介导hyrdC基因重组腺病毒对胃癌SGC-7901细胞生长影响的实验研究

目的观察介导hyrdC基因重组腺病毒对胃癌细胞生长的影响。方法将已构建的Ad-hyrdC重组腺病毒转染人胃癌SGC-7901细胞,并设置Ad-LacZ组以及空白对照组,免疫组化法检测hyrdC蛋白在胃癌SGC-7901细胞中的表达情况,采用绘制生长曲线法和MTT法观察和比较各组胃癌细胞的生长差异,将各组胃癌细胞接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型以比较各组瘤体大小的差异。结果绘制生长曲线显示Ad-hyrdC组胃癌SGC-7901细胞生长显著增快,从48h后其细胞数与空白组以及Ad-LacZ组均有统计学差异(P<0.05),而Ad-LacZ组细胞与空白组无统计学差异(P>0.05);Ad-hyrdC组细胞MTT值显著高于Ad-LacZ组以及空白组(P<0.05),Ad-LacZ组与空白组无统计学差异(P>0.05);而Ad-hyrdC组胃癌瘤体与Ad-LacZ组及空白组胃癌荷瘤模型瘤体大小之间无统计学差异(P>0.05)。结论 hyrdC基因具有促进胃癌细胞生长的功能,hyrdC基因有可能成为胃癌基因治疗领域的新靶点。     

RNA干扰MBP-1基因对胃癌细胞SGC-7901增殖影响

目的：探讨 MBP-1（c-myc promter binding protein 1,MBP-1）基因表达沉默对胃癌细胞株 SGC-7901细胞增殖影响。方法实验分3组：空白对照组（未转染胃癌细胞）、阴性对照组（转染错义序列）和干扰组（转染 MBP-1 shRNA）。设计2条针对MBP-1基因的小干扰 RNA 片段及1条阴性对照 siRNA,并构建入 pSIREN-retroQ 质粒。将构建的重组 pSIREN-retroQ 质粒通过 Lipofectamine 2000脂质体转染胃癌 SGC-7901细胞,嘌呤霉素筛选稳转株细胞。Real time PCR 和 Western blot 分别检测MBP-1表达。MTT 法对 MBP-1干扰后 SGC-7901细胞增殖进行检测。结果通过 PCR 扩增阳性克隆及测序,说明已成功构建MBP-1干扰及对照重组 pSIREN-retroQ 质粒。通过 Lipofectamine 2000脂质体将重组质粒转染胃癌 SGC-7901细胞,并通过嘌呤霉素筛选2周,说明已成功构建 MBP-1干扰及对照 SGC-7901稳转株细胞。Real time PCR 检测,干扰组 MBP-1 mRNA 相对表达量与空白对照组相比显著下调（P ＜0.05）。Western blot 检测 MBP-1蛋白表达,干扰组 MBP-1表达量与空白对照组相比也都显著下调。MTT 法检测结果表明,MBP-1干扰组细胞在48、72、96和120 h 增殖能力比空白对照组都有显著的升高（P ＜0.05）。结论下调 MBP-1基因表达能明显促进胃癌细胞 SGC-7901的增殖,从而为胃癌基因治疗提供了新靶点。     

hyrdC基因表达水平对胃癌细胞SGC-7901增殖影响的实验研究

目的观察胃癌SGC-7901细胞株中hyrdC基因的不同表达水平对细胞增殖的影响。方法分别将已构建的携带hyrdC基因的Ad-hyrdC重组腺病毒和靶向抑制hyrdC基因表达的Ad-shyrdC重组腺病毒,转染人胃癌SGC-7901细胞株,同时设空病毒Ad-null组和正常对照组,利用绘制生长曲线法和MTT法观察各组间胃癌细胞增殖的差异;将各组胃癌细胞接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型,比较各组胃癌细胞瘤体生长率的差异。结果 Ad-hyrdC组胃癌SGC-7901细胞增殖显著快于Ad-shyrdC组、Ad-null组和正常对照组,48h后细胞数与Ad-shyrdC组、Ad-null组和正常对照组比较有统计学差异(P<0.05);Ad-shyrdC组胃癌SGC-7901细胞的光吸收值明显低于Ad-hyrdC组、Ad-null组和正常对照组(P<0.05);Ad-shyrdC组瘤体生长率较Ad-hyrdC组、Ad-null组以及正常对照组明显减慢(P<0.05),Ad-hyrdC组瘤体生长率较Ad-shyrdC组、Ad-null组以及正常对照组明显加快(P<0.05)。结论 hyrdC基因具有促进胃癌细胞生长的功能,而...     

