狭基线纹香茶菜水提部位对免疫肝损伤小鼠NF-kB蛋白表达水平及核转位的影响

目的：研究狭基线纹香茶菜水提部位对免疫肝损伤小鼠核因子KB（NF—KB）蛋白表达水平及核转位的影响。方法：小鼠尾静脉注射刀豆蛋白A（ConA）25mg·kg。复制肝损伤模型,免疫组化法检测NF-kB在肝组织的表达,以及NF．KB从细胞浆向细胞核转位的情况。结果：复制模型4、8h后小鼠NF．KB蛋白表达显著增加（P〈0．01）,吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）和狭基线纹香荼菜水提部位9．2g·kg。在4、8h均可显著降低模型小鼠NF．1（El的蛋白表达量（P〈O．01）。ConA能显著促进NF—KB自细胞浆向细胞核转位（P〈O．01）。PDTC和狭基线纹香茶菜提取物9．2g·kg-1。能显著减少NF-kB在细胞核表达,使其在细胞浆表达显著增多（P〈0．01）。结论：狭基线纹香茶菜可抑制免疫肝损伤小鼠NF-kB蛋白的表达,并抑制NF-kB的核转位。狭基线纹香茶菜对抗免疫肝损伤的作用机制可能与其抑制核NF-kB的激活有关。     

虫草菌丝对慢性肾功能衰竭大鼠微炎症反应的影响

目的考察慢性肾功能衰竭(CRF)模型大鼠肾脏组织NF-κB-p65与血清C反应蛋白(CRP)和白细胞介素6(IL-6)浓度的关系,并探讨虫草菌丝对NF-κB表达的抑制作用及其用于治疗微炎症反应的可能性。方法 50只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)阳性对照组、虫草菌丝3和6g·kg-1治疗组。建模前1d各组大鼠尾静脉抽血,并留取24h尿液,第2天假手术组行假手术,其余4组切除右肾上、下两极约70%肾脏;10d后假手术组再次进行"假手术",其余4组再经左腹壁切除左肾,制备5/6肾切除CRF大鼠模型。建模2周后,PDTC组隔日ip给予PDTC0.01g·kg-1,虫草菌丝治疗组分别ig给予虫草菌丝3和6g·kg-1,每天1次,共12周;假手术组和模型组ig给予等体积生理盐水;给药12周后各组留取血样和24h尿液,处死大鼠取肾。ELISA法检测血清CRP和IL-6浓度,全自动生化仪检测血清肌酐浓度,考马斯亮蓝法测定24h尿蛋白,实时荧光定量RT-PCR法和免疫组织化学法检测肾组织NF-κB-p65mRNA和蛋白表达。结果①建模前,各组大鼠24h尿蛋白和血清肌酐浓度无明显差异;建模14周后,模型组、PDTC组、虫草菌丝3和6g·kg-1组24h尿蛋白和血清肌酐浓度较建模前均明显升高(P<0.01),模型组较假手术组亦明显升高(P<0.01);模型组大鼠肾组织均出现肾小球球囊粘连、局灶节段性硬化及肾小管灶状萎缩和代偿性肥大等CRF病理改变;给药12周后,PDTC组、虫草菌丝3和6g·kg-1组大鼠肾组织病理变化与模型组比较无明显改善,虫草菌丝3和6g·kg-1组24h尿蛋白和血清肌酐浓度明显降低(P<0.01)。②给药12周后,模型组与假手术组比较,血清CRP和IL-6浓度及肾组织NF-κB-p65mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.01),PDTC组、虫草菌丝3和6g·kg-1组与模型组比较均明显降低(P<0.01),虫草菌丝6g·kg-1组比3g·kg-1组降低更为明显(P<0.05)。③各组肾组织NF-κB-p65mRNA表达与血清CRP和IL-6浓度进行直线相关分析结果表明,假手术组肾脏NF-κB-p65mRNA表达与血清CRP和IL-6浓度之间无相关性,其余4组肾组织NF-κB-p65mRNA表达与血清CRP和IL-6浓度明显正相关(P<0.05,P<0.01)。结论 CRF大鼠肾脏NF-κB-p65表达与血清CRP和IL-6浓度正相关;虫草菌丝可抑制CRF大鼠肾脏NF-κB-p65mRNA和蛋白表达,对CRF大鼠微炎症反应具有一定的治疗作用。     

