肝组织HBV cccDNA与HBV复制水平的相关性分析

目的 探讨乙肝患者肝组织中乙型肝炎病毒（HBV ） cccDNA与血清 HBV DNA及乙肝病毒e抗原（HBeAg）含量的关系。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应检测乙肝患者肝组织 HBV cccDNA和血清HBV DNA ,采用化学发光法检测其血清中 HBeAg。结果 肝组织HBV cccDNA与血清HBV DNA定量呈正相关（ r ＝0．806,P ＜0．01）,与血清 HBeAg定量值无相关关系（ r ＝0．219,P ＞0．05）。结论 血清HBeAg阳性组病毒复制较阴性组活跃,HBV DNA阴性不能完全反映肝组织内 HBV是否存在复制,而检测肝组织HBV cccDNA可精确反映肝内 HBV复制情况。     

鸭肝组织中DHBV cccDNA的实时荧光定量PCR方法的建立

目的 建立基于DHBV病毒正、负链缺口区设计引物、沉淀蛋白结合的DNA、酶切消化残留线性DNA的DHBVcccDNA荧光定量PCR方法.方法 根据DHBV cccDNA和rcDNA结构的不同,将引物设计在DHBV DNA负链缺口的两侧.采用十二烷基硫酸钾蛋白质沉淀法分离肝组织中cccDNA和rcDNA.并对提取的DNA进行紫外定量,按照每2UPSAD消化500ng cccDNA,计算PSAD的用量,酶切消化残存的线性DNA.以pBR322/2DHBV Core重组质粒为PCR标准品,通过优化反应体系和扩增条件,建立检测DHBV cccDNA的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,并进行方法学考察和实际应用.结果 优化的PCR扩增产物电泳后可见239 bp的DNA片段,与目标片段长度相同.标准曲线回归方程Y=-4.085 7X＋48.805,R2=-0.997 6.方法的灵敏度为103 copies/ml,线性范围可达103～108 copies/ml.方法特异性强,未检出DHV,HBV及E coli DNA.对已感染DHBV的鸭肝组织检测DHBV cccDNA,进行定量,含量从0.36～1733.08 copies/diploid genome.其中分布最广的是10～99 copies/dioploid genome.DHBV cccDNA占总DHBV DNA的比例平均仅为3.86％,范围从0.01％～13.3s％.结论 根据DHBV cccDNA与rcDNA的结构和理化性质的差异,设计能够特异性扩增DHBV cccDNA的荧光定量PCR方法,方法灵敏度高、特异度强,可广泛应用于DHBV和HBV抗病毒治疗策略的相关研究中.     

HBeAg转阴前后慢性乙肝患者HBV cccDNA荧光定量检测的意义

目的探讨慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)cccDNA检测的意义。方法检测乙型肝炎患者乙肝e抗原(HBeAg)转阴前后肝组织HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)、血清HBV DNA。用实时荧光定量PCR方法检测HBV DNA、cccDNA水平,通过质粒保护型的DNA酶对提取的DNA模板进行酶切处理,再分别进行HBV DNA和cccDNA的定量检测。结果HBeAg转阴前,慢性乙肝患者总HBV DNA水平和cccDNA水平呈正相关(r=0.911,P0.01);而HBeAg转阴后,血清HBV DNA水平和肝组织cccDNA水平的检测不一致。结论 HBV cccDNA可作为反映慢性乙肝患者抗病毒治疗预后的指标。     

乙型肝炎患者血清HBV cccDNA检测的临床意义

目的观察乙型肝炎患者乙型肝炎病毒（HBV）共价闭合环状DNA（covalently closed circular DNA,cccD-NA）在血清中的分布特点及与HBV感染状态的联系,探讨HBV cccDNA与患者病情的轻重、HBV的复制指标（HBeAg、HBV DNA）的关系。方法分别采用PCR荧光分子信标、荧光定量PCR、酶联免疫吸附分析法（ELISA）检测162例乙型肝炎患者外周血清中HBV cccDNA定量、HBV DNA定量和乙型肝炎病毒标志物。结果162例乙型肝炎患者,血清HBV cccDNA阳性率为48.15%（78/62）。HBV cccDNA阳性率在HBV DNA阳性患者中为60.94%（78/128）,显著高于HBV DNA阴性者[0（0/34）]（P〈0.01）;HBeAg阳性患者HBV cccDNA检出率为61.70%（58/94）,显著高于HBeAg阴性者29.04%（20/68）（P〈0.01）;中、重度慢性乙肝患者HBV cccDNA检出率为58.97%,高于轻度慢性乙型肝炎患者（45.45%）（P〈0.05）。重型肝炎患者HBV cccDNA阳性者存活率（37.5%）明显低于HBV cccDNA阴性者（78.26%）（P〈0.05）。结论HBV cccDNA仅存在于血清HBV DNA阳性乙型肝炎患者外周血清中;HBV cccDNA检出率与外周血HBV复制指标（HBeAg、HBV DNA）有显著的相关性,并与肝细胞炎症相关,是乙型肝炎病毒在患者体内大量复制及肝细胞损伤的血清标志。     

