胎盘生长因子对培养的人脐静脉内皮细胞分泌炎性因子的影响

目的 观察胎盘生长因子(placental growth factor, PlGF)对血管内皮细胞分泌炎性因子的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(human umibilical vein endotheial cells, HUVEC),并采用ELISA技术来观察0～50 ng/mL的重组人PlGF(rhPlGF)作用不同时间(4～48 h)对HUVEC分泌单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1, MCP-1)、可溶性血管细胞黏附分子-1(soluble vascular-cell adhesion molecule-1, sVCAM-1)及P-选择素(P-Selectin)功能的变化.结果 rhPlGF对HUVEC分泌MCP-1的刺激作用具有一定的时间及剂量依赖关系,以50 ng/mL的PlGF作用48 h的作用最为明显(P<0.05).与对照组相比,作用于HUVEC 4 h,5～50 ng/mL的PlGF均能明显增加P-Selectin的分泌.但是,不同浓度的rhPlGF处理不同时间,HUVEC分泌sVCAM-1的量与相应时间对照组比较,差异均无统计学意义.结论 PlGF对HUVEC分泌MCP-1及P-Selectin等有明显的促进作用.提示PlGF对内皮细胞分泌炎性因子功能的影响可能很复杂.     

建立骨质疏松山羊模型初探

为了建立一个方便、经济、有效的绝经后骨质疏松大动物模型，本文选用了雌性成都山羊１０只，５只为对照组，５只被切除双侧卵巢（ＯＶＸ）；动态观察术后６０天，１２０天和１８０天髂骨骨活检组织的病理形态学变化；术后９０天、１８０天血清骨钙素（ＢＧＰ）的变化，以及术后１８０天长骨的骨密度、长骨整体骨弯曲结构力学性能和皮质骨骨试件的弯曲、压缩、拉伸材料力学性能的改变。结果显示：在整个研究过程中，对照组的骨组织结构维持相对稳定，而ＯＶＸ组在术后６０天即出现轻度骨小梁减少，术后１２０天到１８０天，骨小梁数量进一步减少，宽度变薄，骨小梁间距扩大，呈典型的骨量减少病理学改变。在ＯＶＸ组中，血清ＢＧＰ术前术后无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。术后１８０天相应各长骨的骨密度、断端骨组织厚度、整体骨弯曲破坏荷载与弹性模量明显低于对照组（Ｐ＜０．０５）；除股骨外，各长骨整体骨的弯曲极限强度以及骨试件的弯曲、压缩、拉伸的极限强度和弹性模量明显低于对照组（Ｐ＜０．０５）。本实验结果提示切除双侧卵巢雌性山羊可能是研究绝经后骨质疏松的经济而有效的大动物模型。     

雌激素对低切应力作用下内皮细胞基因表达谱的影响

目的 研究雌激素对低切应力作用下人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响，探讨雌激素对内皮细胞保护作用的机制。方法 用含4096点的cDNA芯片高通量、大范围、高效率地检测经17β-雌二醇(10^-7mol／L)孵育48h后再行低切应力(4．20dyne／cm^2，2h)作用后的人脐静脉内皮细胞的基因表达谱情况。结果 先用雌激素孵育再行低切应力处理的内皮细胞与未经任何处理的对照组比较，共有384条基因出现差异表达，约占芯片基因总数的0．094％。其中226条基因表达增加，158条基因表达下降。在表达上调的基因中其转录产物涉及PGI2合成、单核／巨噬细胞的吞噬作用等；在表达下调的基因中其转录产物涉及纤维蛋白原的降解、原癌基因产物的生成等。结论 生理浓度的雌激素对损伤内皮细胞有保护作用，其机制涉及到多种基因的调节。     

力学刺激对3月龄骨质疏松大鼠成骨细胞增殖与合成功能的影响

探讨周期性双轴力学应变对成骨细胞增殖与分化合成功能的影响。将正常 3月龄雌性 SD大鼠和骨质疏松大鼠颅顶骨分离的成骨细胞分别在含 10 %胎牛血清的 F- 12培养液中培养 ,并接种在双轴力学应变装置中。当细胞生长至亚融合状态 (Subconfluence) ,给细胞施加力学刺激 ,频率为 1Hz,力学刺激分别为 4 0 0、10 0 0、4 0 0 0μ strain;作用时间分别为每天 30 m in,2、4、8h,共加载两天。以未受力学刺激的细胞为对照组 ,受力学刺激的细胞为实验组 ,并进行比较。采用流式细胞技术测定细胞增殖变化 ;采用同位素标记方法检测成骨细胞骨钙素、I型胶原 C端前肽 (PICP)和总蛋白的分泌量。结果表明 :1)在静态培养条件下 ,3ovx组与 3control组比较 ,其细胞功能活性无明显变化 ,但 3ovx组大鼠成骨细胞增殖活性明显增高 ,这与绝经后骨质疏松骨代谢的高转换率相一致。 2 )4 0 0、10 0 0 μstrain力学刺激可以促进 3control组成骨细胞 I型胶原、骨钙素和总蛋白的分泌量增加 ,促进成骨细胞的分化成熟 ;在 10 0 0μstrain力学刺激下 ,成骨细胞合成骨基质的能力增加最为明显。同时 ,在 4 0 0、10 0 0μstrain力学刺激的初期也可以促进成骨细胞的增殖 ,而促进成骨细胞的分化成熟的作用大于促进细胞增殖的作用。 3)在4 0 0 0 μ     

