实验性关节炎大鼠血浆肿瘤坏死因子-α和滑膜血管内皮生长因子表达相关性分析

目的　同步观察实验性关节炎大鼠不同时间点的血浆肿瘤坏死因子 α (TNF α)含量与滑膜内皮生长因子 (VEGF)表达变化 ,探讨TNF α和VEGF在类风湿关节炎 (RA)发病机制中的作用及其相关性。方法　采用Ⅱ型胶原与完全福氏佐剂诱导SD大鼠实验性关节炎 (CIA)模型 ,同步检测CIA大鼠不同时间点的血浆TNF α含量和滑膜组织VEGF的表达水平 ,并同时观察其发病时间与滑膜新生血管形成、关节炎指数积分以及TNF α和VEGF之间关系。用直线相关分析法分析TNF α与VEGF之间的关系 ,用等级相关分析法分析关节炎指数积分与VEGF及TNF α之间的关系。结果　随着CIA发病时间的延长 ,滑膜新生血管逐渐增多 ,滑膜增厚 ,关节炎指数积分逐渐增加 ,TNF α含量和VEGF水平也随之升高 ;其关节炎指数积分与VEGF表达水平呈正相关关系 (r =0 5 35、P <0 0 5 ) ,与TNF α含量虽有相关增高趋势 ,但差异无显著性 (r =0 371 ,P >0 0 5 )。血浆TNF α含量与VEGF表达水平呈显著正相关关系 (r =0 893,P <0 0 1 )。结论　TNF α与VEGF在RA炎症反应 ,滑膜新生血管形成的细胞因子网络中起重要作用 ,二者可能具有互相影响 ,相互促进 ,充当恶性网络循环的调控作用 ;是介导RA发生和发展以及骨质侵蚀、致残的众多因子中的关键因子。     

低氧诱导因子-1α在大鼠胶原诱导性关节炎中的表达及与血管生成的关系

目的制备牛Ⅱ型胶原诱导性大鼠关节炎(CIA)模型,探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)在类风湿关节炎(RA)组织中的动态表达及其相关性作用。方法 50只SD大鼠,随机分为对照组与模型组。建立CIA模型,动态观察各项关节炎活动指标,于造模21、28、35、42d取踝关节行HE染色及HIF-1α、VEGF免疫组化染色,分析两者在CIA中的相关性及与关节炎活动指标、滑膜病理学评分之间的关系。结果 CIA大鼠关节滑膜层和滑膜下层均表达HIF-1α、VEGF,第21天阳性表达量最高,随病程进展,表达逐渐下降,与滑膜病理学评分、滑膜增生评分及血管生成评分呈显著正相关,与炎症浸润评分无明显相关。结论Ⅱ型胶原可成功诱导大鼠关节炎模型。HIF-1α、VEGF在RA组织中的表达,与炎症严重程度呈明显正相关。HIF-1α可能通过调控一系列下游靶基因,如VEGF等,促进滑膜增生及血管生成,影响RA的发生、发展。     

JAK/STAT信号通路在大鼠类风湿关节炎模型发病过程中的表达

目的探讨JAK／STAT信号通路在大鼠类风湿关节炎（RA）发病过程中的表达及意义。方法48只雄性Wistar大鼠随机分为6组，对照组8只，其余均建立胶原诱导的关节炎（CIA）模型，分别在致敏后2、3、4、5、6周分批处死，应用苏木素-伊红（HE）染色、免疫组织化学及免疫印迹法检测发病不同时期滑膜组织的病理变化及P—STAT1、P—STAT3的表达。结果致敏后2周大鼠出现关节炎表现，HE染色可见滑膜组织增生及炎性细胞浸润；第4周关节肿胀达到高峰，病理显示典型血管翳形成；第6周部分软骨及骨组织受到破坏。在CIA发病过程中STAT1、STAT3均处于激活状态．与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。但二者表达存在时间上的差异．STAT3处于持续激活状态，而STAT1的激活只局限在疾病的中晚期。结论JAK／STAT信号通路参与了CIA的病理过程，针对性阻断JAK／STAT通路可能达到改善RA病理过程的目的。     

