免疫功能低下患者巨细胞病毒性肺炎的诊断和治疗

目的：探讨免疫功能低下患者巨细胞病毒（CMV）肺炎的诊断和治疗. 方法：对31例免疫功能低下患者CMV肺炎的临床资料进行回顾性分析.结果：均接受免疫抑制剂治疗.接受移植手术者27例,死亡7例,CMV肺炎相关病死率22.2%;患有免疫系统疾病者4例,死亡3例,CMV肺炎相关病死率75%.结论：对器官移植患者和长期接受免疫抑制剂治疗的免疫功能低下患者应加强对CMV的监测,早期诊断,及时应用以更昔洛韦为主的综合治疗.     

外周血单个核细胞分离方法探讨

目的 探讨外周血单个核细胞(PBMC)的不同分离方法对分离效果、贴壁能力以及淋巴细胞的增殖活性的影响。方法 取肝素抗凝血，分别用羟乙基淀粉(hydrixyethylstarch，HES)自然沉降法、HES离心沉淀法、Ficoll密度梯度离心法三种方法分离单个核细胞，直接进行贴壁计数及多种细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer，CIK)培养。结果 HES自然沉降法、HES离心沉淀法、Ficou密度梯度离心法分离的PBMC回收率分别为86．4％、86．0％、85．1％。结论 羟乙基淀粉离心沉淀法可有效地分离PBMC。     

慢性HBV感染者肝组织HBV cccDNA的定量检测

目的建立一种肝活检组织中HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）的定量检测方法。方法待检肝组织标本共21份，来源于江苏省人民医院肝脏手术患者，包括19份慢性HBV感染，其中HBeAg（＋）标本10份，HBeAg（-）标本9份，4份非HBV感染为阴性对照组，取HBVDNA阳性的患者外周血作为rcDNA组。检测方法的主要步骤为肝组织经蛋白酶K和细胞裂解缓冲液消化后，用液相抽提法提取核酸，将提取的核酸溶液分为2等份。1份用特异性降解单链DNA的核酸酶加以消化，纯化后使用跨缺口引物和SYBR GreenⅠ荧光染料进行实时荧光定量PCR分析；另1等份则用以定量检测肝细胞看家基因（β-Globin）作为样本细胞参数。检测结果的特异性主要通过PCR反应产物的序列分析及rcDNA组结果的对照进行证实，HBeAg（＋）组和HBeAg（-）组cccDNA水平的差异通过两样本t检验进行分析。结果PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析显示扩增产物的碱基数为350bp左右，DNA测序分析提示产物与目的片段的序列符合率为99％以上，且以rcDNA为对照的结果均为阴性，排除最有可能造成假阳性的rcDNA对结果的干扰。本方法对10mg HBeAg（＋）肝组织标本的cccDNA的检测阳性率为100％。血清HBeAg（＋）的肝组织样本的平均HBV cccDNA水平高于HBeAb（＋）的肝组织标本（P〈0．05）。结论通过上述三种途径证实了本文所建立方法的特异性。应用SYBR GreenⅠ荧光染料和β-Globin作为样本细胞参数所建立的实时荧光定量PCR方法检测肝细胞内HBV cccDNA，具有较高的特异性、敏感性，且成本较低的特点。     

肝病患者的肝组织单细胞悬液与外周血中淋巴细胞亚群的分析比较

目的 探讨肝脏组织单细胞悬液的制备方法,了解慢性肝病患者的肝组织和外周血的淋巴细胞亚群差异.方法 分别选择慢性乙型肝炎（CHB）14例、自身免疫性肝炎（AIH）4例和原发性肝细胞癌（HCC）3例,在超声引导下经皮作肝脏穿刺活检,用单细胞制备仪或物理研磨方法将肝组织制备成单细胞悬液,肝组织中淋巴细胞经4种特异性荧光抗体标记,在流式细胞仪（FCM）上作四色荧光分析,并与外周血测定结果比较.结果 单细胞制备仪和物理研磨方法制备的肝组织单细胞悬液,细胞成活率分别为92.4%和91.5%;检测肝组织单细胞悬液中淋巴细胞亚群,正常对照组和慢性肝病各组间差异均有显著性（P〈0.05）,AIH组和CHB组间差异有显著性（P〈0.05）.而外周血中淋巴细胞亚群检测,HCC组和CHB组间差异有显著性（P〈0.05）.肝组织和外周血相应项目比较差异均有显著性（P〈0.05）.结论 用2种方法制备单细胞悬液能满足FCM检测的特殊需要;肝脏组织中淋巴细胞与外周血的淋巴细胞亚群比例差异有显著性.     

