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慢性HBV感染者肝组织HBV cccDNA的定量检测 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立一种肝活检组织中HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的定量检测方法。方法待检肝组织标本共21份,来源于江苏省人民医院肝脏手术患者,包括19份慢性HBV感染,其中HBeAg(+)标本10份,HBeAg(-)标本9份,4份非HBV感染为阴性对照组,取HBVDNA阳性的患者外周血作为rcDNA组。检测方法的主要步骤为肝组织经蛋白酶K和细胞裂解缓冲液消化后,用液相抽提法提取核酸,将提取的核酸溶液分为2等份。1份用特异性降解单链DNA的核酸酶加以消化,纯化后使用跨缺口引物和SYBR GreenⅠ荧光染料进行实时荧光定量PCR分析;另1等份则用以定量检测肝细胞看家基因(β-Globin)作为样本细胞参数。检测结果的特异性主要通过PCR反应产物的序列分析及rcDNA组结果的对照进行证实,HBeAg(+)组和HBeAg(-)组cccDNA水平的差异通过两样本t检验进行分析。结果PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析显示扩增产物的碱基数为350bp左右,DNA测序分析提示产物与目的片段的序列符合率为99%以上,且以rcDNA为对照的结果均为阴性,排除最有可能造成假阳性的rcDNA对结果的干扰。本方法对10mg HBeAg(+)肝组织标本的cccDNA的检测阳性率为100%。血清HBeAg(+)的肝组织样本的平均HBV cccDNA水平高于HBeAb(+)的肝组织标本(P〈0.05)。结论通过上述三种途径证实了本文所建立方法的特异性。应用SYBR GreenⅠ荧光染料和β-Globin作为样本细胞参数所建立的实时荧光定量PCR方法检测肝细胞内HBV cccDNA,具有较高的特异性、敏感性,且成本较低的特点。 相似文献
2.
目的探讨丙型肝炎病毒感染者血脂代谢状况及与外周血病毒载量的相关性。方法 75例丙型肝炎病毒感染者分为HCV RNA高复制组、低复制组及阴性组。利用荧光定量PCR方法检测外周血HCV RNA水平,应用全自动生化分析仪检测患者TG、CHO、Apo A1、Apo B、HDL-C、LDL-C等血脂代谢指标。结果甘油三酯(TG)、脂蛋白Apo B和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)在HCV RNA阴性组和高复制组有显著差异,上述3个指标均与HCV RNA呈正相关。结论慢性丙型肝炎病毒感染伴随着TG、Apo B、LDL-C水平的上升,且与病毒载量呈正相关关系,并提示通过有效的抗病毒治疗可能有助于血脂代谢紊乱的纠正。 相似文献
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目的 寻找反映慢性肝病肝纤维化进展程度敏感可靠的血清学诊断指标。方法 对184例住院肝病患联合检测血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、甲胎蛋白(AFP)、铁蛋白(SF)、胚抗原(CEA)。并与8例肝组织学检查及30例无肝病史及肝功能异常的常规体格检查进行对照研究。结果 六项指标阳性率在慢性肝炎轻度(CHI)、急性肝炎(AVH)、慢性肝炎中度(CHⅡ)、慢性肝炎重度(CHⅢ)、肝硬变(LC)、肝细胞癌(HCC)及慢性重型肝炎(CHG)各组间,依次递增,与各级肝病中纤维化程度及临床病情的轻重有良好的相关性。结论 联合检测血清PCⅢ、HA、LN、AFP、SF、CEA可明显提高慢性肝病诊断的准确性与可靠性,作为判断肝纤维化、肝硬化程度及有无伴发肝癌的良好指标,重复性好,无创伤,便于掌握病变进展情况。 相似文献
4.
目的:分析慢性丙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群的变化以及与HCV病毒载量的相关性,探讨慢性HCV感染慢性化的免疫机理.方法:应用直接免疫荧光-流式细胞术检测47例慢性丙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞的相对数量,与35例正常健康人做比较;应用实时荧光定量RT-PCR对其外周血HCV病毒载量进行检测,将慢性HCV感染者分为两组进行比较分析.结果:外周血CD4 T淋巴细胞比例和CD4/CD8比值慢性丙型肝炎患者组低于正常人组(P<0.05),HCV RNA阳性组与HCV RNA阴性组之间的差异无统计学意义(P>0.05);NK细胞比例慢性丙型肝炎患者组高于正常人组(P<0.05),HCV RNA阴性组高于HCV RNA阳性组(P<0.05).结论:慢性HCV感染者存在细胞免疫功能低下,NK细胞介导非特异性免疫的持续上调,在有效地清除了部分HCV病毒的同时,可能促进了持续性免疫性肝损伤. 相似文献
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阿德福韦酯对HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血T细胞亚群的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 探讨阿德福韦酯(ADV-dpv)抗病毒治疗对HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血T细胞亚群的影响.方法 选择57例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者,均给予ADV-dpv 10 mg,每日1次,共48周,采用流式细胞术检测治疗前、治疗3个月和6个月患者外周血T细胞亚群.结果 在抗病毒治疗前,与低病毒载量患者相比,高病毒载量患者存在着更为明显的T细胞亚群的失衡,差异有统计学意义(P<0.05);随着抗病毒治疗的进行,T细胞亚群失衡呈进行性改善,除CD3+T淋巴细胞较治疗前明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)外,其余指标与治疗前比较,差异均无统计学意义(P>0.05);ADV-dpv治疗后HBV-DNA转阴组与未转阴组患者初始T细胞亚群的差异均无统计学意义(P>0.05).结论 HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的病毒载量与其外周血T细胞亚群的状态密切相关,经ADV-dpv抗病毒治疗后其外周血T细胞亚群的状态呈逐渐改善趋势. 相似文献
