含有中肾旁管的小鼠胚胎组织石蜡切片制备

目的基于雌性小鼠胚胎连续石蜡切片进行中肾旁管定位,探讨制备高质量的含中肾旁管的小鼠胚胎组织切片的方法。方法正常孕15.5 d、17.5 d、19.5 d小鼠的胚胎,聚合酶链式反应(PCR)鉴定性别,取雌性鼠胚石蜡包埋,连续横断切片,每4张取1张行HE染色后获取连续切片图像。根据雌性小鼠胚胎生殖管道解剖走形,识别并定位中肾旁管。结果获取含不同发育天数中肾旁管的小鼠胚胎切片。结论利用石蜡包埋连续切片对中肾旁管进行解剖定位,是有效获得含中肾旁管的小鼠胚胎石蜡切片的方法。     

全自动密闭式组织脱水机的使用改进

全自动密闭式组织脱水机以其卓越的性能和良好的处理效果,特别安全、高效,将逐渐被各级医院病理科广泛使用,我科自2003年使用全自动密闭式组织脱水机以来,标本的处理效果明显改观,特别是改进使用后,普遍认为,片子好切,完整切片质量显著提高。1材料进口全自动密闭式组织脱水机,附不锈钢锐水蓝一只可容150个包埋盒,塑料包埋盒。2试剂AAF固定液、70%乙醇85 ml、冰乙酸5 ml、4%甲醛液10ml。95%乙醇。无水乙醇。56℃58℃溶点石蜡。3处理过程组织取材后,放入写有检验号码的塑料包埋盒内,置于AAF液中预固定,待取完材后,统一入脱水机处理,大标本…     

Thermo全自动封闭式脱水机的应用及改进体会

目的为了不断提高病理切片质量,做出精准快速的病理诊断,更好的服务于临床。方法在使用Thermo EXCELSIOR AS型全自动密闭式脱水机的过程中,对固定液的配制、程序的设置、试剂的更换等方面进行探讨总结。结果常规HE切片,组织和细胞结构清晰,核染色质清晰,核浆对比鲜明,透明度好。免疫组织化学染色,阳性着色定位准确,背景干净,无非特异性着色。结论应用全自动脱水机的过程中,除了熟练掌握脱水机的简单操作外,应在工作中善于摸索及总结,这样才能促使组织标本的处理标准化。     

全自动密闭式组织脱水机的应用流程探讨

目的 利用全自动密闭式组织脱水机的优势，规范组织脱水流程，提高组织标本脱水质量，满足诊断需要。方法 对脱水机程序改进前后的组织脱水情况及制片效果对比，探讨程序设置、试剂控制和设备清洁等对组织脱水的影响。结果 脱水程序改进前组织蜡块发白、发硬、中心有凹陷，镜下组织切片易脆、易碎，有裂隙皱褶，红蓝对比不清晰，改进后组织蜡块软硬适中、有弹性，久放无凹陷，镜下组织切片厚薄均匀、细胞结构清晰、红蓝对比清晰。结论 改进后的组织脱水流程使标本处理标准化和规范化，组织蜡块及病理制片质量提高，满足了临床及诊断的需要。     

Calbindin—D28k在胚胎期小鼠肾组织的表达

目的 观察Calbindin-D28k在胚胎发育不同时期小鼠肾组织中的表达规律,探讨Calbindin-D28k在胚胎小鼠肾发育中的作用.方法 应用免疫荧光技术及蛋白印迹技术(Western blotting)对胚龄10、12、14、16、18 d小鼠肾组织中Calbindin-D28k的表达进行定性观察和半定量分析.结果 Calbindin-D28k在胚龄12 d胎鼠肾输尿管芽开始微弱表达,之后随胚龄增加其表达量逐渐增加.胚龄12 d在输尿管芽表达;胚龄14 d在输尿管芽Y型分支表达;胚龄16 d在榆尿管芽壶腹表达,且在S小体与输尿管芽壶腹连接处有少量表述;胚龄18 d定位于连接小管、皮质集合管上皮细胞胞浆内.结论 推测Calbindin-D28k可能对胚胎小鼠肾集合管系的发育有一定作用.     