黄皮果提取物对急性乙醇中毒致小鼠肝损伤的保护作用

目的探讨黄皮果提取物(EFCL)对小鼠急性乙醇中毒致肝损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法 ICR小鼠40只,随机分为正常对照、模型及EFCL 1.5和3.0 g·kg-1组。EFCL 1.5和3.0 g·kg-1组小鼠分别ig给予相应剂量的EFCL;30 min后ig给予52℃二锅头白酒12 ml.kg-1;24 h后处死小鼠,制备血清,取肝组织制备10%肝组织匀浆,采用试剂盒方法检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性,以及肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量,常规HE染色和淀粉酶-过碘酸希夫法染色观察肝组织病理形态改变,并用免疫组织化学法测定肝组织中NF-κB和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果与正常对照组比较,模型对照组小鼠血清ALT和AST活性分别升高28.0%和28.9%(P<0.01),肝组织匀浆中SOD活性和GSH含量分别由(706±46)kU·g-1蛋白和(251±61)mg.g-1蛋白降低至(515±68)kU·g-1蛋白和(126±18)mg.g-1蛋白,而MDA含量由(204±21)μmol·g-1蛋白升高至(258±50)μmol·g-1蛋白(P<0.05);肝组织中NF-κB和α-SMA表达增加(P<0.01)。与模型对照组比较,EFCL 1.5和3.0 g·kg-1组小鼠血清ALT活性分别降低了18.3%和19.8%,血清中AST活性分别降低了6.4%和9.7%(P<0.05,P<0.01);EFCL 3.0 g·kg-1组肝组织匀浆中GSH水平和SOD活性分别升高了61.4%和14.8%(P<0.05,P<0.01)。肝组织中NF-κB和α-SMA的表达水平明显低于模型对照组(P<0.01)。肝组织病理形态检测可见,EFCL 1.5和3.0 g·kg-1组小鼠对乙醇引起的肝细胞脂肪样变、水样变和炎症细胞浸润等均有明显改善。结论 EFCL对小鼠急性乙醇中毒所致肝损伤具有保护作用,其机制可能与升高抗氧化酶活性、促进自由基清除、降低NF-κB的表达及抑制肝星状细胞活化有关。     

西洛他唑对糖尿病大鼠主动脉VCAM-1、NF-κB及PPARs的影响

目的观察西洛他唑对糖尿病大鼠主动脉血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)、核因子(NF)-κB及过氧化物酶增殖体激活受体(PPAR s)的影响,探讨西洛他唑影响VCAM-1表达的上游信号通路。方法腹腔注射链脲佐菌素(65 mg.kg-1)制备糖尿病模型,正常对照组大鼠腹腔注射柠檬酸钠缓冲液(NC,n=8)。随机将成模的32只糖尿病大鼠分为糖尿病模型组(DM,n=12)、高剂量西洛他唑组(GX,27mg.kg-1.d-1,n=10)与低剂量西洛他唑组(DX,9 mg.kg-1.d-1,n=10)。治疗8 wk,采用免疫组织化学法检测各组主动脉组织VCAM-1表达及P65亚基核转位情况;原位杂交和凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测主动脉VCAM-1 mRNA表达及NF-κB-DNA结合活性;RT-PCR或Real-Time PCR检测PPARα、PPARγmRNA表达。结果①与正常组相比,糖尿病大鼠主动脉内皮VCAM-1及其基因表达升高(P<0.01),NF-κB P65核转位及活化增强(P<0.01),PPARγmRNA表达为正常大鼠的1.7倍,而PPARαmRNA表达下降(P<0.01)。②与糖尿病组相比,高剂量西洛他唑治疗组主动脉内皮VCAM-1及其基因表达降低(P<0.01),NF-κB P65核转位及活化被抑制(P<0.01),PPARγmRNA表达比糖尿病大鼠下降73%,而PPARαmRNA则上升(P<0.05)。结论高剂量西洛他唑抑制糖尿病大鼠主动脉内皮表达VCAM-1,这可能与其对PPARs表达、NF-κB核转位及其DNA结合活性的影响有关。     