乙型肝炎患者抗病毒治疗过程中肝组织HBV cccDNA与血清学标志物变化的动态变化研究

目的探讨慢性乙型病毒性肝炎患者抗病毒治疗过程中肝组织乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)与相关血清学标志物变化。方法 88例乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性的慢性乙型病毒性肝炎患者给予恩替卡韦抗病毒治疗96周。分别于0、24周、48周、96周检测肝组织中和血清HBV cccDNA、血清HBV DNA、乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)、HBeAg定量,并分析肝组织HBV cccDNA与血清学标志物变化的关系。结果与基线比较,治疗后24周时患者肝组织HBV cccDNA,血清HBV cccDNA,血清HBV DNA和HBs Ag均显著降低(P<0.05或P<0.01);治疗后24周和48周比较:肝组织HBV cccDNA,血清HBV cccDNA,血清HBV DNA差异有统计学意义(P<0.01);48周与96周检测指标相比:肝组织HBV cccDNA定量差异无统计学意义(P>0.05);血清HBV DNA定量和血清HBV cccDNA定量差异有统计学意义(P<0.01)。血清HBs Ag和HBeAg差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清HBV DNA定量和血清HBV cccDNA定量同步下降幅度大于肝组织cccDNA定量和HBs Ag、HBeAg定量,肝组织HBV cccDNA定量、HBs Ag、HBeAg定量在48周后逐步趋于稳定。血清HBs Ag、HBeAg定量与肝组织HBV cccDNA具有较高的一致性,血清HBs Ag、HBeAg定量检测能更准确、方便、快捷指导临床诊断。     

乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA与HBV DNA、HBsAg和HBeAg定量关系的分析

目的定量检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒（HBV）共价闭合环状DNA（cccDNA）、HBV DNA、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎e抗原（HBeAg）并分析其相互关系,探讨定量检测血清中HBV cccDNA的临床应用价值。方法随机选取HBV感染者83例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测血清中HBVcccDNA及HBV DNA,同时采用化学发光法定量检测血清中HBsAg和HBeAg。结果 83例患者中HBV DNA阳性62例,其中HBV DNA载量≥105拷贝/mL者40例,血清HBV cccDNA阳性28例（70.00%）;HBV DNA载量〈105拷贝/mL者22例,血清HBV cccDNA阳性2例（9.09%）,不同DNA载量组HBV cccDNA差异有统计学意义（P〈0.01）。HBeAg阳性组和阴性组HBV cccDNA阳性率分别为70.00%（28/40）和4.65%（2/43）,两组差异有统计学意义（P〈0.01）。HBV cccDNA定量值与HBV DNA、HBsAg呈正相关（P〈0.01）。结论血清中HBV cccDNA水平可同时反应血清HBV DNA和HBsAg水平,血清HBV cccDNA含量可作为观察HBV复制情况和评价抗病毒疗效的相关血清指标。     

乙型肝炎病毒SYBR Green I 实时荧光定量PCR方法的建立及临床应用

目的 建立SYBR Green I实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的快速方法,并探讨其临床应用价值。方法 根据GenBank公布的Hepatitis B virus gp1基因序列设计引物,建立SYBR Green I实时荧光定量PCR,并对反应体系和扩增程序进行优化。定量标准品通过基因克隆方法获得,同时以浙江省夸克公司HBV DNA定量检测试剂盒作对照,应用于随机选取的100份乙型肝炎患者血清检测。结果 SYBR Green I实时荧光定量PCR检出限范围为5×10²copies/ml～5×10⁸copies/ml,HBV DNA浓度与CT值有良好线性关系,无交叉反应,整个过程仅需2.5 h。在随机抽取的100份临床标本应用中,与浙江省夸克公司的HBV荧光定量PCR检测试剂相比,建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR体系灵敏度100%,特异度92.5%。结论SYBR Green实时荧光定量PCR快速、简便、灵敏度高、特异度强,可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药,准确评价HBV感染者的病情。     