小鼠眼球标本石蜡切片制作方法的改进

目的探讨小鼠眼球标本石蜡切片的制作方法。方法处死C57BL/6小鼠,取眼球固定于质量分数为4%中性多聚甲醛中,通过严格控制脱水与浸蜡程序并制成石蜡切片,经HE染色后在显微镜下观察。结果眼球外形均无明显变形和收缩;显微镜下视网膜组织结构完整清晰,各层细胞排列紧密,无明显裂隙。结论该方法适合小鼠眼球标本切片,尤其是视网膜切片的一种有效制作方法。     

Lecia ASP 300智能化组织脱水机的应用体会

随着病理技术的发展,自动脱水机以其卓越的性能及良好的处理效果已逐渐取代了人工脱水。我科自2004年使用Lecia ASP 300智能化全自动密封式组织脱水机以来在整个过程中对组织固定、脱水、透明、浸蜡的处理程序及效果进行了反复地观察与改进,从而提高了组织标本的处理效果,为制作好的HE切片打下良好的基础;并且在一定程度上减少了试剂挥发对人体和环境造成的伤害与污染。     

小标本的固定、脱水、包埋技巧

随着现代医学的发展，内镜活检及穿刺活检小标本越来越多，小标本的切片制作已成为外检病理工作的重要问题．我们抽查了本科20余年的小标本切片，对小标本的固定．取材、脱水、透明．浸蜡，包埋、切片．染色等过程进行了总结分析。认为固定不及时和采用95％的酒精固定可影响切片染色效果．采用95％酒精固定以及脱水，透明、浸蜡不当可使组织变脆，影响切片质量．包埋不当则组织不易切全，影响诊断．建议10％中性福尔马林克分固定，专用脱水机处理标本，按粘膜方向进行包埋．多块组织者要使各组织块保持在同一平面，每张切片要捞取不同层次的组织片10片以上．     

氧诱导视网膜病模型中曲安奈德抑制新生血管生长的机制

目的观察氧诱导视网膜病模型(OIR)中曲安奈德(TA)对CD14+细胞聚集及VEGF表达的干预作用,初步探讨曲安奈德抑制视网膜新生血管生长的可能机制。方法清洁级C57BL/6哺乳期小鼠36只(共36个眼球),随机将其分为四组:①正常对照组(6个眼球),6只17日龄正常小鼠先行FFA眼底造影,然后每鼠随机摘取一个眼球,行眼球石蜡切片HE染色。②单纯高氧组(6个眼球),6只17日龄OIR模型小鼠处理同单纯对照组。③TA高氧组(12个眼球),12只12日龄OIR模型小鼠随机一眼注射TA 2μL,再于17日龄后行FFA眼底造影后摘除术眼,其中6个眼球行眼球石蜡切片HE染色及视网膜CD14和VEGF免疫组化染色,另6个眼球行视网膜VEGF mRNA的real-time PCR检测。④BSS高氧(12个眼球),12只12日龄OIR模型小鼠随机一眼注射BSS 2μL,余处理同TA高氧组。用t检验两两比较各组视网膜突破内界膜的内皮细胞核数,视网膜CD14与VEGF免疫组化染色的平均吸光度值(IOD/AOI),及VEGF mRNA的相对含量值(2-ΔCt×105)。结果与正常对照组相比,高氧诱导组突破视网膜内界膜的内皮细胞核数...     