和厚朴酚对小鼠急性肝炎的保护作用研究

目的:研究和厚朴酚对急性肝炎的肝保护作用。方法:复制伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导的小鼠自身免疫性肝炎模型,并在复制模型后2h给予和厚朴酚干预。采用临床自动生化分析仪检测不同时间点丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)变化;苏木精-伊红染色法(HE)染色组织病理学观察,评价和厚朴酚治疗效果;原位末端标记法(TUNEL)染色观察8h小鼠肝脏细胞凋亡情况,定量聚合酶链式反应(PCR)检测核因子κB(NF-κB)的信使核糖核酸(mRNA)表达水平。结果:和厚朴酚可明显降低ConA诱导急性肝炎模型小鼠血清AST、ALT含量(P<0.01或P<0.05),明显减轻急性肝炎小鼠的肝组织损伤和炎性细胞浸润;ConA+和厚朴酚高、中、低剂量组可显著降低NF-κB的mRNA转录水平(P<0.05)。结论:和厚朴酚能显著减轻ConA诱导的自身免疫性肝炎的肝功能损伤,抑制NF-κBmRNA转录水平。     

氯胺酮减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的炎性反应与NF-κB信号通路相关性研究

摘要：目的:探讨氯胺酮减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的炎性反应与核转录因子κB（NF-κB）信号通路相关性。方法:将75只昆明小鼠随机分为5组:假手术（Sham）组、脑缺血再灌注损伤（I/R）组、氯胺酮低(50 mg·kg-1ketamine-L)、高(100 mg·kg-1,ketamine-H)剂量组和尼莫地平(15 mg·kg-1,nimodipine)组,每组15只。除Sham组外,其余各组小鼠建立脑缺血再灌注模型。术后第3天,ketamine-L、ketamine-H和nimodipine组小鼠分别按相应剂量连续腹腔注射给药14 d,1次/d,Sham组和I/R组给予等体积生理盐水。各组小鼠在第1,7,14天进行神经功能缺失体征评分;水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力; TTC染色法测定各组小鼠脑梗死体积;苏木精-伊红染色（HE）染色观察各组小鼠脑组织病理变化;酶联免疫法检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-10（IL-10）的含量;蛋白质印迹法（Western Blot）检测各组小鼠脑组织中NF-κB p65的表达;免疫组化法测定各组小鼠脑组织中NF-κB p65阳性细胞的表达情况。结果:与I/R组比较,ketamine-L组、ketamine-H组和nimodipine组小鼠各时间点的Longa评分显著降低（P<0.05或P<0.01）;学习时间和记忆时间显著缩短（P<0.05或P<0.01）;脑梗死体积显著减小（P<0.01）;血清中TNF-α、IL-6含量显著降低,IL-10的含量显著增加（P<0.05或P<0.01）; NF-κB p65蛋白表达明显降低（P<0.05或P<0.01）; ketamine-H组和nimodipine组小鼠脑组织中NF-κB p65阳性细胞表达明显降低（P<0.05或P<0.01）。nimodipine组、ketamine-H组与ketamine-L组相比,以上各指标差异均有统计学意义（P<0.05）。Sham组小鼠海马区神经元细胞排列整齐,细胞结构完整,层次分明,无细胞核固缩现象; I/R组小鼠海马区神经元细胞排列紊乱,细胞体积明显缩小,大量细胞有核固缩现象,且胞浆减少; ketamine-L组、ketamine-H组和nimodipine组小鼠海马区神经元细胞排列较规则,细胞损伤程度较轻,部分细胞有体积缩小、细胞核固缩等现象。结论:氯胺酮通过影响NF-κB信号通路、降低TNF-α、IL-6及升高IL-10的含量来实现内源性保护作用,这可能与减轻炎症反应有关。     