ASPP1对胃癌细胞SGC-7901增殖抑制

目的本研究扩增及鉴定包含人类ASPP1基因转录本蛋白编码区的cDNA片段,将此片段克隆入真核表达载体,转染胃癌细胞,观察其对胃癌细胞增殖力的影响。方法从胎盘组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增ASPP1基因全长编码序列CDS(full-length coding sequence),目的片段回收纯化后用限制性内切酶XbaⅠ,EcoR I酶切的方法鉴定目的片段正确与否并检测其纯度、浓度;并转染胃癌SGC-7901细胞,观察ASPP1蛋白的表达及用MTT法进行细胞增殖力检测。结果该扩增片段经限制性核酸内切酶切图谱分析,与预期结果吻合,p53表达增加,转染的胃癌SGC-7901细胞出现增殖受抑。结论人类ASPP1基因对胃癌细胞增殖有抑制作用,从而为临床上胃癌的基因治疗提供了新思路。     

腺病毒介导的CDglyTK基因影响胃癌细胞形态学及生长特性的效应

目的：观察已转染双自杀基因的胃癌细胞和未转染双自杀基因的胃癌细胞在形态学及生长特性方面的差异性。 方法：实验于2005—03／2006—03在南方医科大学肿瘤研究所完成。质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK为南方医科大学珠江医院普外科保存。用感染复数为100时，将启动子融合基因腺病毒（Ad-KDR—CDglyTK）体外感染SCG7901细胞株。通过倒置荧光相差显微镜、光镜、透射电镜等技术观察转染基因的胃癌细胞的形态学变化。通过流式细胞仪检测细胞周期的变化．同时用四甲基偶氮唑盐方法进行生长曲线的测定。 结果：①腺病毒介导的KDR启动子驱动的双自杀基因对胃癌细胞体外培养的形态无明显影响。②已转基因的SCG7901细胞和未转基因的SCG7901细胞处于G1期，比率分别为（49．00&;#177;0．58）％，（51．02&;#177;0．91）％（t=1．862，P=1．12），处于S期比率分别为（16．20&;#177;0．36）％，（14．00&;#177;0．99）％（t=2．07，P=0．84），处于G2期比率分别为（34．60&;#177;0．96）％，（34．31&;#177;0.86）％（t=0．223，P=0．831）。（3）已转基因SCG7901细胞和未转基因SCG7901细胞具有类似的生长状态（F=0．042,P=0．838〉0．05）。 结论：已转染KDR启动子融合基因的胃癌细胞和未转染的胃癌细胞在形态及生长特性方面无显著性差异。     

shRNA对胃癌细胞株SGC-7901 VEGF-C表达的抑制作用

目的:筛选出有效干扰胃癌SGC-7901细胞株血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)的短发卡状RNA(short hairpin RNA,shRNA).方法:设计2个shRNA片段,VEGFC-1505与VEGFC-1417,体外转染VEGF-C阳性表达的胃癌细胞株SGC-7901,采用RT-PCR检测VEGF-C mRNA表达水平的变化,western-blot检测VEGF-C蛋白水平变化.结果:VEGFC-1505可以显著抑制VEGF-C基因表达,对其mRNA表达的抑制率可以达到53%,对蛋白的表达抑制率可以达到92.9%.结论:成功筛选出针对胃癌SGC-7901细胞株VEGF-C的shRNA,为抑制肿瘤淋巴管生成和转移研究提供有效的实验工具.     

