中低温停循环经下腔静脉逆灌对猪肠系膜微循环的影响

目的 观察中低温下半身停循环时经下腔静脉(IVC)逆行灌注方法对猪肠系膜微循环变化的影响.方法 选择健康小型猪20只,随机分为A、B两组(n=10).两组均在体外循环(ECC)下肛温降到28℃时停循环60 min,同时经右无名动脉行顺灌脑保护.A组单纯下半身停循环.B组停循环同时联合经IVC逆灌行腹腔脏器保护,灌注压力...     

血管内皮生长因子在大鼠实验性关节炎模型中表达的动态观察

目的：观察血管内皮生长因子（VEGF）在大鼠实验性关节炎模型中的表达，探讨VEGF在类风湿关节炎（RA）发病机制中的作用。方法：30只雄性Wistar大鼠采用皮下注射Ⅱ型胶原的方法诱导实验性关节炎模型，并随机分为6组，每组5只。致敏1、2、3、4、5、6周后分别将各组动物处死，采用免疫组织化学方法对组织中表达的VEGF进行观察，并采用计算机图像分析的方法对各时期VEGF的表达量进行定量分析。结果：大鼠在接受胶原致敏后2周左右发病，滑膜组织中的VEGF蛋白的分泌与炎症发展密切相关。结论：VEGF参与了实验性关节炎滑膜血管翳的形成过程，在RA的发病机制中具有重要意义。     

hvrdC基因表达水平对胃癌细胞SGC-7901增殖影响的实验研究

目的 观察胃癌SGC-7901细胞株中hyrdC基因的不同表达水平对细胞增殖的影响.方法 分别将已构建的携带hyrdC基因的Ad-hyrdC重组腺病毒和靶向抑制hyrdC基因表达的AdshyrdC重组腺病毒,转染人胃癌SGC-7901细胞株,同时设空病毒Ad-null组和正常对照组,利用绘制生长曲线法和MTT法观察各组间胃癌细胞增殖的差异;将各组胃癌细胞接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型,比较各组胃癌细胞瘤体生长率的差异.结果 Ad-hyrdC组胃癌SCC-7901细胞增殖显著快于Ad-shyrdC组、Ad-null组和正常对照组,48 h后细胞数与Ad-shyrdC组、Ad-null组和正常对照组比较有统计学差异(P<0.05):Ad-shyrdC组胃癌SCC-7901细胞的光吸收值明显低于Ad-hyrdC组、Ad-null组和正常对照组(P<0.05):Ad-shyrdC组瘤体生长率较Ad-hyrdC组、Ad-null组以及正常对照组明显减慢(P<0.05),Ad-hyrdC组瘤体生长率较Ad-shyrdC组、Ad-null组以及正常对照组明显加快(P<0.05).结论 hyrdC基因具有促进胃癌细胞生长的功能,而靶向沉默hyrdC基因表达可抑制胃癌细胞的生长,hyrdC基因有望成为胃癌基因治疗领域的新靶点.     

细胞性心肌成形术研究进展

许多基本的心血管疾病发展到晚期会演变为充血性心力衰竭 ,尽管治疗手段已有了明显进步 ,但充血性心力衰竭仍然是一个主要并且将继续为人类关注的健康问题。充血性心力衰竭可使具有完整舒缩功能的心肌细胞数量减少 ,心肌结构完整性遭到破坏。心脏移植治疗终末期心力衰竭是金标准 ,但供体的不足限制了其临床广泛应用 ,就需要其它新方法来替代以挽救丧失的心肌细胞。细胞性心肌成形术被证明是一种行之有效的替代治疗方法。细胞性心肌成形术就是将包括自体心肌细胞在内的不同类型的细胞移植到宿主心肌组织中加固其结构和改善其功能。最近研究发现胚胎干细胞和成体干细胞均可以向心肌细胞方向分化。自体骨骼肌成肌细胞、内皮祖细胞等其它类型细胞同样成功地在宿主受损心肌组织中存活并增殖分化 ,改善宿主心脏功能。这里对目前细胞性心肌成形术的移植细胞类型作一综述。     