乙型肝炎病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立及临床应用

目的建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的快速方法,并探讨其临床应用价值。方法根据GenBank公布的Hepatitis B virus gp1基因序列设计引物,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR,并对反应体系和扩增程序进行优化。定量标准品通过基因克隆方法获得,同时以浙江省夸克公司HBV DNA定量检测试剂盒作对照,应用于随机选取的100份乙型肝炎患者血清检测。结果 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检出限范围为5×10~2copies/ml~5×10~8copies/ml,HBV DNA浓度与CT值有良好线性关系,无交叉反应,整个过程仅需2.5 h。在随机抽取的100份临床标本应用中,与浙江省夸克公司的HBV荧光定量PCR检测试剂相比,建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR体系灵敏度100%,特异度92.5%。结论 SYBR Green实时荧光定量PCR快速、简便、灵敏度高、特异度强,可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药,准确评价HBV感染者的病情。     

实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义

目的用实时荧光定量PCR检测乙型肝炎患者HBV—DNA结果进行分析,以探讨其临床诊疗意义。方法对850例临床标本用时间分辨荧光免疫技术定量测定乙肝病毒血清学指标,用荧光定量PCR法检测血标本中的HBV—DNA,并依据乙肝两对半结果进行归类分组。结果302份HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、HBcAb（＋）标本中有261份HBV—DNA为阳性,阳性率为86．4％,其PCR定量拷贝数为（2．21±0．76）×10^7／ml;321份HBsAg（＋）、HBeAb（＋）、HBcAb（＋）标本有96份HBV—DNA阳性,阳性率达到29．91％,PCR定量拷贝数为（1．69±0．98）×10^6／ml;32份HBsAg（＋）、HBcAb（＋）标本中有9份HBV—DNA为阳性,阳性率为28．13％,28份HBeAb（＋）、HBcAb（＋）标本有4份PCRHBV—DNA阳性,阳性率14．29％;11份HBcAb（＋）标本有6份PCRHBV—DNA阳性,阳性率为42．9％;74份HBsAb（＋）、HBeAb（＋）、HBcAb（＋）标本有5份HBV—DNA阳性,阳性率6．75％;13份HBsAb（＋）、HBeAb（＋）阳性标本有2份PCRHBV—DNA阳性,阳性率为14．3％;12份HBsAb（＋）、HBcAb（＋）标本有1份HBV—DNA阳性,阳性率7．69％;4份HBsAb（＋）的标本HBV—DNA均为阴性,PCR定量拷贝数为〈1．00E×103;24份HBsAg（＋）、HBsAb（＋）、HBeAg（＋）、HBcAb（＋）标本中有21份HBV—DNA为阳性,阳性率为87．50％;1份HBsAg（＋）标本HBV—DNA均为阳性,阳性率为100％;10份HBsAg（＋）、HBsAb（＋）、HBeAb（＋）、HBcAb（＋）标本有3份HBV—DNA均为阳性,阳性率30．00％,其余38例全阴性结果和各少见模式基本见有HBV—DNA的检出。结论PCR定量测定HBV—DNA可以真实反映体内乙肝病毒感染和复制及病毒载量情况,更有利于临床治疗和疗效观察。     

SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测survivin甲基化状态

目的建立SYBR Green Ⅰ实时荧光聚合酶链反应（PCR）检测survivin甲基化的方法。方法25例胃癌组织标本及与其配对的正常胃组织经甲基化敏感性限制性内切酶HpaⅡ和MspⅠ处理后，再用SYBR GreenⅠ实时荧光PCR对survivin外显子1进行检测。实时荧光定量PCR检测survivin基因内含子2，用于监测经限制性酶消化的基因组DNA浓度变化，10倍系列稀释的基因组标准物用于检验实时PCR的敏感度，PCR产物通过凝胶电泳分析证实。结果经Hpa Ⅱ酶切后，甲基化的目的基因PCR产物在熔解曲线上有Tm值为（91．5&#177;0．5）℃的峰，电泳证实为338bp的条带。所有经酶消化的样本都能扩增出以Tm值（79．5&#177;0．5）℃为特征的对照基因（survivin基因内含子2），表明基因组DNA未产生严重的非特异性降解。SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测甲基化目的基因的灵敏度为10^0拷贝／μL。用以上新建的体系检测25例胃癌标本，发现其survivin基因外显子1的去甲基化频率为96％。结论SYBR GreenⅠ荧光PCR法具有快速、准确、敏感、实时、简单和敏感的特点，是检测survivin外显子1甲基化状态的一种可靠的新方法。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒YMDD变异的研究

