miR-145对人乳腺癌MCF-7/ADR细胞耐药逆转的作用机制研究

目的:探讨miR-145对人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR阿霉素耐药的影响及可能的作用机制。方法:采用实时定量PCR方法检测miR-145在乳腺癌细胞株MCF-7及MCF-7/ADR中的表达差异;脂质体转染法将构建好的miR-145 mimics,miR-145inhibitor成功转染进MCF-7/ADR细胞中,MTT法检测转染后MCF-7/ADR细胞对阿霉素的敏感性,流式细胞仪检测耐药细胞对阿霉素诱导凋亡的影响,Western blot检测转染前后抗凋亡蛋白Bcl-2、多药耐药基因MDR1表达蛋白P-gp的表达差异。结果:miR-145在人乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中表达下降;上调miR-145可以增强MCF-7/ADR细胞对阿霉素的敏感性,显著抑制MCF-7/ADR细胞增殖,并促进阿霉素诱导的细胞凋亡,同时显著抑制了耐药细胞中Bcl-2和P-gp的表达。结论:miR-145通过抑制Bcl-2和P-gp蛋白的表达来增加MCF-7/ADR细胞对阿霉素的敏感性和凋亡。     

MiR-130a 在上皮性卵巢癌铂类敏感与耐药患者血清中的表达及相关机制研究

目的 分析miR-130a在上皮性卵巢癌铂类敏感与耐药患者血清中的表达情况,探讨其耐药的相关机制。方法 选取32例上皮性卵巢癌铂类化疗耐药患者及30例化疗敏感患者,采用实时荧光定量PCR检测受试者血清中miR-130a表达差异,ELISA法检测血清中人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)、B淋巴细胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2,BCL-2）表达情况。结果 耐药组患者血清miR-130a和BCL-2表达均高于敏感组,而PTEN表达低于敏感组（P均＜0.05）。且随着组织学分级增加及淋巴转移的发生,耐药组患者血清miR-130a表达量显著升高（P<0.05）。结论 MiR-130a可能通过抑制PTEN激活PI3K/AKT信号通路、上调BCL-2抑制肿瘤细胞凋亡参与上皮性卵巢癌铂类化疗耐药的产生,miR-130a有望成为逆转上皮性卵巢癌化疗耐药的基因治疗新靶点。     

miR-27a对胃癌细胞凋亡影响的体外研究

目的:探讨miR-27a对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:分别构建miR-27a过表达和敲除FOXO1的SGC-7901细胞株,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞凋亡和自噬相关蛋白p53、BCL-2、LC3I、LC3II水平,同时检测上调及下调miRNA-27a的胃癌细胞FOXO1的表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证miR-27a的靶基因。实时聚合酶链式反应（Realtime PCR） 检测miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒的转染效率,并检测过表达/敲低miRNA-27a的胃癌细胞中FOXO1 mRNA的水平。结果:（1）上调miR-27a的细胞凋亡率较对照组明显下降,且凋亡相关蛋白BCL-2表达上调,p53水平下降,自噬相关蛋白LC3I、LC3II的表达较对照组下调（P<0.05）。而敲低胃癌细胞中FOXO1后得到了与上调miR-27a相似的实验结果。（2）双荧光素酶报告基因验证结果显示miR-27a与FOXO1存在靶点关系。miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒分别成功转染至胃癌细胞中。上调或下调胃癌细胞中miR-27a后,SGC-7901细胞中FOXO1 mRNA水平无明显变化（P>0.05）,FOXO1基因表达在蛋白水平相应下调或上调。结论:体外实验中,miR-27a可通过靶向抑制FOXO1的表达抑制胃癌细胞凋亡,miR-27a/ FOXO1轴可以为胃癌治疗提供新的策略。     