肝细胞生长因子抑制慢性缺血性心脏病心肌纤维化及心肌细胞凋亡的实验研究

目的:研究肝细胞生长因子（HGF）抑制慢性缺血性心脏病心肌纤维化及心肌细胞凋亡的作用。方法: 采用磷酸钙/DNA-TPC方法构建携带HGF基因的重组腺病毒(Ad.HGF)。经18只小型猪的左胸冠状动脉回旋支放置Ameroid环建立慢性心肌缺血猪动物模型,并随机分为3组即盐水组、AdHGF组和缺陷型空病毒Ad5(AdNull)组,每组6只(n=6)。于缺血心肌处,分别注射4×109 pfu 200 μl AdHGF、4×109 pfu 200 μl AdNull及200 μl盐水。4周后做超声心动图检查各组的心脏功能,并行病理学心肌纤维化、心肌凋亡检测。结果: 心脏彩超检测显示,AdHGF组室壁增厚,运动增加,左室舒张末容积（LVEDV）、左室射血分数（LVEF）及短轴缩短率（FS）等明显改善(P<0.05)。AdHGF组心肌组织切片缺血坏死区纤维组织增生明显低于AdNull组(P<0.05)。AdHGF组心肌中Ⅲ型胶原蛋白的量明显低于AdNull组(P<0.05)。AdHGF组心肌细胞的凋亡率(%)明显低于对照组(P<0.05)。结论: HGF具有抑制慢性缺血性心脏病心肌纤维化及心肌细胞凋亡的作用,从而可抑制心室重构和改善心功能。     

动态三维超声心动图评价基因转染骨髓基质细胞移植治疗慢性缺血心肌实验研究

目的评价动态三维超声心动图(DTDE)对基因转染骨髓基质细胞(BMSCs)移植治疗慢性缺血心肌研究价值.方法在猪冠脉左旋支放置Ameroid环建立慢性心肌缺血模型;4周后分组注射编码血管生长素(ANG)基因腺病毒(Ad)转染的自体BMSCs(Ⅰ组)、编码ANG基因的Ad(Ⅱ组)、单纯BMSCs(Ⅲ组)和空Ad磷酸盐缓冲液(Ⅳ组).再4周后行病理学检查.分别于正常状态、置环后4周和注射后4周开胸时采集二维图像,应用TomTec 4D cardio-view软件进行三维重建和分析,观测各时期左室形态、侧后壁(LPW)回声和运动、左室舒张和收缩末期容积(LVEDV, LVESV)和射血分数(LVEF)变化.结果慢性心肌缺血模型均出现左室重构和LPW室壁运动减弱、回声增强,LEDV明显增大,LVEF明显降低(P＜0.01).注射后4周, Ⅰ～Ⅲ组均不同程度出现左室重构现象减轻,LVEDV缩小(P＜0.05),LVEF增大(P＜0.05),其中以Ⅰ组治疗效果最好,侧后壁室壁回声减弱,运动增强(P＜0.05).Ⅳ组与缺血时无明显差异(P＞0.05).结论 DTDE对评价基因转染细胞移植治疗慢性缺血心肌具有重要应用价值.     