缺氧诱导因子-1α血管内皮生长因子在胶原诱导性关节炎滑膜中的表达及其与血管生成的关系

目的 探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α和血管内皮生长因子(VEGF)在类风湿关节炎(RA)血管生成中的作用.方法 建立大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型,采用苏木素-伊红(HE)染色评估滑膜病理血管生成、SP法免疫组织化学染色检测HIF-1α和VEGF的表达,动态观察HIF-1α表达与VEGF表达及血管生成之间的关系.结果 CIA大鼠滑膜HIF-1α及VEGF表达增加,且随发病时间的延长而逐渐增加,两者均与滑膜病理血管生成评分呈显著正相关,同时滑膜衬里层和衬里下层HIF-1α表达又与相应部位的VEGF表达呈显著正相关.结论 HIF-1α可能参与上调VEGF表达促进血管生成,从而在RA关节破坏中起一定作用.     

VEGF与TGF-β1在胶原诱导的RA大鼠滑膜组织中的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）和转化生长因子（TGF）-β1在类风湿关节炎（RA）发病中的作用,为RA的靶点治疗提供依据。方法采用皮下多点注射牛Ⅱ型胶原方法对18只Wistar大鼠建立RA模型（实验组）,同时选择10只Wistar大鼠皮下注射等量生理盐水作对照组,实验28d处死大鼠、收集滑膜组织,用免疫组化法检测两组VEGF蛋白与TGF-β1蛋白表达,RT—PCR技术检测VEGF mRNA、TGF-β1 mRNA水平。结果VEGF蛋白及TGF-β1蛋白阳性染色均主要位于滑膜衬里层和滑膜下层的滑膜细胞及血管内皮细胞,实验组滑膜VEGF、TGF-β1蛋白及mRNA表达均显著高于对照组（P均〈0．01）;VEGF mRNA与TGF-β1 mRNA表达呈正相关,r=0．481（P〈0．05）。结论VEGF和TGF-β1在RA滑膜增生、浸润及关节破坏中起协同作用,以两者为靶点的药物有望为RA治疗提供新思路。     

胶原诱导关节炎大鼠滑膜中血管内皮生长因子和内皮抑素的表达及意义

目的观察血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、内皮抑素（endostatin）在胶原诱导关节炎（CIA）大鼠不同时期滑膜中的蛋白表达，通过CD34给血管密度计数．明确生长因子在血管翳形成中的作用机制。方法建立CIA大鼠模型，测量关节体积，计算关节病理积分，并用免疫组织化学染色检测VEGF、bFGF、endostatin和CD34的蛋白表达。结果模型组大鼠滑膜VEGF和bFGF表达明显高于正常组大鼠（P〈0．01），并且二者表达存在相关性（P〈0．01），内皮抑素表达模型组与正常组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论滑膜中生长因子表达失衡在关节炎的形成及发展过程中起重要作用，促血管生长因子表达升高是导致滑膜新生血管形成的主要原因。     

羟氯喹对佐剂性关节炎大鼠滑膜血管内皮生长因子表达的影响

血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrouthfactor,VEGF)是类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis ,RA)滑膜血管翳形成过程中起关键作用的细胞因子 ,可特异性地作用于内皮细胞 ,促进滑膜新生血管的形成 ,增强血管通透性 ,导致RA滑膜组织的病理性改变。近十几年 ,羟氯喹 (hydroxy chloroquine,HCQ)作为改变病情的抗风湿类药用于临床 ,疗效较好 ,但其作用机制尚未完全阐明。本文通过建立佐剂性关节炎 (AA)大鼠模型 ,观察HCQ对AA大鼠滑膜组织中VEGF蛋白及mRNA表达的影响 ,阐明HCQ治疗AA的疗效及其作用机制。1　资料与方法1 1　动物…     