献血者HBV自然感染后抗-HBs阴性的抗-pre-S1/pre-S2免疫应答研究

目的研究HBsAg的抗-preS在HBV自然感染后抗-HBs阴性献血者中的应答情况。方法采用ELISA法从8 265名5项血液学指标合格的献血者中筛选抗-HBs阴性,抗-HBc阳性的个体,然后再检测其抗-preS。结果共筛选抗-HBs阴性,抗-HBc阳性211例,其中抗-pre-S1/pre-S2阳性165例。结论 HBV自然感染后抗-HBs阴性个体大多数产生了针对HBsAg的抗-preS,该抗体具有更为良好的免疫原性;抗-preS检测能对抗-HBs无应答者进行进一步区分,免除不必要的免疫接种。     

拉米夫定对干扰素治疗无效及复发的慢性乙型肝炎疗效观察

1997年 8月～ 1999年 8月间 ,对我院住院及门诊应用ＩＦＮ α治疗无效和复发的部分慢性乙型肝炎病例给予拉米夫定治疗 ,现将结果报告如下。对象和方法一、研究对象慢性乙型肝炎 12例 ,男 9例 ,女 3例 ,年龄在2 5～ 58岁 ,平均 39 7岁。按 1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准分型 ,中度慢性乙型肝炎 9例 ,轻度慢性乙型肝炎 1例 ,活动性肝硬变 2例。所有病例均曾经应用ＩＦＮ α抗病毒治疗 ,总剂量在 150～ 650ＭＩＵ之间。根据患者对ＩＦＮ α抗病毒治疗和治疗结束后半年血清ＡＬＴ水平、ＨＢＶＤＮＡ、Ｈ…     

免疫佐剂增强乙型肝炎核心抗原核酸疫苗免疫应答的小鼠初步实验

目的 观察小鼠实验中免疫佐剂QS－21对乙型肝炎核心抗原（HBcAg)核酸疫苗免疫应答的增强作用。方法 基因枪轰击法接种HBcAg核酸疫苗或对照质粒,皮内注射法给予QS－21;间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠血清抗－HBc(IgG及IgG亚类）水平;^51 铬释 放法检 小鼠脾 细胞特异性CTL杀伤活性。结果 Balb/c和C57BL／6小鼠单用疫苗组和疫苗加QS－21组的血清抗－HBc 终点滴度均分别为1:328050和1:984150;两组的-HBc-I gG亚类均以IgG2a略占优势;当效：靶比为12：1时,Balb/c小鼠单用疫苗组和疫苗加QS－21组的特异性CTL杀伤活性分别为51.1%和63.6%;C57BL／6小鼠两组的CTL杀伤活性分别为53.1%和68.1%。结论 QS－21对HBcAg核酸疫苗所诱导的小鼠特异性抗体及CTL应答均有增强作用。     

南京地区TT病毒感染分子流行病学及临床研究

了解南京地区TTV(transfusion transmitted virus)感染情况,重叠TTV感染对慢性乙型肝炎病变程度和HBV复制的影响。采用巢式PCR(nested polymerase chain reaction)检测血清中TTV DNA。469份血清中,TTV DNA总检出率为21.1％,其中健康人群、献血员、血透患者、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、戊型肝炎、庚型肝炎、非甲-庚型肝炎检出率分别是9．4％、33．3％、30.8％、11.6％、19．9％、15.4％、8．7％、9．5％、34.1％;有28例慢性乙型肝炎合并TTV感染,轻度、中度和重度各组患者中TTV检出率无显著差异,TTV阳性与阴性组之间肝功能改变相近,HBeAg或TTV DNA阳性与阴性组之间TTV检出率相当。结论：南京地区存在TTV感染,TTV是导致非甲-庚型肝炎的重要原因,TTV可能存在非血源性传播途径;慢性乙型肝炎重叠TTV感染对病变程度和HBV复制无明显影响。     

新型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白核酸疫苗的免疫原性研究

目的 观察新型乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原中蛋白（MHBs)核酸疫苗的免疫原性。方法 以新型人体应用载体质粒pSW3891构建MHBs核酸疫苗（pSW3891/MHBs/adr)，对照组和实验组Balb/c小鼠分别基因枪法免疫对照载体质粒（pSW3891)和MHBs核酸疫苗，采用酶联免疫吸附试验检测抗HBs,LDH释放测定法检测小鼠特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）杀伤活性。结果 MHBs核酸疫苗可在体外高效表达，免疫小鼠后可产生高滴度抗HBs，血清阳性终点滴度达1：97200,小鼠脾细胞HBs特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤活性达78.81%。结论 新型MHBs核酸疫苗在Balb/c小鼠实验中表现出良好的体液和细胞免疫原性。