目的探讨拉米夫定治疗1年后慢性乙型肝炎（CHB）患者发生YMDD基序变异的状况及其检测方法。方法采用荧光定量PCR法检测血清HBV DNA含量，荧光PCR法和变性高效液相色谱法检测HBV YMDD基序变异。结果61例CHB患者经过拉米夫定治疗1年后，40例（65．6％）HBV DNA阴转；在21例HBV DNA阳性患者中，10例为YMDD野生型，11例出现YMDD基序变异，变异率达18．0％（11／61）。在11例基序变异中，完全变异7例（63．6％），部分变异4例（36．4％）。在完全变异型中，YIDD变异型5例，YVDD变异型2例；在部分变异型中，YIDD变异型3例，YVDD变异型1例。结论CHB患者拉米夫定治疗1年后，出现较高的YMDD基序变异率。利用荧光PCR法结合变性高效液相色谱法检测基序变异，经济便捷，可作为CHB患者YMDD基序变异的常规监测。     

慢性乙肝和乙肝后肝硬化肝脏形态的变化

目的 探讨慢性乙肝和乙肝后肝硬化肝脏MRI形态的变化.方法 对慢性乙肝患者32例、乙肝后肝硬化患者17例及无肝脏疾病的患者(对照组)18例行MR轴位T1W、T2W及动态增强扫描,观察肝脏形态.结果 肝脏表面不规则、肝脏边缘变钝、胆囊窝扩大、肝脏右后切迹征及再生结节能提示肝硬化(P＜0.05),以其中任一种阳性诊断肝硬化,敏感度为99.85％,以其中任两种同时阳性诊断肝硬化,特异度为98.80％～99.96％;上述指标与炎症活动度无关(P＞0.05);肝脏边缘变钝提示早期肝硬化(P＜0.05),其余各指标在对照组和慢性乙肝不同分期、分级间差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 MRI显示的肝脏形态变化能提示乙肝后肝硬化,与肝炎症活动度无关.     

隐匿性慢性乙型肝炎与乙型肝炎病毒重叠基因突变相关性研究

目的：研究拉米夫定（LAM）治疗期间，隐匿性慢性乙型肝炎与乙型肝炎病毒（HBV）重叠基因突变的相关性。方法：利用酶免疫法检测血清HBV标志物乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和表面抗体（抗-HBs）；e抗原（HBeAg）和e抗体（抗-HBe）；利用杂交捕获法检测HBVDNA；利用测序法检测HBV前S区和S区核苷酸序列。评估a决定簇突变对S蛋白抗原性的影响，同时评估HBVYMDD变异情况。结果：LAM治疗前HBsAg、HBeAg和HBVDNA都呈阳性，治疗36个月后HBsAg阴转，而HBeAg和HBVDNA仍呈阳性；将野生型HBV与突变型HBV的s区核苷酸序列进行比较，结果显示前S2基因第23～55位核苷酸序列缺失。S基因区a决定簇发生氨基酸替代突变。HBV聚合酶测序分析显示rtM204位的蛋氨酸为异亮氨酸所替代，提示YIDD突变（rtM204I）。结论：LAM治疗期间HBV重叠基因突变可致HBsAg假阴性，隐匿性慢性乙型肝炎与乙肝病毒重叠基因突变相关。     

