获得性免疫缺陷综合征的流行病学研究进展

获得性免疫缺陷综合征AIDS,又称爱滋病。1984年美国Gallo 实验室从AIDS 和前AIDS 病人末梢血淋巴细胞中分离培养出一株病毒,命名为嗜人T 细胞病毒Ⅲ型(HTLV-Ⅲ),病人血清中89～100%查到HTLV一Ⅲ抗体。同时期法国巴斯德研究所Montagnier 等从持续性全身淋巴病(LAS)病人淋巴结中也分离到一株病毒命名为淋巴结病相关病毒(LAV),     

大鼠骨髓间质干细胞体外分离培养及生物学特性研究

目的：建立大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)体外分离培养方法，并对大鼠MSCs的生物学特性进行研究。方法：分离5～8周龄的大鼠股骨骨髓进行体外培养，取5代以后的MSCs观察形态特征，绘制生长曲线，进行细胞化学染色，并用流式细胞仪检测其表面标志和进行细胞周期分析。结果：大鼠MSCs细胞形态呈长梭形或多边形，细胞生长曲线呈S形，群体倍增时间为30h，细胞化学染色显示碱性磷酸酶(ALP)、过氧化物酶(POX)、苏丹黑B(SB)阴性，而*醋酸萘酚醋酶(α-NAE)与糖原(PAS)阳性，流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD90表达阳性，而CD34、CD38、CD45表达阴性；细胞周期分析显示，G0／G1期：79．48％，G2／M期：6．10％，S期：14．42％。结论：本方法分离纯化出的是MSCs，其在体外具有生长稳定，增殖较快的特点，是组织工程研究中良好的细胞来源，也是转基因研究优良的载体细胞。     

树突状细胞的发育、亚群及其对T细胞应答类型的调控

树突状细胞 (DC )的发育可分为未成熟和成熟两个阶段 ,未成熟DC在捕捉抗原后向外周淋巴组织的T细胞区迁移并成熟 ,成熟DC能表达丰富的MHC分子和协同刺激分子。未成熟DC通过诱导无能的和调节性T细胞导致免疫耐受 ,而成熟DC具有超强的激活初始T细胞能力。DC至少可分为三个亚群 ,不同亚群的DC在激活Th1/Th2、CTL应答方面存在差异 ,但最近的研究显示DC对T细胞应答类型的调控受多种因素的综合影响 :包括微生物的产物或佐剂、DC表面的信号受体、DC亚群、局部的微环境和附近T细胞及其他细胞产生的细胞因子。因此 ,目前认为DC的功能具有可塑性     

抗SARS冠状病毒M蛋白片段单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的:制备抗SARS冠状病毒(SARS-CoV)M蛋白N端1~43氨基酸(aa)单克隆抗体(mAb),并对其特性进行初步鉴定。方法:用纯化的SARS-M/GST融合蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗M蛋白片段的mAb。用间接ELISA法筛选能分泌抗M蛋白片段mAb的杂交瘤细胞株。Westernblot和间接ELISA鉴定所获mAb的特异性,并用小鼠mAb亚类测定试剂盒检测所获的mAbIg亚类。为分析mAb识别位点,进一步将M蛋白片段截短为部分重叠的2段表达,以Westernblot初步定位mAb识别位点。结果:获得1株可分泌特异性抗SARS-CoVM蛋白片段的mAb杂交瘤细胞株(3H9),Ig亚类鉴定为IgG2a,轻链为κ型。Westernblot显示其mAb可特异识别SARS-CoVM蛋白N端1~43aa,间接ELISA证实mAb可与包被于聚苯乙烯微孔板上的SARS病毒全蛋白抗原发生特异性反应,其识别位点位于M蛋白N端16~28aa。结论:成功获得1株抗SARS-CoVM蛋白N端1~43aamAb杂交瘤细胞,并初步定位其识别位点。     

EB病毒LMP2A特异性CTL的体外诱导及分析

用EBV LMP2A重组痘苗病毒 (rVV LMP2A )转染人树突状细胞 (DC ) ,转染后的DC分别在第 1、 7、 14天刺激相同MHC背景的T细胞 ,在IL 2作用下诱导LMP2A特异性CTL。用LDH释放法检测CTL杀伤活性 ;流式细胞术 (FACS )检测CTL诱导分化过程中CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 、CD5 6 + 等细胞的分群变化 ;RT PCR检测细胞分化过程中FasLmRNA表达 ;生物活性法检测功能性细胞因子IFN γ的分泌。结果显示本法诱导的CTL对靶细胞有特异性杀伤活性 ,第 2次和第 3次DC刺激后杀伤活性有所上升 ;在CTL诱导分化的第 7、 14、 2 1天细胞分群以CD4 + 、CD8+ 细胞为主 ;RT PCR证实所诱导的细胞内有FasLmRNA的表达 ;随细胞培养天数的增加IFN γ分泌增加 ,在第 14天达到较高水平。研究表明重组痘苗病毒载体rVV LMP2A转染的DC刺激T细胞可诱导出EBV LMP2A特异性CTL。     