FK228对HepG2细胞NF-κB活化及炎症因子转录的影响

目的:研究FK228对TNF-α诱导的人肝癌细胞HepG2核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活化及炎症因子IL-6、IL-8转录的影响。方法:培养的HepG2细胞分为对照组、TNF-α刺激组和FK228干预组。分别用TNF-α刺激和FK228+TNF-α共同作用,免疫印迹(Western blot)法分析细胞核中NF-κBp65及其细胞浆中抑制因子IκBα的表达;RT-PCR对炎症因子IL-6、IL-8 mRNA作半定量分析。结果:FK228(4～32μg·L~(-1))干预组与TNF-α刺激组比较,细胞核内NF-κB显著减少(P<0.01);FK228(8～32μg·L~(-1))减少胞浆中IκBα的降解且各组之间差异有统计学意义(P<0.01);FK228降低TNF-α诱导的IL-6、IL-8 mRNA表达,FK228干预组与TNF-α刺激组相比,差异具统计学意义(P<0.01)。结论:FK228减少胞浆中IκBα降解、阻碍NF-κB的过度活化可能是降低炎症因子释放、发挥抗炎作用的重要机制。     

MYR通过NF-κκB信号通路改善LPS诱导小鼠纹状体炎症反应

目的研究MYR对LPS诱导小鼠纹状体内神经炎症的作用及机制。方法雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、LPS模型组、MYR 20和50 mg·kg~(-1)给药组。连续给予MYR 7 d,于末次给药后,模型组和给药组小鼠采用腹腔注射LPS5 mg·kg~(-1)诱导小鼠急性神经炎症的发生,LPS注射6 h后,ELISA法检测小鼠纹状体中IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1以及ICAM-1等炎症因子的变化;Western印迹法检测小鼠纹状体中NF-κB信号通路相关蛋白的表达变化。结果与正常对照组比较,LPS诱导组小鼠纹状体中炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1以及ICAM-1显著增加(所有P<0.01),NF-κB信号通路相关蛋白表达显著增加。而给予MYR 20和50 mg·kg~(-1)可显著抑制LPS诱导的小鼠纹状体炎症因子的释放,抑制NF-κB,IκB蛋白的磷酸化,抑制胞浆内NF-κB的核转位。结论 MYR可有效抑制LPS诱导的神经炎症,保护小鼠纹状体中多巴胺神经元,其抗炎保护作用与抑制NF-κB信号通路密切相关。     

