-κB p65和α-SMA的荧光强度升高(P<0.01);NMN干预后,与葡萄糖200 mmol·L~(-1)处理组比,Nampt和NF-κB p65表达降低(P<0.01),BMP7表达增加(P<0.01);加FK866后,Nampt表达降低(P<0.01),NF-κB p65表达下降,BMP7表达虽然有上升趋势,但其表达增高没有NMN组明显。结论严重糖尿病状态下,通过抑制内源性Nampt过表达能够上调BMP7,从而缓解肾小球细胞炎症纤维化作用,NMN可能通过干预Nampt影响细胞BMP7表达。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路研究黄连素对小鼠巨噬细胞极化的干预作用

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路研究黄连素对小鼠巨噬细胞极化的影响。方法:以小鼠巨噬细胞RAW264.7为对象,以阿托伐他汀钙为阳性对照,经脂多糖(LPS)诱导以复制炎症细胞模型,采用酶联免疫吸附测定法检测低、中、高剂量黄连素(5、10、20μmol/L)作用24 h后细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、NF-κB含量,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中TLR4、MyD88 mRNA的表达水平,采用Western blotting法检测细胞中TLR4、MyD88、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD206蛋白的表达水平。结果:与空白对照组比较,LPS诱导组细胞培养液中TNF-α、IL-6、NF-κB含量,细胞中TLR4、MyD88 mRNA的相对表达量以及TLR4、MyD88、iNOS蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。与LPS诱导组比较,阿托伐他汀钙组和黄连素中、高剂量组TNF-α、IL-6含量,TRL4、MyD88 mRNA及其蛋白的相对表达量以及各给药组NF-κB含量和i NOS蛋白的相对表达量均显著降低,且黄连素高剂量组NF-κB含量显著低于阿托伐他汀钙组(P<0.05);阿托伐他汀钙组和黄连素高剂量组CD206蛋白的相对表达量均显著升高,且黄连素高剂量组CD206蛋白的相对表达量显著高于阿托伐他汀钙组(P<0.05)。结论:不同剂量的黄连素均可不同程度地干预小鼠巨噬细胞极化,其机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

新型冠状病毒非结构蛋白NSP13通过调控IκBα蛋白降解抑制NF-κB信号通路

目的 研究新型冠状病毒非结构蛋白13(NSP13)调控NF-κB信号通路的作用机制。方法 利用GV367-NSP13-FLAG慢病毒感染的方法制备高表达NSP13的A549细胞（A549-NSP13）和A549对照组,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和ELISA检测NF-κB下游细胞因子白细胞介素6(IL-6)和趋化因子5(CCL-5)表达水平;Western印迹法检测NF-κB信号通路P65、磷酸化P65和NF-κB抑制因子α(IκBα)蛋白表达。放线菌酮10 mg·L-1处理细胞0,15,30,45,90和120 min,Western印迹法检测IκBα蛋白半衰期。结果 与A549对照组相比,A549-NSP13细胞检测到FLAG标签蛋白条带,且NSP13 mRNA表达显著上调（P<0.01）,表明A549-NSP13细胞系构建成功。与A549对照组相比,A549-NSP13细胞IL-6 mRNA和蛋白表达水平（P<0.01）及CCL-5 mRNA和蛋白表达水平（P<0.05,P<0.01）均显著降低;磷酸化P65蛋白表达下降（P<0.01）,而...     

文冠果壳苷对Aβ25-35/IFN-γ诱导小胶质细胞炎症因子的抑制作用

目的探讨文冠果壳苷对Aβ25-35/IFN-γ诱导原代小胶质细胞及N9细胞炎症因子的抑制作用。方法 Aβ25-35/IFN-γ作用于原代小胶质细胞及N9细胞24 h后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的存活率,Griess法检测细胞的亚硝酸盐含量,ELISA法测定IL-1β及TNF-α含量,Western印迹法检测NF-κB和MAPK路径相关蛋白表达,RT-PCR法测定TLR2及相关炎症因子mRNA的表达。结果 Aβ25-35/IFN-γ诱导小胶质细胞后,文冠果壳苷对其细胞生存率无影响,但可减少IL-1β,TNF-α及亚硝酸盐含量(P<0.05),降低NF-κB及MAPK路径相关蛋白表达(P<0.05),抑制TLR2,iNOS,COX-2,IL-1β及TNF-αmRNA表达(P<0.05)。结论文冠果壳苷可抑制炎症因子的产生,机制可能与抑制NF-κB及MAPK路径蛋白及mRNA表达有关。