单核巨噬细胞对HSV－1的抵抗及LPS、BCG对其的影响

以ＨＳＶ－１接种人单核细胞系Ｕ９３７和小鼠腹腔巨噬细胞，通过病毒感染滴度测定，间接荧光抗体试验检测病毒抗原及多聚酶链反应检测病毒基因，在体外实验中研究了单核巨噬细胞对ＨＳＶ－１的抗性及其影响因素。结果证实，Ｕ９３７和小鼠腹腔巨噬细胞均能逐步清除ＨＳＶ－１，从感染中恢复；１０～２０μｇ／ｍｌＬＰＳ处理细胞能削弱细胞的抗性、促进病毒基因表达，而５μｇ／ｍｌＢＣＧ能增强细胞的抗性、加速病毒的灭活和清除。     

M-CSF和IL-10对人单核细胞表面分子表达的影响

本文采用流式细胞术检测人外周血单核细胞表面CD14、CD2 3、CD6 4、CD11b、CD18、CD2 9表达 ,研究巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF )和白细胞介素 (IL ) 10对单核细胞炎症效应和免疫效应功能的影响。结果显示 ,(1)M CSF诱导单核细胞表面CD14及CD2 3分子的表达 (P <0 0 5 )。IL 10抑制CD2 3的表达 ,促进CD6 4的表达 ,并协同M CSF诱导单核细胞CD14的表达 ,拮抗M CSF对CD2 3的诱导作用。M CSF能协同IL 10对单核细胞CD6 4的诱导作用 ;(2 )M CSF能诱导单核细胞表面CD11b及CD18的表达 (P <0 0 5 )。结论 :M CSF通过促进单核细胞表面CD11b、CD18、CD14、CD2 3的表达及协同促进CD6 4的表达而促进单核细胞粘附、炎性渗出、IgG及IgE依赖的细胞杀伤和吞噬功能 ,促进单核 巨噬细胞在炎症反应、体液免疫应答效应阶段发挥效应细胞功能。IL 10通过促进CD6 4的表达 ,增强体液免疫应答效应阶段单核 巨噬细胞的免疫效应功能 ,但通过抑制CD2 3的表达 ,下调IgE介导的体液免疫效应。     

IL-4对DC产生IL-12影响的研究

为了研究白细胞介素 4 (IL 4 )对树突状细胞 (dendriticcell,DC )产生白细胞介素 1 2 (IL 1 2 )p70的调节作用及其机制 ,将小鼠骨髓细胞在含GM CSF和IL 4的培养液中培养 6d ,加入成熟诱导剂脂多糖 (LPS )或TNF α、CpG ODN继续培养 2d以获得成熟DC。流式细胞仪检测DC表面CD80和MHCII类分子 ,混合淋巴细胞反应检测DC促进同种异体T细胞增殖的能力 ,ELISA法检测不同诱导剂诱导DC产生IL 1 2p70的能力 ,RT PCR和荧光定量PCR检测IL 1 2p35和p4 0mRNA的表达及其变化。结果显示小鼠骨髓细胞在含GM CSF、IL 4和成熟诱导剂的培养液中培养后可以获得成熟的DC ,成熟DC高表达CD80和MHCII类分子 ,具有较强的刺激同种异体T细胞增殖的能力 ,LPS、CpG ODN、TNF α、PolyI:C在促进DC成熟的同时能诱导DC产生有活性的IL 1 2 ,IL 4对IL 1 2的产生具有明显的促进作用 ,RT PCR和荧光定量PCR结果显示LPS诱导IL 1 2产生以及IL 4对其的促进作用与IL 1 2p35基因的转录水平增高有关     

Partial Sequence Analysis of the Genome of Human Herpesvirus 7 YY5 Isolated from Saliva Samples

Ｈｕｍａｎｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ 7(ＨＨＶ 7)ｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｒｅｃｅｎｔｌｙｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｍｅｍｂｅｒｏｆｔｈｅｈｅｒ ｐｅｓｖｉｒｕｓｆａｍｉｌｙ .Ｉｔｗａｓｆｉｒｓｔｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍａｃｔｉｖａｔ ｅｄＣＤ4 Ｔｃｅｌｌｓｆｒｏｍｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕ ｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ (ＰＢＭＣｓ)ｏｆａｈｅａｌｔｈｙｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ[1] ,ａｐａｔｉｅｎｔｗｉｔｈｃｈｒｏｎｉｃｆａｔｉｇｕｅｓｙｎｄｒｏｍｅ(ＣＦＳ) [2 ] ,ａｎｄｆｒｏｍｓａｌｉｖａｏｆｈｅａｌ…     

MyoD基因诱导大鼠心脏成纤维细胞分化为成肌细胞的实验研究

目的：探讨MyoD基因诱导大鼠心脏成纤维细胞分化为成肌细胞的可能性。方法：将MyoD基因重组腺病毒载体转染大鼠心脏成纤维细胞，观察转染后大鼠心脏成纤维细胞形态的变化；用RT-PCR和Western blot方法检测MyoD和肌细胞生成素的表达；免疫组化检测骨骼肌肌球蛋白和结蛋白的表达。结果：MyoD基因转染后的大鼠心脏成纤维细胞形态和排列方式发生明显变化；RT-PCR可检测出转染后细胞表达MyoD；Western blot结果表明转染后细胞表达MyoD和肌细胞生成素；免疫组化检测骨骼肌肌球蛋白和结蛋白表达均为阳性。结论：MyoD基因可诱导体外培养的大鼠心脏成纤维细胞分化为成肌细胞，为进一步研究MyoD对心肌损伤的修复作用奠定了基础。