探讨Rab27蛋白家族在三阴性乳腺癌细胞耐药机制中的作用

背景 三阴性乳腺癌由于分子表达模式的原因只能使用化疗和免疫治疗,但许多患者因为多药耐药的出现导致化疗失败.Rab27家族与外泌体的释放密切相关,目前已知大部分增强化疗药物外排的机制均由外泌体介导,但该家族两个成员Rab27a和Rab27b在三阴性乳腺癌细胞多药耐药过程中的具体作用尚不明确.目的 本研究通过抑制Rab27蛋白家族的表达,探究其在三阴性乳腺癌细胞耐药过程中发挥的具体作用及分子机制.方法 采用siRNA抑制三阴性乳腺癌细胞中Rab27a和Rab27b的表达后,蛋白印迹法检测外泌体的分泌情况.检测Rab27a和Rab27b分别被抑制后在不同浓度顺铂、阿霉素和紫杉醇处理下的细胞活力,随后分别检测三种药物处理下抑制Rab27家族后肿瘤细胞的凋亡与坏死情况.最后检测分别抑制Rab27a和Rab27b的三阴性乳腺癌细胞耐药相关基因的表达情况.结果 抑制三阴性乳腺癌细胞Rab27a的表达后,外泌体分泌显著下调,抑制Rab27b的表达对外泌体分泌无显著影响.抑制Rab27a和抑制Rab27b均会降低三阴性乳腺癌细胞对顺铂、阿霉素和紫杉醇的耐受程度,提高肿瘤细胞在这几种药物处理下的细胞凋亡率,降低耐药相关基因IL-6、EGR1、ABCC3和ABCC6的表达,抑制Rab27b对肿瘤细胞耐药产生的影响明显强于抑制Rab27a.结论 Rab27家族与三阴性乳腺癌细胞耐药密切相关,Rab27a可能通过直接影响外泌体的分泌参与耐药机制.Rab27b与Rab27a的分子机制不同,它可能通过调控其他耐药相关基因的表达从而参与三阴性乳腺癌细胞的耐药机制.     

miR-181a/b靶向抑制多种抗凋亡蛋白表达对肺癌细胞顺铂耐药的影响

目的:研究miR-181a/b在肺癌细胞顺铂耐药形成中的作用?方法:运用miRNA实时定量PCR方法检测miR-181a/b在肺癌顺铂耐药细胞A549/CDDP与母代A549细胞中的表达差异,运用Western blot检测A549/CDDP细胞与母代细胞抗凋亡蛋白BCL2?MCL1和XIAP的表达差异,分别构建BCL2?MCL1和XIAP的3′UTR荧光素酶报告质粒验证miR-181a/b的靶基因,在耐药细胞中瞬时转染miR-181a/b模拟物以检测上调miR-181a/b对A549/CDDP细胞中BCL2?MCL1和XIAP蛋白表达及耐药性的影响,并运用流式细胞术检测转染后耐药细胞对CDDP(Cisplatin,顺铂)诱导凋亡的影响?结果:在A549/CDDP细胞中miR-181a/b均呈低表达,而抗凋亡蛋白BCL2?MCL1和XIAP则呈高表达,荧光素酶报告实验证实BCL2?MCL1和XIAP是直接受miR-181a/b调控的靶基因,在耐药细胞中上调miR-181a/b显著抑制BCL2?MCL1和XIAP蛋白表达水平,显著增加耐药细胞对顺铂的敏感性,并显著增加耐药细胞对顺铂诱导的凋亡?结论:miR-181a/b靶向抑制多种抗凋亡蛋白表达可显著增加A549/CDDP细胞对顺铂的敏感性?     