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慢性乙型肝炎患者HBV cccDNA的检测 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 建立和优化肝细胞内乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的检测方法。方法 蛋白酶K裂解法释放肝细胞核内HBV cccDNA及基因组DNA,细胞裂解液进行核酸纯化后用酚-氯仿法抽提,并采用酶消化和设计特异性引物两种方法排除其他病毒复制中间体对检测结果的干扰,最后进行聚合酶链式反应(P(R)。结果 以HBV松弛环状DNA(rcDNA)、阴性肝细胞、阴性血清作为对照,以包含HBV基因组全序列的质粒作为阳性对照,HBV感染者肝组织的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳后出现的条带与目标片段分子量相等,且产物的DNA测序结果显示其序列与目标序列一致。外周血HBeAg(+)患者组肝组织检测结果的阳性率高于HBeAg(-)患者组。结论 该方法检测肝细胞内cccDNA具有较高的特异性、敏感性,且成本较低。本方法临床标本初步检测结果显示病毒复制活跃患者肝组织中HBV cccDNA的阳性率较复制低的患者为高。 相似文献
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目的 探讨近年来成人EB病毒感染相关疾病常见病种的构成、临床表现及病毒标志物特征.方法 分析了近3年来53例成人EB病毒感染相关疾病的种类及其临床特点,采用荧光定量PCR对外周血EB病毒DNA进行了定量检测,酶联免疫吸附法对EB病毒相关抗体进行了半定量检测,对切除淋巴结进行EBER-1原位杂交检测.结果 青年组EB病毒感染相关疾病发生率较高的为淋巴结炎、传染性单核细胞增多症及慢性活动性EB病毒感染等,中老年组发生率较高的为淋巴瘤.青年组EBV DNA、抗VCA-IgM抗体及抗EBEA抗体IgG的阳性率显著高于中老年组.结论 EB病毒感染相关疾病的发生与发病年龄关系密切,病毒标志物分析提示青年组EB病毒的复制及抗病毒体液免疫反应可能较中老年组活跃. 相似文献
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乙型肝炎病毒cccDNA检测方法及临床应用研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)是HBV DNA在宿主细胞核内的存在形式,是HBV复制和转录的模板,长期存在于细胞核中且药物难以清除,成为HBV慢性感染的主要因素之一。由于目前尚无成熟的便于推广应用的cccDNA检测方法,学者们对HBV cccDNA检测方法及临床应用进行了广泛的研究。本文综述了近年来该方面的研究进展。 相似文献
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目的 探讨肺炎克雷伯菌败血症(KP-BSI)的高危因素、临床特点、细菌耐药特点、治疗和转归.方法 收集46例KP-BSI患者临床、细菌药敏资料,制定治疗方案,分析治疗与疾病转归的关系.结果 46例KP-BSI患者,30例≥60岁,41例有基础疾病,15例接受过侵袭性操作,28例在感染肺炎克雷伯菌(KP)前使用过2种或2种以上抗菌药物.KP-BSI可发生严重临床并发症,本组12例感染性休克,7例为医院获得性,5例为社区获得性,3例多脏器功能衰竭者均为医院感染.12例合并肝脓肿,糖尿病者占9例.17株(37.0%)KP产超广谱β-内酰胺酶(ESBLS),社区感染和医院感染产酶率分别为19.2%和60.0%.除亚胺培南对所有菌株敏感外,医院感染对药物敏感率明显低于社区感染,产ESBLs对药物敏感率明显低于非产ESBLs,P<0.05.早期经验治疗用碳氧酶烯类、头孢哌酮/舒巴坦、头孢哌酮/三唑巴坦者有效率100%,而用第三、四代头孢菌素联合氟喹诺酮类社区感染组有效率54.5%,医院感染组20.0%.临床疗效与药敏结果一致.结论 KP-BSI多见于有基础疾病患者,侵袭性操作、抗菌药物滥用是常见的危险因素;医院感染患者产ESBLs率高,耐药严重,临床并发症严重;糖尿病患者更容易并发肝脓肿;碳青酶烯类抗生素对KP(包括产ESBLs菌株)100%敏感,是治疗KP-BSI最好的治疗选择,含β-内酰胺酶抑制剂复合剂也是有效药物. 相似文献
10.
目的通过脂质体介导乙肝病毒核心抗原(HBcAg)基因转染人体内专职抗原提呈的树突状细胞(DC)的方法,使HBcAg基因在树突状细胞中表达,构建树突状细胞疫苗。方法分离健康人外周血单个核细胞,在粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)的诱导下培养DC。在培养的第5天,应用脂质体PEI介导将含有编码HBcAg 基因的质粒(pJW4303/HBc)转染入DC,再以免疫印迹技术(Western-Blotting)验证其表达产物。结果经以质粒pJW4303 为真核表达载体的HBcAg目的基因转染后的树突状细胞有效表达了HBcAg抗原。结论经该方法转染后的DC目的基因可有效表达HBcAg,为以DC为基础的免疫治疗奠定了新的基础。 相似文献