恩替卡韦治疗乙型肝炎肝硬化与慢性乙型肝炎96周的疗效

目的观察比较恩替卡韦治疗乙型肝炎肝硬化与慢性乙型肝炎患者96周的疗效。方法收集初治的乙型肝炎肝硬化患者71例(肝硬化组),慢性乙型肝炎患者89例(乙型肝炎组),均给予恩替卡韦0.5mg,每日1次,口服治疗,持续抗病毒治疗96周,观察两组患者在治疗前、治疗第12、24、48、96周时病毒学、血清学、生物化学指标、出凝血时间、Child-Pugh积分及肾功能等变化情况。结果①恩替卡韦治疗后,两组患者乙型肝炎病毒核糖核酸(HBV DNA)、丙氨酸转氨酶(ALT)水平均较治疗前明显下降,发生乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴转及血清学转换的例数逐渐增加,但两组各时间点比较,差异均无统计学意义。②肝储备功能方面,恩替卡韦治疗后,两组患者白蛋白、总胆红素、凝血酶原时间均有不同程度改善,随着治疗的延长,白蛋白不断升高,总胆红素持续下降,凝血酶原时间减小,两组患者治疗48及96周白蛋白、总胆红素、凝血酶原时间及Child-Pugh积分与基线值比较,差异均有统计学意义(P0.05或0.01)。组间比较显示,白蛋白升高水平、总胆红素及凝血酶原时间下降水平在肝硬化失代偿组最高,肝硬化代偿组次之,慢性乙型肝炎组最低,差异均具有统计学意义。③两组患者治疗过程中,均未出现血清肌酐增高超过正常参考值范围情况。结论应用恩替卡韦抗病毒治疗,乙型肝炎肝硬化患者的病毒学、血清学及生化学应答均与慢性乙型肝炎患者相似,同时抗病毒治疗能明显改善各阶段乙型肝炎患者肝储备功能,其中乙型肝炎肝硬化失代偿期患者最为显著。     

恩替卡韦分散片治疗慢性乙型肝炎患者48周疗效观察

目的 观察恩替卡韦分散片抗病毒48周的疗效.方法 60例慢性乙型肝炎患者分为A、B两组,每组各30例,A组口服恩替卡韦片(进口)作为对照组,B组口服恩替卡韦分散片(国产)为试验组,均为0.5 mg/d,疗程48周,分别采用速率法、荧光定量聚合酶链反应(PCR)法、电化学发光法及微粒子发光法检测基线和服药后12、24、48周血清丙氨酸转氨酶(ALT)、HBV DNA、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)及乙型肝炎e抗原(HBeAg),乙型肝炎e抗体(抗-HBe)水平;数据符合参数分析条件的计量资料采用t检验,等级资料的组间比较采用秩和检验,计数组间比较采用卡方检验或Fisher确切概率法,重复测量资料采用重复测量的方差分析.结果 抗病毒治疗48周ALT复常率分别为90.0％(27/30)和86.7％(26/30),(x2=1.172,P＞0.05);A、B两组患者血清HBV DNA水平同步快速下降,组间比较差异无统计学意义(F =5.833,P＞0.05),不同时间点比较差异有统计学意义(F=43.561,P＜0.05);治疗48周时,血清HBV DNA水平测不到率分别为60.0％(18/30)和56.7％(17/30),(X2=0.044,P＞0.05);26例HBeAg(+)患者A、B组各13例,两组分别有2例vs 1例HBeAg阴转,1例vs1例产生抗-HBe,差异均无统计学意义;至48周时,两组HBeAg(+)患者HBsAg水平同步缓慢下降,组间相比无明显差异(F=55.786,P＞0.05),不同时点间比较差异有统计学意义(F =32.241,P＜0.05).A、B两组均无不良反应发生.结论 恩替卡韦分散片为快速、强效、安全、低耐药抗慢性乙型肝炎病毒药物,和进口恩替卡韦片疗效无明显差异.     

Thyroid dysfunction is associated with the loss of hepatitis B surface antigen in patients with chronic hepatitis B undergoing treatment with α-interferon

ObjectiveTo investigate the influence of thyroid dysfunction on the antiviral efficacy of α-interferon in adult patients with chronic hepatitis B (CHB).MethodsWe performed a retrospective study of 342 patients with CHB who underwent interferon treatment for >12 weeks. Patients with thyroid dysfunction before or during treatment were defined as the thyroid dysfunction group (n = 141) and those with normal thyroid function were defined as the normal thyroid function group (n = 201). The prevalences of hepatitis B virus (HBV) DNA undetectability, low hepatitis B surface antigen (HBsAg) titre (<250 IU/mL), HBsAg loss, and hepatitis B envelope antigen loss were compared.ResultsDuring interferon treatment, 69 of 270 (25.6%) participants with normal thyroid function at baseline developed thyroid dysfunction, whereas 11 of 72 (15.3%) with thyroid dysfunction at baseline regained normal thyroid function. The thyroid dysfunction group had significantly higher prevalences of low HBsAg titre (29.8% vs. 18.9%) and HBV DNA undetectability (66.0% vs. 40.3%). Multivariate logistic regression analysis showed that thyroid dysfunction was associated with HBsAg loss (odds ratio 4.945, 95% confidence interval 1.325–18.462).ConclusionsThese results suggest that thyroid dysfunction is not an absolute contraindication, but is associated with HBsAg loss, in patients with CHB undergoing α-interferon treatment.     