二硫代氨基甲酸吡咯烷对小鼠免疫性肝损伤的抑制作用

目的探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对免疫性肝损伤的抑制作用及其机制。方法设正常对照、脂多糖(LPS)、卡介苗(BCG)、BCG+LPS、PDTC和BCG+PDTC+LPS组。除正常对照、LPS和PDTC组外,其余各组小鼠经尾静脉注射BCG(每只2.5mg)。10d后,LPS和BCG+LPS组分别给予LPS(0.2mg·kg-1,ip),PDTC和BCG+PDTC+LPS组在给予LPS前24和2h分别给予PDTC(100mg·kg-1,ip),对照组给予等体积生理盐水。每组15只小鼠用于观察LPS处理后72h的死亡率;每组6只小鼠于LPS处理后1.5h处死,取肝脏,用RT-PCR检测肝脏组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达水平,用凝胶电泳迁移率分析法测定肝脏核因子κB(NF-κB)结合活性;每组12只小鼠于LPS处理后6h取血,处死,留取肝脏,测定血清谷丙转氨酶(GPT)活性、一氧化氮(NO)水平和肝组织还原型谷胱甘肽(GSH)含量,制备肝组织切片进行HE染色,观察组织病理变化。结果与正常对照组比较,BCG和LPS组小鼠肝脏炎症细胞明显增加,血清GPT活性升高,肝脏GSH含量显著下降,肝脏TNF-α与IL-1β mRNA表达增强,各组均未见小鼠死亡;PDTC组除血清GPT活性升高外,上述其他指标均未发生明显改变。与BCG和LPS组比较,BCG+LPS组血清GPT活性进一步升高,并伴有大面积肝脏坏死和大量炎症细胞浸润,肝脏NF-κB结合活性显著升高,TNF-α和IL-1β表达进一步增强,GSH水平下降,血清NO水平增加,小鼠死亡率40%。与BCG+LPS组比较,PDTC预处理明显抑制BCG+LPS引起的肝脏NF-κB活性、TNF-α及IL-1β mRNA表达增强,升高肝脏GSH含量,降低血清GPT活性和NO水平,减轻BCG+LPS引起的肝脏炎症和坏死,未见小鼠死亡。结论PDTC可抑制BCG+LPS引起的小鼠免疫性肝损伤,其机制可能与其抗炎和抗氧化作用有关。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞IκB和NF-κB表达的影响

目的:观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)核因子(NF)-κB的表达、激活的影响及其诱导动脉粥样硬化形成的分子机制。方法:将体外培养的HUVECs分为对照组、2.5(H1)、5(H2)、10(H3)及15mmol/L(H4)5组,培养24h。通过四甲基噻唑氮蓝(MTT)比色法测定细胞活力,采用RT-PCR法检测NF-κBp65mRNA的表达,Westernblot检测NF-κB抑制蛋白-α(IκB-α)的蛋白降解,免疫组化法检测NF-κB的核转移趋势。结果:H2、H3、H4组HUVECs细胞活力较对照组明显下降(P<0.01);Hcy可使NF-κBp65mRNA的表达明显增强(P<0.05或P<0.01);Hcy可促进IκB-α蛋白降解,且呈现明显的剂量依赖性;Hcy处理HUVECs后,大量的NF-κBp65从细胞质进入细胞核。结论:Hcy可通过增强NF-κBp65mRNA的表达,加速IκB-α蛋白的降解,促进NF-κBp65的释放、活化,从而转移进细胞核,调节其下游的趋化因子、细胞黏附分子的表达,促进动脉粥样硬化的形成和发展。     

硼替佐米对人胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB表达的影响及与其侵袭力关系

目的硼替佐米对人胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB表达的影响及与其侵袭力关系。方法 Brdu ELISA法测细胞增殖活性;Boyden小室培养测细胞的迁移率;Western blot测细胞uPA、NF-κB的蛋白水平;细胞免疫化学测NF-κB细胞表达及细胞定位。结果 (1)与对照组(无血清培养基组)相比,10%FCS组细胞增殖活性与迁移率明显增高(P<0.05);与10%FCS组相比,硼替佐米呈浓度依赖性抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖及迁移,硼替佐米浓度为(4μg.L-1),人胃癌SGC-7901细胞增殖活性与迁移率均明显降低(P<0.05);与PDTC组(10μmol.L-1)相比,两者无明显差别;(2)与10%FCS组相比,硼替佐米呈浓度依赖性抑制胃癌SGC-7901细胞uPA、NF-κB蛋白表达,硼替佐米浓度为(4μg.L-1)时uPA、NF-κB蛋白表达均明显降低(P<0.05);与NF-κB特异性抑制剂PDTC组相比,两组uPA、NF-κB表达均无明显差别;硼替佐米浓度为(4μg.L-1)能明显降低NF-κB核蛋白含量,与PDTC组相比,两者无显著差异(P>0.05);(4)细胞免疫化学结果示:硼替佐米(4μg.L-1)抑制10%FCS诱导人胃癌SGC-7901细胞NF-κB核移位。结论①硼替佐米抑制血清诱导胃癌SGC-7901细胞增殖迁移及uPA、NF-κB蛋白表达,②硼替佐米降低胃癌SGC-7901细胞侵袭力可能与其抑制NF-κB活性,降低UPA水平有关。     