miR-135a/b逆转肺癌A549/CDDP细胞对顺铂耐药性及相关机制研究

目的:研究miR-135a/b对肺癌耐顺铂细胞株A549/CDDP顺铂耐药的影响?方法:运用实时荧光定量PCR检测miR-135a/b在A549和A549/CDDP 细胞株中的差异表达;MTT法检测转染后A549及A549/CDDP细胞对CDDP的敏感性;构建MCL1-3′-UTR荧光素酶报告质粒验证miR-135a/b的靶基因;Western blot检测转染前后细胞MCL1蛋白的表达差异;流式细胞术检测转染后耐药细胞对顺铂诱导凋亡的影响?结果:miR-135a/b在A549/CDDP细胞中表达量降低;在耐药株中上调miR-135a/b后显著增加细胞对顺铂的敏感性;荧光素酶实验证实MCL1是miR-135a/b的靶基因;抗凋亡蛋白MCL1在A549/CDDP细胞中呈高表达,上调miR-135a/b明显抑制耐药细胞中MCL1蛋白的表达;miR-135a/b显著增加A549/CDDP细胞对顺铂诱导的凋亡?结论:miR-135a/b通过靶向调控MCL1蛋白表达增加NSCLC细胞对顺铂的敏感性和凋亡?     

MiR433 靶向调控Notch1 逆转人乳腺癌细胞对多西他赛的耐药性

目的探讨miR-433在多西他赛对乳腺癌耐药机制中的作用。方法将MCF-7乳腺癌细胞暴露于逐渐增强浓度的多西他 赛中建立对多西他赛耐药的乳腺癌细胞（MCF-7/DOX）,并用miR-433 抑制剂及对照剂转染MCF-7/DOX细胞,采用酶标仪 （BioTek）测量吸光度和FACS流式细胞仪检测来评估miR-433的功能和作用;通过生物信息学分析、荧光素酶报告基因测定法 等技术确定miR-433的下游靶标。结果实时定量PCR结果显示miR-433在MCF-7/DOX细胞中的表达下调;细胞活力测定结 果表明miR-433抑制剂能促进产生多西他赛耐药,并减弱MCF-7细胞的凋亡,而miR-433过表达能增强多西他赛的敏感性并且 诱导MCF-7/DOX细胞凋亡。荧光素酶报告基因测定结果显示在miR-433表达显著下调的MCF-7细胞中,Notch1的mRNA和 蛋白质表达水平明显增强;miR-433mimics转染的MCF-7/DOX细胞与对照组（mimics-Ctrl）相比,Notch1的mRNA和蛋白表达 显着降低。结论miR-433可通过抑制Notch1的表达来逆转乳腺癌对多西他赛的耐药性,继续发挥药物的有效性。     

miR-34a通过靶向调控Notch1表达影响乳腺癌细胞的增殖

目的探讨miR-34a通过靶向调控Notch1表达影响乳腺癌细胞的增殖。方法乳腺癌细胞MCF-7转染miR-34a mimics及miR-34a NC,RT-PCR法检测细胞中miR-34a表达,MTT,克隆形成实验,Hoechst染色及流式细胞术分别检测miR-34a mimics对乳腺癌MCF-7细胞活力、克隆能力、凋亡情况及细胞周期的影响;通过双荧光素酶报告基因实验,western blot及RT-PCR检测Notch1是否是miR-34a的下游靶基因。结果与miR-34a NC比较,miR-34 mimics组中miR-34a表达量上调,细胞活力降低(P0.01),细胞凋亡率显著提高(P0.01),细胞克隆数目减少(P0.01),细胞周期阻滞在G1期(P0.01),Notch1蛋白及mRNA表达量都显著降低(P0.01),同时荧光素酶报告基因实验也证实miR-34a mimics能与报告基因结合。结论 miR-34a mimics能通过负性调控Notch1表达,从而显著的抑制MCF-7乳腺癌细胞增值,并诱导细胞凋亡。     