去势雌山羊骨组织形态学变化的动态观察

采用骨组织病理学方法对去势雌山羊骨组织结构变化进行动态观察。１．５岁左右雌性成都山羊１０只，平均体重２２ｋｇ左右，随机分为对照组５只，双侧卵巢切除组５只。术前，术后６０天，１２０天和１８０天分别取髂前上嵴骨活检组织作病理组织形态学观察。结果显示：在整个研究过程中对照组的骨组织结构维持相对恒定，而双侧卵巢切除组在术后６０天则出现轻度骨小梁数量减少，相互连接分离；术后１２０天到１８０天骨小梁数量进一步减少，骨小梁变细小，宽度降低，出现钮扣样变，骨髓腔扩大，呈典型的骨量减少的病理学改变。本实验结果为骨质疏松模型的进一步研究提供了实验资料     

卵巢切除术对山羊骨骼生物力学的影响

绝经后骨质疏松是中老年妇女的常见病,绝经后的骨丢失与松质骨结构破坏有关,从而导致骨的力学强度降低,易发骨折,目前绝经后骨质疏松的病因尚十分不清楚。我们采用山羊去势手术,建立骨质疏松模型,在术后不向阶段,测定双光子好密度、观察骨的微观结构并测定各种骨的力学参数。结果显示：术后90天骨小梁轻度降低并在180天时有进一步下降,督小梁厚度显著变薄;骨矿密度在术后90天显著降低,但对照组及手术组其后在均表现升高,这可能与体重增加有关;骨的力学参数中,股骨整体骨王点弯曲的破坏荷载和极限强度进行性下降,在180天最低。…     

体外诱导羊膜上皮细胞转分化为雌性生殖细胞的初步实验研究

目的 建立体外分离、培养人羊膜上皮细胞(hAECs)的方法,研究其向雌性生殖细胞转分化的潜能。 方法 体外分离、培养并鉴定hAECs后,采用添加5%人卵泡液的培养基作为诱导剂,倒置显微镜下观察细胞形态的改变,化学发光免疫技术检测培养基中雌二醇(E₂)含量的变化,应用实时荧光定量PCR (RT-PCR)、Western blot等方法检测雌性生殖细胞相关基因及蛋白表达水平的变化。 结果 体外培养hAECs呈多角形,具有上皮细胞特有的铺路石样外观,并表达其特异性细胞角蛋白19(CK19),同时能表达胚胎干细胞(ESC)特异的转录因子POU5f1转录因子4(Oct-4)。采用添加5%人卵泡液的培养基诱导14 d后,对照组大部分细胞仍保持上皮细胞的多角形态,而诱导组细胞融合呈集落样生长。E₂含量检测结果显示,对照组无E₂生成,而诱导组E₂水平从第8 d开始增加,至第10 d达到高峰,然后下降。RT-PCR、Western blot结果表明,诱导组生殖细胞特异性基因生长分化因子9(GDF9)、无精症缺失基因(DAZL)的mRNA表达水平明显升高(P<0.05),而联会复合体蛋白3(SCP3)的mRNA表达水平无明显升高(P>0.05),DAZL的蛋白表达水平亦明显增加(P<0.05)。 结论 人卵泡液可在体外诱导hAECs向雌性生殖细胞方向转分化。     

过表达miR-130a-3p对心肌细胞肥大的缓解作用研究

本研究旨在探索miR-130a-3p对心肌细胞肥大的作用及其可能机制。通过胸主动脉缩窄法(TAC)构建压力超负荷所致心肌肥厚小鼠模型。使用去甲肾上腺素(NE)刺激SD乳鼠原代心肌细胞(NRCMs)及H9c2大鼠心肌细胞系,诱导这两种心肌细胞发生肥大表型转变。检测miR-130a-3p的表达变化,并进一步探索其对心肌细胞肥大是否有调控作用。结果表明,miR-130a-3p在肥厚心肌组织、肥大NRCMs及H9c2细胞中的表达均明显降低。给予miR-130a-3p mimics使其过表达后,H9c2细胞中肥大标志基因心房利钠肽(ANP)、脑利钠肽(BNP)和肌球蛋白重链β(β-MHC)的表达较对照组(mimics N.C.+NE组)明显下调,且细胞面积明显减小。而给予miR-130a-3p inhibitor抑制其表达后,肥大心肌细胞中ANP、BNP、β-MHC的表达进一步上升,且细胞面积进一步增加。Western blot检测发现,过表达miR-130a-3p后心肌细胞中磷酸化Akt和磷酸化mTOR的表达水平下调。以上结果提示,miR-130a-3p mimics可缓解心肌细胞肥大的程度;其inhibitor则可使心肌细胞肥大进一步加剧。过表达miR-130a-3p可能通过影响Akt通路来缓解H9c2心肌细胞肥大的程度。     

具有高同位素丰度氘标记的洛沙坦及5-羧酸洛沙坦的合成

设计合成非肽类血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂洛沙坦及其活性代谢物5-羧酸洛沙坦的药物标准品——含4个氘原子标记的洛沙坦和5-羧酸洛沙坦。以氘标记对溴甲苯（1）为起始原料,与4′,4-二甲基-2-（2′-甲氧基苯基）噁唑（2）发生格氏反应引入氘原子,再经氧化、取代反应得4个氘原子标记的中间体5,中间体5与2-正丁基-4-氯-5-甲酰基咪唑（6）发生缩合反应得中间体（7）,中间体7经叠氮化钠作用得氘标记洛沙坦（10）;四丁基溴化铵（8）与高锰酸钾反应可制得氧化剂高锰酸四丁基铵（9）,化合物10经氧化剂（9）氧化得到氘标记5-羧酸洛沙坦（11）。目标化合物10和11的总产率分别为15.4%和8.2%,纯度经HPLC测定分别为99.4%和96.4%,通过¹H NMR、MS可测得其同位素丰度分别为98.4%和98.3%。