核因子κB活化在脓毒血症急性肝损伤发病中的作用机制

目的 探讨核因子κB(NF-κB)活化在脓毒血症所致大鼠急性肝损伤发病中的作用机制.方法 采用盲肠结扎穿孔(CLP)制作脓毒血症急性肝损伤模型,将大鼠随机分为3组:CLP组、二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC) CLP组、假手术组,观察术后24 h肝组织的病理损伤及肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(STB)、非结合胆红素(UCB)的变化,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中NF-κB p65的表达和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量变化.结果 CLP可致大鼠肝急性病理损伤,模型组ALT、AST、STB、UCB显著高于假手术组,NF-κB p65的表达及TNF-a含量明显高于假手术组,PDTC干预组肝组织NF-κB p65的表达及TNF-a含量明显下降,ALT、AST、STB、UCB相应降低.结论 CLP所致脓毒血症能显著增强肝组织NF-κB的表达进而启动TNF-a等炎症因子表达增加而参与大鼠急性肝损伤发生;用PDTC抑制NF-κB活性能够降低肝组织中TNF-a表达,且能改善脓毒血症所致大鼠急性肝损伤.     

绿脓菌素通过PKC-NF-κB信号传导通路诱导人NCI-H292细胞表达IL-8

目的探讨绿脓菌素(PCN)对人气道上皮细胞株(NCI-H292细胞)表达IL-8的诱导作用及通过蛋白激酶C(PKC)和核因子κB(NF-κB)的调控机制。方法采用ELISA法对PCN诱导NCI-H292细胞分泌IL-8进行分析,应用Western blot检测NF-κΒ的蛋白表达,观察PKC和NF-κB阻断剂对IL-8表达的影响。结果PCN可促进NCI-H292细胞IL-8的分泌,而且具有明显的量效关系。PKC阻断剂钙感光蛋白(Cal C)及NF-κB阻断剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)均能抑制IL-8的表达(P<0.01)。PCN能直接诱导并迅速活化NF-κB,60~90 min表达明显。结论PCN可能通过PKC信号通路促进NF-κB的活化,从而启动IL-8的高效表达。     

甜菜碱对复合致病因素诱导肝硬化大鼠的作用及机制研究

目的:探讨甜菜碱对复合致病因素诱导肝硬化大鼠的保护作用及可能的机制。方法:72只雄性SD大鼠随机分为空白对照组,甜菜碱干预的对照组,肝硬化模型组和肝硬化模型甜菜碱干预组。各组动物分别于造模第4周末、6周末和8周末处死取材。Elisa法检测大鼠血浆中ALT、内毒素和肝组织匀浆中TNF-α、IL-6水平;肝组织切片行HE染色,NF-κB p65免疫组化染色;实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测肝组织中Toll样受体4(TLR4)mRNA、NF-κB mRNA和TLR4蛋白的表达。结果:与相应的空白对照组相比,肝硬化模型组:血浆中ALT、内毒素水平均随病程进展逐渐显著升高(P<0.05);肝组织中TNF-α、IL-6水平均显著升高(P<0.05),TLR4mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05),NF-κB mRNA的表达显著升高(P<0.05),NF-κB p65核转位也显著增多(P<0.05),它们的变化趋势为6周水平最高,4周次之,8周最低。与相应的肝硬化模型组相比,肝硬化模型甜菜碱干预组:血浆中ALT、内毒素水平均显著降低(P<0.05);4周和6周组肝组织中TNF-α、IL-6水平均显著降低(P<0.05);肝组织中TLR4 mRNA和蛋白均显著降低(P<0.05),NF-κB mRNA的表达显著降低(P<0.05),NF-κB p65核转位显著降低(P<0.05)。结论:甜菜碱可能通过抑制TLR4/NF-κB信号途径,有效减轻肝脏炎症和纤维化程度,发挥保护肝脏的作用。     