稳定转染靶向bcl-2的shRNA对胃癌SGC-7901细胞株增殖影响

目的探讨稳定转染靶向bcl-2的小发夹RNA（shRNA）对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响。方法构建针对bcl-2的shRNA质粒表达载体,转入SGC-7901细胞,筛选稳定转染的细胞克隆继续压力培养。RT-PCR方法检测稳定转染后SGC-7901细胞bcl-2 mRNA的表达以及对细胞增殖和凋亡的影响。结果稳定转染shRNA后,SGC-7901细胞的bcl-2 mRNA表达明显下降;细胞增殖能力及凋亡率无明显变化。结论稳定转染shRNA能长效抑制SGC-7901细胞bcl-2 mRNA的表达,为后续基因治疗研究提供了实验依据。     

大蒜素对胃癌细胞SGC-7901生长的抑制及其机制的研究

目的:研究大蒜素对胃癌细胞SGC-7901生长的抑制及其机制.方法:应用MTT、RT-PCR及Western blot等方法观察细胞形态、P38及Caspase-3蛋白及基因的表达情况.结果:(1)大蒜素抑制细胞生长、凋亡细胞增多(P＜0.05).(2)大蒜素作用下胃癌细胞p-P38、Caspase-3表达量增加(P＜0.05).结论:大蒜素能抑制胃癌细胞增殖,诱导凋亡.     

腺病毒介导的CDglyTK基因影响胃癌细胞形态学及生长特性的效应

目的:观察已转染双自杀基因的胃癌细胞和未转染双自杀基因的胃癌细胞在形态学及生长特性方面的差异性。方法:实验于2005-03/2006-03在南方医科大学肿瘤研究所完成。质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK为南方医科大学珠江医院普外科保存。用感染复数为100时,将启动子融合基因腺病毒(Ad-KDR-CDglyTK)体外感染SCG7901细胞株。通过倒置荧光相差显微镜、光镜、透射电镜等技术观察转染基因的胃癌细胞的形态学变化。通过流式细胞仪检测细胞周期的变化,同时用四甲基偶氮唑盐方法进行生长曲线的测定。结果:①腺病毒介导的KDR启动子驱动的双自杀基因对胃癌细胞体外培养的形态无明显影响。②已转基因的SCG7901细胞和未转基因的SCG7901细胞处于G1期,比率分别为(49.00±0.58)%,(51.02±0.91)%(t=1.862,P=1.12),处于S期比率分别为(16.20±0.36)%,(14.00±0.99)%(t=2.07,P=0.84),处于G2期比率分别为(34.60±0.96)%,(34.31±0.86)%(t=0.223,P=0.831)。③已转基因SCG7901细胞和未转基因SCG7901细胞具有类似的生长状态(F=0.042,P=0.838>0.05)。结论:已转染KDR启动子融合基因的胃癌细胞和未转染的胃癌细胞在形态及生长特性方面无显著性差异。     

斑贞1号联合氟尿嘧啶对胃癌细胞SGC-7901/ADR的细胞毒作用

目的探讨斑贞1号联合氟尿嘧啶(5-FU)对胃癌SGC-7901/ADR细胞的细胞毒作用。方法以SGC-7901/ADR细胞为靶细胞,分别设5-FU组、斑贞1号组、斑贞1号 5-FU组,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察各药物组的细胞毒作用,光镜下动态拍照并用流式细胞仪测定各药物组细胞周期的变化。结果斑贞1号联合5-FU半数抑制浓度(IC50)分别由单独用药时的(7.85±0.03)mg/L(、13.00±0.13)mg/L降至(4.75±0.04)mg/L(P<0.01)。对SGC-7901/ADR细胞毒作用斑贞1号 5-FU>斑贞1号>5-FU。光镜下斑贞1号 5-FU组细胞与单独用药组相比,细胞生长明显受到抑制,癌细胞体积变小,胞体全面皱缩。流式细胞仪检测斑贞1号 5-FU组SGC-7901/ADR细胞明显阻滞在G0/G1期,进入S期细胞减少,抑制癌细胞DNA的合成(P<0.05)。结论斑贞1号联合5-FU较单独用药对SGC-7901/ADR细胞具有明显的细胞毒作用。     