小鼠冷冻胚胎和精子SNP遗传鉴定方法的建立

【摘要】目的 建立小鼠冷冻胚胎和精子SNP(Single-Nucleotide Polymorphism)分型方法,用于冷冻胚胎和精子快速遗传鉴定方案。方法 本研究以中科院上海实验动物中心（国家啮齿类实验动物种子中心上海分中心）提供的小鼠冷冻胚胎和精子为样本,采用全基因组扩增技术和PCR-LDR分型技术建立小鼠冷冻物SNP遗传鉴定方法。结果 全基因组扩增技术能大幅度增加冷冻胚胎样本的DNA总量;PCR-LDR分型方法适用于小鼠全基因组45个SNPs的分型;分型确定C57BL/6, BALB/c, FVB/NJ 等胚胎和精子各10种近交系,SNP位点信息与测序结果一致;小鼠冷冻胚胎个数与SNPs检出个数成正比,当胚胎数达到12以上时SNP检出率100%。结论 实现近交系小鼠冷冻胚胎和精子快速SNP基因分型,及遗传质量鉴定。     

北京市大鼠、小鼠、豚鼠的病理学调查

目的实验动物的健康状况对科学研究的发展有重要的影响,为了保证实验用鼠的健康质量,自从2009年起本实验室对北京市多家实验动物单位的实验用鼠进行了病理学抽检,从病理学的角度来调查北京市部分实验鼠的主要脏器的情况。方法我们主要对实验鼠的心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠进行取材,通过甲醛固定,石蜡切片HE染色、冰冻切片油红"O"染色、PAS染色等方法对实验用鼠进行病理学分析。结果根据病理学的调查结果,部分实验动物在以肝脏和肾脏为代表的器官中出现了不同程度的病变。结论结合对实验鼠的微生物学检测,分析认为,北京市的啮齿类实验动物中几乎无细菌、病毒和寄生虫等病原微生物的阳性感染个体,对人、动物及周围环境无明显危害;但是少部分实验鼠在临床上出现一定程度的病理学异常。     

高表达人源Her2乳腺癌小鼠模型的建立及鉴定

目的 构建并鉴定高表达人源Her2乳腺癌转基因小鼠模型.方法 构建pMD18T-MMTV-huHER2-EGFP转基因构件,通过原核显微注射方法将线性化、纯化后的外源质粒pMD18T-MMTV-huHER2-EGFP注射入C57BL/6J小鼠受精卵中,胚胎移植至同期发情的假孕受体母鼠输卵管内,获得子代小鼠.采用PCR鉴定子代小鼠尾部组织基因组DNA,用蛋白质免疫印迹法检测乳腺组织Her2蛋白的表达,通过组织病理学切片观察转基因小鼠乳腺组织的病理学变化.结果 经PCR方法检测得到转基因阳性小鼠.蛋白质免疫印迹结果显示,与野生型小鼠相比,F2代阳性小鼠的乳腺组织中Her2蛋白高表达.病理组织切片表明25周龄阳性小鼠的乳腺组织已经出现明显的癌变倾向.结论 高表达人源Her2乳腺癌小鼠模型成功建立并能稳定遗传,可自发形成乳腺癌,其生物学特性和病理学改变与人乳腺癌相近,可作为研究乳腺癌发生发展的动物模型.     

鼠抗人hMIC-l单克隆抗体抑制裸鼠移植人胰腺癌体内研究

目的初步研究鼠抗人hMIC-l单克隆抗体对胰腺癌体内给药的抗肿瘤活性,为hMIC-l抗体应用于肿瘤治疗提供实验依据。方法 2种人胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990各腋窝皮下接种24只Balb/c裸鼠,共计48只皮下接种荷瘤裸鼠分别随机共分为8组,每组6只荷瘤鼠。模型对照组荷瘤裸鼠腹腔注射0.9%氯化钠注射液(10 mL/kg,NS,Biw,ip×8),阳性对照组荷瘤裸鼠腹腔注射键择(50 mg/kg,qw,ip×4),鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组分别荷瘤鼠尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体(10 mg/kg,Biw,ip×8)共4周或(2 mg/kg,Biw,ip×8)共4周。观察荷瘤裸鼠日常表现、肿瘤生长、实验后肿瘤组织切片HE染色后光镜下的组织形态学改变。结果荷瘤裸鼠尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组裸鼠(10 mg/kg,Biw,iv×8)肿瘤生长缓慢,瘤体明显小于模型对照组,并呈现量效关系。镜下观察鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组实验后肿瘤组织切片胰腺结构破坏,有大量淋巴细胞浸润,肿瘤细胞明显坏死,细胞溶解。结论尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体(10 mg/kg,Biw,iv×8)能有效抑制裸鼠移植人胰腺癌PANC-1肿瘤生长,使瘤组织坏死、结构破坏。     