栀子柏皮汤及含栀子配伍组对免疫性肝损伤小鼠的保护作用

目的探讨栀子柏皮汤各及含栀子配伍组对刀豆蛋白(ConA)诱导免疫性损伤小鼠的保护作用及可能作用机制。方法观察栀子柏皮汤及各含栀子配伍组对尾静脉注射刀豆蛋白(ConA,20 mg·kg~(-1))诱发的免疫性肝损伤小鼠肝脏病理变化及血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性、肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影响。酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清中干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-6(IL-6)的水平。Western blot法检测与免疫炎症相关的NF-κB-p65的蛋白表达情况。结果栀子柏皮汤及各含栀子配伍组均能够降低血清ALT、AST及肝组织中MDA的含量;提高肝组织中SOD活性;降低NF-κB-p65及NF-κB-p-p65的表达,其中栀子柏皮汤全方组对免疫性肝损伤小鼠保护作用最佳。结论栀子柏皮汤对ConA诱导的免疫性肝损伤小鼠具有保护作用,其作用机制可能与调控免疫反应的NF-κB通路有关。     

泻心汤有效组分不同配伍对内毒素肺损伤大鼠NF-κB及IκB表达的影响

目的研究泻心汤有效组分及其配伍对内毒素肺损伤大鼠NF-κB及IκB表达的影响。方法大鼠灌胃给予黄芩总黄酮提取物(TFL)、大黄总游离蒽醌提取物(TFA)、大黄总结合蒽醌提取物(TCA)、TFL与TFA配伍高、低剂量(A高A低)、TFL与TCA配伍(B)及醋酸地塞米松(Dex)4d,末次给药后1h股静脉注射脂多糖(LPS)建立大鼠内毒素肺损伤模型,1、2、4h各组分别处死6只动物,收集肺组织,免疫印记(Western blot)检测核因子κB(NF-κB)、κB抑制因子(IκB)的蛋白表达。结果大黄总游离蒽醌、A高及Dex在1、2、4h均能够明显抑制NF-κB p65的核转位(P<0.01),所有给药组在2、4h均能够明显抑制胞质中的IκBα的降解(P<0.01)。结论泻心汤有效组分及其配伍对内毒素肺损伤大鼠保护作用与抑制NF-κB的核转位及IκB的降解有关。     

VEGF通过NF-κB通路对内皮细胞血清类黏蛋白1表达的影响

目的观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)对内皮细胞血清类黏蛋白(ORM)1表达的影响,探讨转录调控核因子-κB(NF-κB)通路在其中的作用。方法 Real-time PCR检测ORM1基因表达。免疫荧光分析P65蛋白核移位。Western blot检测ORM1和P65蛋白表达。结果对照组、低剂量VEGF组、高剂量VEGF组、PDTC组ORM1基因的2~(-△△Ct)值分别为0.324±0.053、0.252±0.042、0.192±0.034、0.166±0.027,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。低剂量VEGF组、高剂量VEGF组、PDTC组细胞核内的P65蛋白表达显著低于对照组。对照组、低剂量VEGF组、高剂量VEGF组、PDTC组细胞核内P65蛋白表达的相对灰度值分别为0.527±0.114、0.316±0.065、0.242±0.038、0.105±0.012,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);各组ORM1蛋白表达的相对灰度值分别为0.874±0.142、0.462±0.083、0.305±0.047、0.126±0.014,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 VEGF通过抑制NF-κB通路下调ORM1基因、蛋白表达,可能是VEGF致脑水肿的作用机制。     