吴茱萸碱抑制胃癌SGC-7901细胞生长及诱导凋亡作用的研究

目的观察吴茱萸碱对胃癌SGC-7901细胞凋亡的生长抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别用0.5、1.0、1.5μmol/L吴茱萸碱及吴茱萸碱+20μmol/L胱天蛋白酶抑制剂(Z-VAD-FMK)作用于SGC-7901细胞12、24和36 h。四唑盐(MTT)比色法观察吴茱萸碱对SGC-7901细胞增殖活性的影响。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染细胞,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡的情况。结果吴茱萸碱能抑制SGC-7901细胞增殖,MTT结果显示具有时间和剂量的依赖性;流式细胞仪结果显示吴茱萸碱可诱导SGC-7901细胞凋亡,且随剂量和时间的增加作用增强;Z-VAD-FMK可部分抑制吴茱萸碱诱导该细胞的凋亡作用。结论吴茱萸碱能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,且在加入Z-VAD-FMK后吴茱萸碱仍可诱导其凋亡,但作用减弱。该研究结果提示吴茱萸碱诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡除胱天蛋白酶途径外,还存在其他的诱导凋亡途径。     

吴茱萸碱抑制胃癌SGC-7901细胞生长及诱导凋亡作用的研究

目的观察吴茱萸碱对胃癌SGC-7901细胞凋亡的生长抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别用0.5、1.0、1.5μmol/L吴茱萸碱及吴茱萸碱＋20μmol/L胱天蛋白酶抑制剂（Z-VAD-FMK）作用于SGC-7901细胞12、24和36 h。四唑盐（MTT）比色法观察吴茱萸碱对SGC-7901细胞增殖活性的影响。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双染细胞,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡的情况。结果吴茱萸碱能抑制SGC-7901细胞增殖,MTT结果显示具有时间和剂量的依赖性;流式细胞仪结果显示吴茱萸碱可诱导SGC-7901细胞凋亡,且随剂量和时间的增加作用增强;Z-VAD-FMK可部分抑制吴茱萸碱诱导该细胞的凋亡作用。结论吴茱萸碱能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,且在加入Z-VAD-FMK后吴茱萸碱仍可诱导其凋亡,但作用减弱。该研究结果提示吴茱萸碱诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡除胱天蛋白酶途径外,还存在其他的诱导凋亡途径。     

参麦及顺铂对人胃癌SGC-7901细胞生长的协同抑制作用

目的 探讨参麦及顺铂对人胃癌SGC-7901细胞生长的协同作用及其可能机制.方法 体外培养人胃癌SGC-7901细胞,MTT法测定细胞增殖情况;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化;RT-PCR检测VEGF、Bcl-2和Caspase-3 mRNA的表达.结果 MTT法显示参麦及顺铂能抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,其作用具有时间及浓度依赖性,单用顺铂组,有效浓度为1.25 μg/ml,起效时间为72 h,其抑制率为(8.70±0.57)%,联合用药组,有效浓度为顺铂0.625 μg/ml,起效时间为48h,其抑制率为(8.87±0.10)%.行Hoechst33258染色可见细胞核出现固缩、边集,形成凋亡小体等凋亡现象;RT-PCR检测显示:与对照组相比,药物作用后Bcl-2、VEGF的mRNA表达降低,Caspase-3mRNA表达升高.结论 参麦与顺铂联合对胃癌细胞的抑制具有协同作用,与单用顺铂相比,参麦与顺铂联合可有效减少顺铂的用药剂量,促进凋亡,其作用与协同促进Caspase-3的高表达及Bcl-2、VEGF的低表达有关.     