miR-33a-3p通过调控EphA2影响结直肠癌化疗耐药

摘要:目的 探讨微小 RNA-33a-3p(miR-33a-3p)对结直肠癌化疗耐药的影响及其调控机制。方法 实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)法检测结直肠癌亲本株(HCT8)及耐药细胞株(HCT8/5-Fu及 HCT8/DDP)中 miR-33a-3p的表达。构 建 miR-33a-3p模拟物和阴性对照转染至结直肠癌耐药细胞后检测细胞增殖、凋亡、周期分布及化疗敏感性变化,运用生 物信息学方法预测 miR-33a-3p的靶基因,运用qRT-PCR和 Westernblot检测过表达 miR-33a-3p对下游靶基因 EphA2 的影响。结果 结直肠癌耐药细胞系中 miR-33a-3p的表达显著低于亲本株(均 P<0.01)。与阴性对照组相比,过表达 miR-33a-3p的耐药细胞增殖能力降低,细胞凋亡增加,细胞于 G2/M 周期阻滞,化疗敏感性增强(均 P<0.05)。生物信 息学预测结果显示 EphA2可能为 miR-33a-3p的下游靶基因。当过表达 miR-33a-3p时,耐药细胞 EphA2表达明显降 低。结论 miR-33a-3p可能通过调控下游靶基因 EphA2的水平逆转结直肠癌化疗耐药。     

miR-27a与糖尿病肾病发病机制的研究进展

糖尿病患者体内存在的高糖环境能促进miR-27a表达水平上调。miR-27a通过影响足细胞、肾小球系膜细胞及肾小管上皮细胞在糖尿病肾病(DKD)中起作用,主要通过miR-27a/过氧化物酶体增殖物激活受体γ/β联蛋白轴、miR-27a/过氧化物酶体增殖物激活受体γ/转化生长因子β1/Smad3信号通路以及miR-27a/叉头状转录因子O1信号通路实现足细胞损伤、肾组织纤维化、内质网应激等。这些机制相互影响作用于肾脏相关结构,引发对应肾功能的损伤,促进DKD进展。目前关于miR-27a的机制研究主要针对肿瘤领域,对DKD的影响还不明确,进一步研究可为DKD的诊断和治疗提供新靶点。     

2005年广西流动人口疟疾监测结果分析

目的了解广西流动人员疟疾流行现状,进而提出针对性防治措施。方法收集全区网络直报疫情资料和各级疾病预防控制机构疟疾监测数据进行分析。结果2005年广西流动人口发热病人平均疟原虫阳性率为0·33%。80·62%的病人为本地居民外出到疟疾流行区务工感染所致。以从事护林/砍伐比例最高,占44·19%。结论加强返乡流动人口疟疾监测是巩固广西疟疾防治的关键所在。     

2004年邹城市中小型饮食行业餐具消毒效果调查

为确保消费的饮食安全，更好地了解饮食业餐具消毒效果卫生状况，从而为进一步加强监督管理提供依据，于2004年4～7月对邹城市所属中小型饮食业进行餐具消毒效果检测，共检测876份，现将结果报告如下。     

2005年汕头市登革热定点监测结果分析

目的 通过定点监测为汕头市登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。方法收集监测点的登革热疫情、人群抗体水平和媒介伊蚊等监测资料，用EPI2002软件统计分析。结果2005年汕头市无登革热疫情，抗登革热病毒IgG、IgM阳性率低，伊蚊幼虫孳生密度高峰在6、8、9、10月份，低谷在4、7、11月份，孳生情况随着月平均降水量、平均气温变化而变化；孳生场所以农村、暂时性容器为主。结论汕头市有登革热流行的自然、社会环境条件，人群普遍对登革热易感，8～10月是发动爱国卫生运动，清除伊蚊孳生地，预防、控制登革热流行的适当时机。     

2007～2009年铜陵市人民医院产科抗生素应用分析

目的了解产科抗生素的应用情况并评价其合理性以加强临床使用的管理。方法随机抽查铜陵市人民医院2007～2009年产科出院患者病历中的抗生素使用情况,进行回顾性的调查统计分析。结果抗生素使用率达67%,头孢类药物是主要种类,以单独用药情况最多;多数品种DUI接近1。结论该院产科抗生素使用基本合理,但尚须建立有效的监管制度,控制过度使用。     