晚期糖基化终产物对肾小球系膜细胞表达Fractalkine的诱导作用

目的探讨晚期糖基化终产物(AGE)对肾小球系膜细胞表达Fractalkine(Fkn)的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,实验设AGE组:加入AGE-BSA(100mg·L-1);对照组:加入牛血清清蛋白(BSA)(100mg·L-1);PDTC组:先加入PDTC100μmol·L-1孵育1h,再加入AGE-BSA(100mg·L-1);AGE抗体组:先加入抗AGE抗体(100mg·L-1IgG)孵育2h后,再加入AGE-BSA(100mg·L-1)。培养所需时间收集细胞,检测FknmRNA及蛋白表达,激光共聚焦显微镜检测NF-κB活化。结果AGE诱导体外培养的大鼠系膜细胞大量表达Fkn-mRNA及蛋白,PDTC和AGE抗体显著抑制AGE诱导系膜细胞表达FknmRNA及蛋白。经AGE刺激后NF-κB/P65迅速核转位,30min达高峰。结论AGE通过活化NF-κB诱导肾小球系膜细胞表达Fkn。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐下调基质金属蛋白酶9表达机制的研究

目的探讨TNF-α诱导的肺泡巨噬细胞(AM)性基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的信号通路以及吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对MMP-9表达的影响机制。方法从慢性阻塞性肺疾病患者支气管肺泡灌洗液中分离与培养AM,以PDTC预处理AM,以TNF-α或IL-1刺激AM。半定量逆转录-聚合酶链反应法检测MMP-9 mRNA的表达;Western blot检测MMP-9蛋白的表达及TNF-α或IL-1诱导的IκBα磷酸化水平。凝胶阻滞分析实验检测NF-κB活性。结果TNF-α上调AM源性MMP-9 mRNA和蛋白的表达(P<0.05);PDTC抑制TNF-α诱导的MMP-9的表达(P<0.05)。PDTC对TNF-α或IL-1诱导的IκBα的磷酸化均无抑制作用(P>0.05)。PDTC对TNF-α或IL-1诱导的NF-κB的活化均有抑制作用(P<0.05);且PDTC不能在体外直接抑制NF-κB的DNA结合活性(P>0.05)。结论NF-κB在TNF-α诱导的AM源性MMP-9的表达中起着重要作用;PDTC可能通过抑制泛素化-蛋白酶小体途径来下调TNF-α诱导的AM源性MMP-9的表达。     

二硫代氨基甲酸吡咯烷对小鼠急性凋亡性肝损伤的效应

目的探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对氨基半乳糖(GalN)/细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠急性凋亡性肝损伤的作用及其分子机制。方法设置生理盐水(NS)组、GalN/LPS组、PDTC+GalN/LPS组和PDTC组。每组10只小鼠被用于观察LPS处理后72h内的动物死亡情况;每组6只小鼠经LPS处理后1.5h被取血、处死并留取肝脏,用RT-PCR检测肝脏组织TNF-αmRNA表达水平,用EMSA分析肝脏NF-κB结合活性,每组12只小鼠于LPS处理后8h取血、处死并留取肝脏,测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)活力,用TUNEL技术检测肝脏细胞凋亡,并对肝组织切片行常规HE染色。结果GalN/LPS共处理升高小鼠血清ALT活力;肝脏组织病理学检查发现,GalN/LPS组小鼠肝脏严重充血、坏死并伴有大量炎性细胞浸润,肝脏组织TUNEL阳性细胞增多;在GalN/LPS共处理72h内有90%小鼠发生死亡,所有死亡小鼠均伴有肝脏严重充血。PDTC预处理抑制GalN/LPS诱导的肝脏NF-κB激活和TNF-α表达,但PDTC预处理反而加重GalN/LPS引起的小鼠肝脏细胞凋亡、进一步升高血清ALT活力、加重肝脏充血和坏死并加速小鼠死亡。结论NF-κB抑制剂PDTC通过抑制肝脏实质细胞NF-κB介导的抗凋亡机制加重GalN/LPS诱导的小鼠急性凋亡性肝损伤。