NF-κB在早期心肌缺血-再灌流损伤中的作用

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)在心肌早期缺血-再灌流损伤中的作用.方法将18只山羊随机分为单纯体外循环(CPB)组、缺血-再灌流(IR)组、缺血-再灌流加特异性NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)组.建立山羊CPB模型,心脏行缺血60 min,恢复血流-再灌流90 min,PDTC组在心肌缺血前应用PDTC(100 mg/kg).于心肌再灌流后,测量血流动力学数据及测定局部心功能,并应用TUNEL染色检测心肌细胞凋亡数量,同时采用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法检测心肌组织中NF-κB的含量.结果缺血-再灌流能引起典型心肌缺血损伤的组织学改变,IR组NF-κB在缺血心肌组织中大量激活,心肌组织中NF-κB的活性水平显著高于CPB组(P＞0.05);而PDTC组再灌流60、90 min后,NF-κB的核转录活性明显减弱,显著低于IR组(P＜0.05);原位末端标记表明,IR和PDTC组中心肌细胞凋亡指数分别为(11.2±0.4)%和(6.4±0.2)%,心肌损伤显著减轻(P＜0.05).结论核转录因子-κB在心肌早期缺血-再灌流损伤中起重要作用,PDTC通过抑制NF-κB的核转录活性,从而减轻了心肌缺血-再灌流损伤.     

肝细胞生长因子抑制慢性缺血心肌细胞纤维化及凋亡的实验研究

我们采用携带肝细胞生长因子(HGF)基因重组腺病毒(AdHGF)干预猪慢性缺血性心肌模型,研究HGF改善缺血性心脏病心脏功能的重要机制,探讨其抑制缺血心肌细胞纤维化及凋亡的作用. 一、材料与方法 1.材料:相同遗传背景的实验用贵州小型香猪18只,体质量(30±5)kg,雌雄不拘(第二军医大学动物实验中心提供).术前禁食、禁水24h以上.     

表达大鼠caspase-3 siRNA腺病毒的构建及其对神经元凋亡的影响

目的 构建表达大鼠caspase-3 siRNA腺病毒,体外观察其抑制内毒素诱导神经元凋亡的效果.方法 合成正、反义寡核苷酸并克隆入pShuttleH1载体,与含caspase-3及绿色荧光增强蛋白序列的质粒pEGFPC1-Cas3共转染293细胞,流式细胞仪分析荧光强度;pShuttleH1-siCas3线性化后转化到含pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中获取重组质粒,脂质体转染293细胞获取重组腺病毒Ad-siCas3;TCIDs.法测定病毒滴度;感染海马神经元,观察内毒素诱导神经元caspase-3 mRNA的表达及凋亡情况.结果 目的基因序列正确,pShuttleH1-siCas3可明显减弱pEGFPC1-Cas3绿色荧光,Ad-siCas3滴度为1.06×1010 pfu/ml.转染病毒的海马神经元内毒素诱导的凋亡效应及caspase-3 RNA的表达明显减弱.结论 成功地构建了表达大鼠caspase-3 siRNA腺病毒,具有良好的抑制神经元凋亡作用.     

窦房结细胞自体移植治疗完全性房室传导阻滞

目的 探索窦房结细胞自体移植到右室前壁心肌内,治疗心脏术后完全性房室传导阻滞的可行性.方法 取健康杂种犬20只,随机分为移植组和对照组,每组10只.安置电子心脏起搏器后,获取移植组犬窦房结组织并制成细胞悬液,经荧光标记后注射到移植组自体右心室前壁心肌内.对照组窦房结行Van Gieson染色,并与心耳肌组织比较.对照组右心室相同部位注射等量培养液.两周后射频消融希氏束,建立完全性房室传导阻滞动物模型,并进行心脏电生理研究.对移植组犬经股静脉应用异丙肾上腺素,研究心律变化.结果 急性分离的成年犬窦房结细胞多为长梭形,细胞活性好.获取的窦房结组织行Van Gieson染色后可见其典型结构特征.建立完全性房室传导阻滞犬模型1 h后,移植组心率高于对照组(P＜0.05),且此室性自主心律起源于细胞移植部位.注射异丙肾上腺素后,移植心室律变化明显(P＜0.05).结论 成年犬窦房结细胞移植到自体右室前壁心肌内,能够提高完全性房室传导阻滞后的心室律,并对异丙肾上腺素具有良好的反应性.