类风湿关节炎滑膜组织血管内皮生长因子转录和转录后的研究

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者血清、滑液及滑膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平，探讨其在RA致病中的作用。方法 应用双抗夹心酶联免疫吸附测定（ELISA)法分别测定RA患者血清、滑液中VEGF蛋白水平；采用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Northern blot检测滑膜组织VEGF mRNA表达水平。以骨关节炎(OA)病人及因外伤截肢的正常人作对照。结果 RA患者血清、滑液中VEGF蛋白水平显著高于对照组；RA滑膜组织VEGF mRNA表达水平也明显高于对照组。结论 RA患者滑膜组织VEGF的过度表达，引起血管增生，是引起RA发病的重要因素。     

Etanercept抑制BNX鼠-人RA移植物嵌合体模型中的滑膜增生和软骨侵蚀及降解

目的观察肿瘤坏死因子（TNF）-α拮抗剂Etanercept能否抑制类风湿关节炎（RA）的滑膜增生和软骨破坏，并探讨作用机制。方法将人RA滑膜和正常关节软骨移植到BNX小鼠皮下构建BNX鼠-人RA移植物嵌合体模型，造模4周后给予Etanercept（100μg）皮下注射，连续4周，对照组给予注射用水。评价移植物中的滑膜增生、滑膜细胞对软骨的侵蚀和软骨细胞周围软骨降解的组织学积分，并检测血清TNF-α含量，滑膜的TNF-α和人血管内皮生长因子（VEGF）的表达以及滑膜细胞凋亡情况。结果与对照组比较．Etanercept组中滑膜增生、软骨侵蚀、软骨降解积分以及血清TNF-α含量均显著降低：滑膜细胞的TNF-α和VEGF表达水平也显著下降。但滑膜细胞凋亡程度差异无统计学意义。结论Etanercept能抑制嵌合体模型中的滑膜增生和软骨侵蚀及降解。其作用机制除了中和滑膜组织和血液中的TNF-α外．还可能与下调滑膜细胞的VEGF表达有关。     

缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子在Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型中的致病作用

目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)在Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)模型中的致病作用.方法 选用50只SD大鼠(雌雄各半),建立CIA模型,分别于造模第21、28、35、42天取踝关节作HE染色及HIF-1α免疫组化染色,分析其在CIA中与关节炎活动指标,滑膜病理学评分之间的关系.结果 CIA大鼠关节滑膜层和滑膜下层均表达HIF-1α,第21天阳性表达量最高,随病程进展,表达逐渐下降,与滑膜病理学评分、滑膜增生评分及血管生成评分呈显著正相关.结论 HIF-1α在RA致病机制中发挥关键作用,可能是重要的治疗靶点.     

金雀异黄素对胶原诱导性大鼠成纤维样滑膜细胞分泌的血管新生相关因子的影响

目的 观察金雀异黄素(genistein)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节成纤维样滑膜细胞(FLS)分泌的血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶(MMP)-1、2、3、9的影响.方法 采用Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂(CFA)建寺CIA大鼠模型;每周进行一次关节炎指数(AI)评分;于造模第6周摄取关节X线片,选取大鼠关节进行关节滑膜组织病理检测:取出关节滑膜组织,用胶原酶消化法分离培养原代成纤维样滑膜细胞;流式法检测滑膜细胞血管细胞黏附分子(VCAM)-1的表达;在FLS培养中加入用不同浓度的金雀异黄素(100,200.400 μmol/L),间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测FLS培养上清中VEGF及MMP-1、2、3、9的表达.结果 Ⅱ型胶原和CFA共同致敏后3 d,大鼠开始出现关节肿胀,AI逐渐增高,于第3周时最明显,观察AI评分、关节X线以及关节滑膜组织病理发现,造模组与空白对照组比较差异有统计学意义.大鼠滑膜细胞培养至第4代,检测其VCAM-1的表达高达85.5%,提示所培养的细胞即为FLS.不同浓度的金雀异黄素(100,200,400μmol/L)和甲氨蝶呤(MTX,1 mg/L)作用于FLS后,FLS培养上清中VEGF和MMP-1、2、3、9的分泌受到抑制,且抑制作用强度与药物的浓度有关.结论 本实验使用Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂成功构建了CIA大鼠模型,用胶原酶消化法成功地分离并培养了原代大鼠成纤维样滑膜细胞.一定浓度的金雀异黄素能抑制CIA大鼠FLS分泌的VEGF和MMP-1、2、3、9,且抑制作用呈浓度依赖性.     