Intrafamilial spread of hepatitis B virus infection

Summary Two hundred and forth household contacts of 85 chronic HBsAg carriers were studied to assess the relationship between liver histology and ‘e’ antigen or antibody positivity in the index carrier, and evidence of HBV infection within the family. Liver biopsy results were available in 54 index carriers. The prevalence of HBsAg and anti-HBs in the families of 29 carriers with chronic hepatitis and 25 carriers with either a normal liver or minimal inflammatory changes was not significantly different. Serum from 72 index carriers was available for HBeAg and anti-HBe testing. The prevalence of HBsAg and anti-HBs in the families of 5 HBeAg positive carriers, 59 anti-HBe positive subjects, and 8 carriers negative for both HBeAg and anti-HBe was again not significantly different. Infectivity of a carrier thus does not appear to correlate either with histological evidence of liver damage or with the ‘e’ antigen or antibody positivity of the carrier.     

Study of hepatitis B virus gene mutations with enzymatic colorimetry-based DNA microarray

OBJECTIVES: To establish a modified microarray method for detecting HBV gene mutations in the clinic. DESIGN AND METHODS: Site-specific oligonucleotide probes were immobilized to microarray slides and hybridized to biotin-labeled HBV gene fragments amplified from two-step PCR. Hybridized targets were transferred to nitrocellulose membranes, followed by intensity measurement using BCIP/NBT colorimetry. RESULTS: HBV genes from 99 Hepatitis B patients and 40 healthy blood donors were analyzed. Mutation frequencies of HBV pre-core/core and basic core promoter (BCP) regions were found to be significantly higher in the patient group (42%, 40% versus 2.5%, 5%, P < 0.01). Compared with a traditional fluorescence method, the colorimetry method exhibited the same level of sensitivity and reproducibility. CONCLUSIONS: An enzymatic colorimetry-based DNA microarray assay was successfully established to monitor HBV mutations. Pre-core/core and BCP mutations of HBV genes could be major causes of HBV infection in HBeAg-negative patients and could also be relevant to chronicity and aggravation of hepatitis B.     

血清HBeAg定量检测对慢性乙型肝炎患者核苷(酸)类似物治疗后e抗原血清转换的预测作用

目的 观察HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者核苷(酸)类似物抗病毒治疗后不同时期外周血HBeAg滴度的变化,并探讨其与HBeAg血清转换之间的关系.方法 对22例核苷(酸)类似物抗病毒治疗的HBeAg阳性CHB患者随访2年,分别于抗病毒治疗的基线、12周、24周、48周和96周收集患者的血清,化学发光法定量检测HBsAg、HBeAg水平;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血清HBV DNA载量;同时全自动生化分析仪检测血清ALT水平.结果 抗病毒治疗2年后,7例患者发生HBeAg血清转换,15例患者HBeAg仍为阳性.两组在基线状态下HBV DNA、HBsAg和HBeAg定量无统计学差异(P>0.05).在治疗过程中,发生HBeAg血清转换的患者12周HBV DNA和12周、24周、48周HBeAg滴度的下降率均高于未转换的患者(P<0.05).12周达到HBV-DNA阴转的患者在后期仍有36.4%的概率不发生HBeAg的血清学转换.12周、24周和48周HBeAg水平小于0.976、1.059和0.369(log10 S/CO)以及12周HBeAg较基线下降大于45.3%、48周较基线下降大于82.1%,均可预测2年后e抗原的血清转换,ROC曲线下面积分别是0.833,0.859,0.962,0.872和0.910(P<0.05),敏感性均为83.3%,特异性分别为92.3%,92.3%,100%,92.3%和100%.结论 HBeAg阳性CHB患者核苷(酸)类似物抗病毒治疗后,血清HBeAg定量的快速下降,可作为预测后期HBeAg血清转换的良好指标.