三种不同方法检测β-咔啉类生物碱所致的人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的比较分析目前常用的三种检测细胞凋亡方法在不同β-咔啉类生物碱浓度条件下所致人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的运用。方法将生长状态良好的细胞按不同的给药浓度分为A组40μg／ml,B组20μg／ml,C组10μg／ml,D组51xg／ml,E空白对照组,作用24h、48h。分别用MTT法、Hoechest33258细胞核染色法、流式细胞术检测细胞凋亡。结果MTF法结果显示,A组、B组、C组、D组与E组相比较,生长抑制率差异有统计学意义fP〈O．01）;Hoechest33258细胞核染色法显示,E组细胞核浓染、边集、碎裂较少,其他组细胞核均有不同程度的改变,A组、B组、C组、D组与E组相比较,凋亡核百分比差异有统计学意义伙0．05）;流式细胞仪检测结果显示,A组、B组、C组、D组与E组细胞凋亡率相比有统计学差异（P〈0．01）。结论β-咔啉类生物碱能引起人胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

过表达上皮剪接调控蛋白1抑制胃癌细胞SGC-7901迁移能力的研究

目的探讨上皮剪接调控蛋白1(ESRP1)对胃癌SGC-7901细胞迁移能力的影响及其作用机制。方法利用脂质体介导法转染ESRP1真核表达载体于SGC-7901细胞后,采用划痕实验检测细胞迁移能力的变化;实时荧光定量PCR检测上皮间充质转化(EMT)过程相关标志物E-cadherin、N-cadherin分子的表达情况,采用t检验分析。结果与转染空载体对照组相比,过表达ESRP1后SGC-7901细胞迁移能力下降;伴随ESRP1表达增加,N-cadherin表达下调为对照组0.25倍、E-cadherin表达上调为对照组2.42倍。结论过表达ESRP1可能通过抑制EMT进程降低胃癌细胞SGC-7901的迁移能力。     

紫杉醇联合miR-200a对胃腺癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响

目的观察紫杉醇联合应用 miR-200 a 对胃癌 SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响。方法体外应用50 nmol/L紫杉醇单独处理胃癌SGC-7901细胞或联合应用脂质体转染miR-200 a模拟物（miR-200a mimics）,通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平和周期分布,克隆形成试验观察细胞的增殖能力,Tr-answell实验和细胞划痕试验观察细胞的侵袭迁移能力。通过以上实验比较单独应用紫杉醇与联合应用miR-200 a对胃癌细胞增值侵袭能力影响的差异,并探讨可能的作用机制。结果流式细胞凋亡检测表明50 nmol/L紫杉醇联合应用 miR-200a 细胞早期凋亡率高于单独用药组[（22.79±0.43）％ vs．（11.76±0.64）％,P＜0.05],联合组阻滞于G2/M期细胞比例（63.74±1.76）％高于单独应用紫杉醇组的（51.75±2.01）％,结果具有统计学差异（ P＜0.01）;细胞克隆形成实验显示联合用药组克隆形成率与紫杉醇组相比[（4.03±0.25）％vs．（7.80±0.30）％]显著降低（P＜0.01）;Transwell侵袭实验表明联合用药组穿过小室的细胞数目少于紫杉醇组（22.00±2.00 vs．56.33±5.13,P＜0.01）;细胞划痕试验表明在划痕后48 h,联合组细胞迁移水平与单独用药组迁移率已有显著降低[21.43±2.34）％ vs．（54.26±2.49）％, P ＜0.01]。结论紫杉醇联合应用miR-200 a能增加紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的抑制作用,为今后胃癌的化疗及基因靶向治疗提供新的思路。     

尼美舒利对人胃癌SGC7901细胞生长及细胞周期分布的影响

目的探讨尼美舒利对体外培养的胃癌细胞生长及细胞周期分布的影响。方法以人胃癌细胞株SGC7901为对象,用放射免疫分析法测定细胞培养上清PGE2水平,体外药物敏感实验（MTT）法检测尼美舒利对肿瘤细胞的增殖抑制效应,流式细胞术检测肿瘤细胞周期分布变化情况。结果尼美舒利可减少PGE2产生,尼美舒利对人胃癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应,尼美舒利可改变胃癌细胞株细胞周期的分布,明显降低其增殖指数。结论尼美舒利可通过抑制环氧合酶-2（COX-2）活性抑制肿瘤细胞的分裂和增殖、阻止细胞周期进展,诱导其凋亡中起重要作用。