Duchenne型肌营养不良小鼠模型鉴定及干细胞移植后dystrophin的变化

目的 建立Duchenne型肌营养不良(DMD)模型dko小鼠的鉴定方法,评估干细胞移植后dystrophin的再生水平.方法 采用SSP-PCR方法鉴定杂合子鼠交配产生的子代鼠的基因型.生化分析仪测定dko小鼠血浆肌酸激酶含量,HE染色观察肌肉组织学变化.扩增人脐带间充质干细胞并注射到dko小鼠后肢肌肉,2个月后免疫荧光染色法检测dystrophin的表达.结果 杂合子鼠交配可以产生三个基因型的子代鼠,21.2%的子代鼠可以鉴定为dko小鼠的基因型(285 bp).dko小鼠显示了肌营养不良的症状,血浆肌酸激酶含量高达(16,988.52±617.48)IU/L,典型的病理变化包括肌纤维大小不一,多见核中移细胞,结缔组织增生或炎性细胞浸润.将人脐带间充质干细胞注射到dko小鼠后肢肌肉,2个月后可检测到人dystrophin的表达.结论 采用SSP-PCR可用于鉴定dko小鼠基因型,dko小鼠是研究干细胞治疗DMD的理想动物模型.     

NOD 小鼠胰岛的分离及其在体内外的生物学特性

目的 建立分离纯化非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠胰岛的方法,并对其体内外生物学特性进行研究?方法 采用改良的胶原酶消化结合Ficoll 密度梯度离心方法,分离纯化NOD 小鼠胰岛?应用体外糖刺激实验检测分离纯化的胰岛功能,以及通过监测移植小鼠的血糖?体重变化及糖耐量实验对移植胰岛的体内生物学功能进行分析,并通过HE 染色和免疫荧光染色检测肾被膜下移植胰岛的存活情况?结果 胰岛产率为(116 ±12)个胰岛/胰腺,纯度>90%?体外糖刺激实验结果显示,NOD 小鼠胰岛的糖刺激胰岛素释放水平明显低于KM 小鼠胰岛?胰岛移植实验显示,移植胰岛能有效改善糖尿病小鼠的血糖?体重和糖耐量,但改善作用一般仅能维持2 周左右?HE 染色和免疫荧光染色结果显示,肾被膜下可见胰岛素阳性的胰岛细胞团,并且在残存的移植胰岛细胞团周围存在大量淋巴细胞浸润?结论 通过改良的小鼠胰岛分离方法可由NOD 小鼠分离得到大量较高纯度的胰岛,可用于今后探索如何阻断自身免疫损伤保护移植胰岛的研究?     