雷公藤多甙对胶原诱导关节炎大鼠的治疗作用及其作用机制

目的探讨雷公藤多甙对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)动物模型,胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠血清炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)、血管内皮生长因子(vascuoar endothelial cell growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-1、2、9表达的影响,及对成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)ERK信号转导通路的影响,研究雷公藤多甙治疗RA的可能机制。方法采用Ⅱ型胶原建立CIA大鼠模型;观察雷公藤多甙治疗后模型大鼠关节肿胀情况,用免疫组化法观察大鼠关节炎症及滑膜微血管密度;用Western blot法检测CIA大鼠血清IL-1β、TNF-α、VEGF、MMP-1、2、9的表达,并用胶原酶消化法分离培养正常大鼠及CIA大鼠原代FLS;用Western blot法检测不同浓度雷公藤多甙治疗后CIA大鼠FLS中ERK和p-ERK的表达。结果 CIA大鼠造模成功,雷公藤多甙治疗能降低CIA大鼠血清炎症因子及血管新生相关因子表达(P0.05);免疫组化结果显示雷公藤多甙能抑制CIA大鼠关节滑膜血管新生(P0.05);不同浓度雷公藤多甙对FLS中ERK蛋白表达无明显影响,但可降低FLS的p-ERK表达(P0.05)。结论雷公藤多甙对CIA大鼠抗炎及抑制血管新生的作用可能与调节ERK信号转导通路有关。     

沙利度胺对胶原诱导性关节炎大鼠血管内皮生长因子肿瘤坏死因子-α表达的影响

本研究通过建立胶原诱导型关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠模型.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学等方法,研究血管内皮生长因子(VEGF)及肿瘤坏死因子(TNF-α)在血清及滑膜中动态表达、细胞因子与关节炎症及滑膜微血管密度(MVD)相关性及沙利度胺对上述变化的影响,探讨不同剂量沙利度胺作用及可能机制,试图为沙利度胺在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)新靶点治疗--阻断血管生成方面提供实验依据.     

反义VEGF腺病毒的制备及其对类风湿关节炎滑膜细胞VEGF分泌的影响

目的 制备反义血管内皮生长因子（VEGF）腺病毒表达载体，为反义VEGF转基因治疗类风湿关节炎（RA）奠定基础。方法 采用基因克隆的方法制备高滴度的反义VEGF腺病毒，并将其感染培养的RA滑膜细胞，观察期对RA滑膜细胞分泌VEGF的影响。结果 成功制备了反义VEGF腺病毒，并观察到，在一定浓度范围内，反义VEGF腺病毒可以有效抑制RA滑膜细胞分泌VEGF，浓度越高，抑制效果越明显。结论 制备的反义VEGF腺病毒可以高效抑制RA滑膜细胞分泌VEGF，为探索RA的反义VEGF基因疗法奠定了基础。     

胶原诱导性关节炎大鼠滑膜基因表达谱的cDNA微阵列研究

目的研究胶原诱导性关节炎大鼠滑膜基因表达谱，探讨类风湿关节炎的发病机制。方法用含588个基因的大鼠基因表达谱芯片研究胶原诱导性关节炎及正常大鼠滑膜基因表达谱。结果胶原诱导性关节炎大鼠差异表达基因共有68个，上调基因有63个，下调基因有5个。结论胶原诱导性关节炎是一个涉及多基因表达异常的全身免疫性疾病，筛选到的差异表达基因将为进一步研究类风湿关节炎发病机制及防治提供重要线索。     

降植烷诱导大鼠类风湿关节炎模型的建立

目的 用降植烷(pristane)免疫Lewis大鼠诱导关节炎，建立类风湿关节炎(RA)动物模型。方法 采用组织病理学和X线摄片的方法观察大鼠的发病程度和病理特点。结果 大鼠关节炎发病率为62．5％，主要累及远端关节。关节炎症状呈慢性反复及进行性加重。关节X线摄片及病理显示关节滑膜增生、软骨组织及骨组织呈典型的关节炎病变。结论 Pristane诱导关节炎(PIA)大鼠模型与人类RA发病及病理特点极为相似，是研究RA较理想的模型。     