湛江市2007年登革热监测结果

目的分析湛江市2007年登革热监测结果,为登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策提供科学依据。方法收集监测点的登革热疫情、布雷图指数、人群抗体水平和媒介伊蚊等监测资料,用EPI2002软件统计分析。结果2007年湛江市暴发2起登革热疫情,发病205例,男97例,女108例;抗登革热病毒IgG阳性率低,伊蚊幼虫孳生密度高峰在9月份,低谷在6-8月份,阳性容器以永久性容器为主。结论湛江市有登革热流行的自然、社会环境条件,人群普遍对登革热易感,8-9月是发动爱国卫生运动,清除伊蚊孳生地,预防、控制登革热流行的适当时机。     

宁波市2004年疫苗损耗监测评估

为及时了解宁波市预防接种点的疫苗使用情况，科学地制定疫苗使用计划，我们于今年4-10月在镇海区开展常规接种疫苗（卡介苗BCG、脊灰三价糖丸TOPV、百白破三联疫苗DPT、麻疹减毒活疫苗MV）的损耗监测，现将监测结果评估如下。     

惠州市车间空气中有毒物检测结果分析

目的 了解惠州市电子、五金、电镀等企业生产车间中有毒物污染情况，以便提出有效的预防措施。方法根据中华人民共和国国家标准中气相色谱法、原子吸收分光光度法、分光光度法对车间空气中有毒物质进行检测。结果2003～2004年共检测车间空气样品3625份，舍格3511份，总合格率为96．8％。其中锰尘舍格率最低，为82．2％；其次是三氯乙烯91．0％，氰化氢93．4％，甲苯97．1％，硫酸97．2％，铅烟98．2％，正己烷99．2％。苯99．3％，二甲苯99．6％，其他合格率为100％。结论惠州市部分电子、五金、电镀企业车间空气中有毒物的浓度较高，应改善生产车间的通风设施，做好工人的个人防护。     

羧甲基壳聚糖在口腔科中的研究进展

羧甲基壳聚糖（Carboxymethyl Chitosan）是壳聚糖（Chitosan）经羧甲基化而得的一种水溶性多糖。与壳聚糖相比,羧甲基壳聚糖的水溶性提高,且安全、无毒、无害,具有成膜性、保湿性、生物相容性好的特点,是一种良好的药物载体。本文就对羧甲基壳聚糖在口腔医学中的应用做综述：     

食品中氯霉素测定方法的应用研究

目的探讨ELISA检测法检测食品中氯霉素的可行性。方法采用国际上先进的ELISA检测法和酶标读数仪定量检测，并与高效液相色谱-电喷雾串联质谱法（HPLC—MS／MS）比较。结果氯霉素含量为0．05～0．20ug／kg之间，CV％为2．5％～5％，回收率为85．0％～110．0％，标准曲线r=-0．992～-0．999。结论ELISA法具有灵敏度高，干扰少，测定步骤简便、快速。操作安全，设备投资少，测定结果准确可靠。     

广东高州市2005年医疗机构消毒质量监测分析

目的评价辖区内医疗机构消毒灭菌质量，督促各医疗单位提高消毒灭菌效果，防止医源性感染的发生。方法对辖区内的医疗单位已消毒或灭菌的用品进行抽样检测，将检测结果进行统计学分析。结果这次采集使用中消毒液、无菌器械、物体表面、手术室空气和医务人员手共3556份，检测达卫生标准2955份，符合率为83、10％，不同样品检测达卫生标准百分率依次为97．37％、95．56％、86．25％、75．41％和62、49％。结论高州市医疗机构消毒灭菌质量用卫生指标评价，卫生站的符合卫生标准率低于医院，手术室空气和医务人员手的监测合格率低于使用中消毒液和无菌器械。