两种固定液对肺组织固定效果的比较

目的:比较Bouin和10%甲醛两种固定液对正常肺组织的固定效果。方法:取正常小鼠肺组织,分别用Bouin和10%甲醛两种固定液,按料液比1∶20固定24 h,常规制备肺组织石蜡切片,HE染色;光镜下分别在100倍和400倍比较两种切片的组织结构和染色情况并统计高倍镜下清楚细胞数;应用t检验进行统计分析。结果:Bouin固定的肺组织在低倍镜下见解剖结构无分离,组织着色均匀,细胞内外结构清晰,高倍镜下支气管上皮细胞核与质界限分明,Ⅰ型、Ⅱ型肺泡细胞清晰且易于辨别;10%甲醛固定的肺组织切片染色后,在低倍镜下观察效果与Bouin固定的肺组织切片无显著差异,高倍镜下支气管上皮细胞核与质界限不清,Ⅰ型、Ⅱ型肺泡细胞结构模糊,经t检验两者差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Bouin固定的肺组织其HE染色效果较好,为肺组织切片的制备提供参考。     

黄岑苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的影响

目的观察不同浓度黄岑苷(baicalin)对实验性自身免疫脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠模型的作用,并研究其初步机制。方法建立实验性自身免疫性脊髓炎小鼠模型,免疫后第3天给予高低剂量黄岑苷灌胃,每天1次,共20 d。对小鼠活动进行神经功能评分,TUNEL染色检测脊髓组织细胞凋亡情况,ATP水平检测试剂盒检测脊髓组织ATP含量水平,免疫印迹法(Western blot)检测Bax、Bcl-2、cleaved cas-9和cleaved cas-3蛋白表达水平。结果黄岑苷能够提高实验性自身免疫脑脊髓炎小鼠神经功能,延后发病时间;黄岑苷干预后,Tunel染色结果显示脊髓组织凋亡细胞数下降,ATP水平下降,免疫印迹法结果显示Bcl-2的蛋白表达显著上升,Bax、cleaved cas-9和cleaved cas-3的蛋白表达显著下降。结论黄岑苷可通过抑制线粒体内源性凋亡途径抑制细胞凋亡,保护线粒体,提高实验性自身免疫脑脊髓炎小鼠神经功能,为预防疾病提供了实验理论依据。     

芪仙汤对支气管哮喘小鼠肺组织FIZZ1 mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察芪仙汤对哮喘小鼠肺组织中FIZZ1基因及蛋白表达水平的影响,探讨芪仙汤治疗哮喘的作用机制。方法:选用30只健康雌性BALB/c小鼠,采用随机数字表分为正常对照组(对照组)、支气管哮喘模型组(模型组)、芪仙汤治疗组(治疗组)。除对照组外均采用卵白蛋白(OVA)建立支气管哮喘小鼠模型。各组分别相应干预灌胃2周。从小鼠的一般情况、肺组织病理形态学(HE染色病理切片)指标评价支气管哮喘小鼠模型;采用RT-PCR检测肺组织FIZZ1基因mRNA表达水平,Western blot和免疫组化法检测肺组织FIZZ1蛋白表达水平。结果:HE染色结果显示,模型组小鼠肺组织较正常组嗜酸性粒细胞等炎症细胞浸润明显,气道壁及支气管平滑肌增厚明显;治疗组哮喘病理改变明显改善。RT-PCR、Western blotting、免疫组化结果均显示模型组FIZZ1表达水平显著高于对照组,治疗组小鼠肺组织中FIZZ1表达水平明显低于模型组,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:芪仙汤可能是通过下调小鼠肺组织FIZZ1表达起到治疗支气管哮喘的作用。     

三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响

目的对比三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响,优选大、小鼠肠道组织切片固定液。方法选择三种常用的固定液:10%中性福尔马林固定液,Bouin’s固定液,改良Davidson’s固定液,对SD大鼠和KM小鼠小肠组织进行固定,常规制作石蜡切片、HE染色,对比观察其染色效果。结果三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量存在影响,单纯福尔马林固定的切片存在肠粘膜上皮脱落、坏死的假象;Bouin’s固定液和改良Davidson’s固定液则可避免这一假象的出现,而且切片结构更精细、清晰,但是,HE染色的色彩不如单纯福尔马林固定液的鲜艳。结论 Bouin’s固定液和改良Davidson’s固定液固定的大、小鼠肠道组织的石蜡切片质量优于10%中性福尔马林固定液。