类风湿性关节炎中血管新生机制及临床价值

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性炎症性疾病,关节滑膜增生并形成关节翳是其重要特征；增生的滑膜需要更多的血供以满足其对氧气和营养物质的需求,因而血管新生在关节翳的形成和维持方面起着关键词性作用。鉴于关节翳是高度血管化的,针对RA中血管新生的方法可能会成为未来治疗RA的有效策略。在RA滑膜中有许多促血管新生因子表达,但血管内皮生长因子(VEGF)在RA的血管新生过程中具有中心地位能增加水肿程度,引起RA中的关节肿胀。在小鼠胶原诱导性关节炎中,用可溶液VEGF受体可以减轻疾病的严重程度、四肢肿胀和关节的破坏。     

血管内皮细胞生长因子在激素治疗兔关节炎模型过程中的基因表达

目的 通过观察激素治疗兔关节炎模型过程中滑膜组织内血管内皮细胞生长因子（VEGF）的基因表达，进一步探讨激素治疗关节炎的作用机制。方法 采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）方法检测激素治疗兔关节炎模型不同阶段[用脂多糖（LPS）后1h，用药后24h、3、7、14、21、28d]滑膜组织中VEGF基因的表达及变化。结果 在激素治疗关节炎的不同时期，VEGF基因表达的程度不同，激素对VEGF有明显的抑制作用。结论 激素通过对VEGF的抑制作用，减轻了关节炎的炎性反应。     

α黑素细胞刺激素对大鼠胶原性关节炎的保护作用

目的 观察α黑素细胞刺激素(α—MSH)对大鼠胶原性关节炎(CIA)发病过程的影响。方法 经牛Ⅱ型胶原(bcⅡ)诱导建立大鼠关节炎动物模型，随机分为4组：正常对照组，CIA对照组，α—MSH低剂量组和α—MSH高剂量组，每组8只，于致敏当天连续腹腔注射不同剂量的α—MSH或PBS，观察比较4组大鼠体重、足爪容积、关节炎指数、病理评分、X线放射学表现等变化。结果α—MSH可缓解大鼠关节炎症状，减轻滑膜增生和炎性细胞浸润，抑制关节骨质破坏。结论 α—MSH可抑制大鼠胶原性关节炎发病，具有潜在的临床应用价值。     

血管内皮生长因子及水通道蛋白1与类风湿关节炎滑膜血管生成的相关性分析

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)和水通道蛋白1(AQP1)在类风湿关节炎(RA)滑膜组织中的表达及其与滑膜血管生成的关系.方法 采用免疫组织化学技术检测7例RA,12例骨关节炎患者关节滑膜组织中VEGF和AQP1的表达,对VEGF,AQP1阳性细胞数及血管数的表达进行评分,并比较它们之间的相关性.统计学方法采用秩和检验及Spearman相关分析.结果 RA滑膜VEGF阳性细胞数与血管数呈正相关(rs=0.971,P＜0.01),骨关节炎滑膜VEGF阳性细胞数与血管数无相关性(rs=0.235,P=0.462),VEGF阳性细胞数在RA与骨关节炎间差异无统计学意义(Z=-0.390,P=0.711);RA滑膜AQP1阳性细胞数与血管数呈正相关(rs=0.828,P=0.022),骨关节炎滑膜AQP1阳性细胞数与血管数无相关性(rs=0.396,P=0.203),AQP1阳性细胞数在RA与骨关节炎间差异无统计学意义(Z=-0.302,P=0.773);RA 中,VEGF阳性细胞数与AQP1阳性细胞数呈正相关(rs=0.891,P=0.007),骨关节炎中,VEGF阳性细胞数与AQP1阳性细胞数无相关性(rs=0.338.P=0.283).结论 VEGF,AQP1与RA滑膜血管的生成密切相关,二者在RA病情的发生和发展过程中有重要作用.另外在RA中,VEGF和AQP1还可能有协同作用.