人肠道病毒71型和科萨奇病毒A组16型所致手足口病的主要临床表现和预后

目的:人肠道病毒71型(human Enterovirus 71,EV71)和科萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,Cox A16)是引起手足口病的主要病毒病原,本文比较了两种病毒致手足口病的主要临床表现及其预后?方法:收集2011年1月至6月南京医科大学附属南京市儿童医院手足口病患者共570例的临床资料及咽拭子标本,采用实时荧光探针PCR法检测患者的咽拭子标本的病毒类型,比较EV71和CoxA16两种病毒引起的手足口病的主要临床表现及其预后?结果:350例EV71感染患者平均年龄(2.5 ± 1.7)岁,220例Cox A16感染患者平均年龄(2.3 ± 1.3)岁?EV71感染患者的住院时间长(P < 0.01);发热超过39℃且持续时间长(P < 0.001);肌阵挛性反射?口腔溃疡都明显偏高(P < 0.05);咳嗽?热性惊厥明显偏低(P < 0.05);嗜睡等中枢神经系统感染的临床表现明显偏高(P < 0.05),其中EV71感染患儿经治疗后有3.7%留有四肢肌力下降等后遗症,并有5例死于心肺衰竭;CoxA16感染的患者经过治疗后都治愈且没有留下后遗症?结论:南京地区2011年1月到6月引起的手足口病病毒以EV71为主?相对于Cox A16,EV71引起的临床表现严重?预后差?     

人疱疹病毒6型感染与口腔鳞癌相关性的研究

目的 :研究人疱疹病毒 6型 (HHV 6)感染与口腔鳞癌的关系。方法 :用间接免疫荧光试验及聚合酶链反应 ,分别检测口腔鳞癌和对照组患者血清中抗HHV 6IgG及外周血单个核细胞中HHV 6DNA序列 ;用免疫组化染色法 ,检测口腔鳞癌组织标本中HHV 6抗原。结果 :16例口腔鳞癌患者和 16例其他口腔疾病患者血清中抗HHV 6IgG的阳性率分别为 10 0 .0 %和 75 .0 % ,几何平均滴度分别为 1∶118和 1∶64 ,差异有显著意义 (P <0 .0 5 )。上述 2组患者HHV 6DNA的检出率分别为 62 .5 %和 12 .5 % (P <0 .0 5 )。其中 12例口腔鳞癌组织标本经免疫组化染色检测 ,9例 ( 75 % )HHV 6抗原阳性 ,而 8例对应癌旁组织中 ,阳性者仅 2例( 2 5 % ) ,两者间差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :HHV 6可能是口腔鳞癌发生的诱因 ,在肿瘤发生发展中起一定作用     

人类疱疹病毒6型与口腔鳞癌发生的相关性研究及临床意义

目的研究人类疱疹病毒6型(HHV-6)感染与口腔鳞癌发生的相关性及其临床意义。方法运用巢式PCR技术,检测82例口腔鳞癌、25例癌前病变及40例正常对照人群唾液、血液、组织中HHV-6感染情况。结果正常对照组、癌前病变组、鳞癌组HHV-6在唾液中的检出率分别为45.0%、56.0%、72.0%,在血液中的检出率分别为22.5%、48.0%、57.3%,总阳性率为47.5%、56.0%、80.5%,趋势差异均具统计学意义(P<0.05);3组HHV-6检出率唾液普遍高于血液,在正常组和鳞癌组中差异具统计学意义(P<0.05)。鳞癌组癌组织中HHV-6检出率(78.95%)显著大于癌旁正常组织(10.53%),具统计学意义(P<0.01);随着鳞癌分化程度的降低,HHV-6的阳性率有下降的趋势,但无统计学差异(P>0.05)。结论唾液腺是HHV-6长期潜伏和增殖的部位,唾液是其主要的传播媒介;HHV-6的激活/再感染发生在黏膜病变的早期,其感染与口腔鳞癌的发生存在相关性,可能直接参与了细胞癌变的过程。     

快速老化模型小鼠树突状细胞的分化及其功能研究

目的研究机体老化对树突状细胞(DCs)分化和功能的影响,为抗衰老、老年性疾病的治疗提供新思路。方法体外培养快速老化小鼠(SAMP1)骨髓来源的DCs,同时用来自同一基因型的正常小鼠(C3H/HeJ)做对照,研究SAMP1小鼠的DCs分化能力及成熟DCs促淋巴细胞增殖的能力。结果流式细胞仪分析显示,SAMP1小鼠和C3H/HeJ小鼠骨髓来源的成熟DCs表达CD80和MHCⅡ类分子的能力无统计学差异。淋巴细胞的增殖实验结果提示伴刀豆球蛋白A(ConA)组和核苷酸(CPG)组差异无显著性,仅内毒素(LPS)组有显著差异,且老化小鼠具有更强的刺激能力。结论老化小鼠骨髓来源的DCs的分化及功能并无明显下降。     

埃泼斯坦-巴尔病毒潜伏膜蛋白2A特异性细胞毒性T淋巴细胞的体外诱导研究

目的：利用含埃泼斯坦-巴尔病毒(Epstein—Barr virus，EBV)潜伏膜蛋白2A重组痘苗病毒(rVV—LMP2A)感染的人树突状细胞(DC)体外诱导EBV—LMP2A特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法：rVV—LMP2A感染的DC分别在培养第1、8天刺激相同MHC背景的人外周血单个核细胞(PBMC)，在IL-2作用下体外诱导EBV特异性CTL。培养第15天乳酸脱氢酶法检测CTL的特异性杀伤活性。结果：诱导的CTL对rVV—LMP2A感染的靶细胞在效靶比为5：1、10：1和15：1时，特异性杀伤率分别为63．5％、65．5％和67．9％。结论：rVV—LMP2A感染的DC刺激相同MHC背景的PBMC可诱导出较高杀伤活性的EBV特异性CTL。     

含EB病毒LMP2A毕氏酵母表达载体的构建与表达LMP2A蛋白的检测

目的：构建EB病毒潜伏膜蛋白2A的表达载体，并在真核生物毕氏酵母细胞中表达。方法：用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ将含LMP2A全长编码基因的质粒PCIcc双酶切后，克隆到毕氏酵母载体PICZαA中，构建重组表达质粒pPICαA—LMP2A。pICZαA—LMP2A经SAC Ⅰ酶切线性化，采用氯化锂的方法转化毕氏酵母GS115，经YPD平板Zeocine抗性筛选获得LMP2A阳性克隆的菌株，用PCR鉴定阳性酵母转化子，并分别将阳性的酵母转化子在BMGY和BMMY培养基中进行诱导表达，表达产物进行SDS—PAGE电泳和westem—b10tting分析。结果：重组质粒pPICZαA—LMP2A经PCR和酶切鉴定为阳性。SDS—PAGE电泳和west-em-blotting结果显示表达蛋白的相对分子量为54Kda，与预计值相同。结论：构建了LMP2A毕氏酵母表达载体，并在酵母细胞中成功表达。     

西安市儿童和育龄期妇女中人疱疹病毒6型的血清流行病学调查

用人疱疹病毒 6型 (HHV 6 )国内分离株建立的间接免疫荧光试验 (IFA)方法 ,对西安市区儿童和育龄期妇女中HHV 6的感染和免疫水平状况进行调查。1.对象与方法 :①研究对象 :111份儿童血清标本采自1997年 5月至 1999年 4月唐都医院小儿科门诊及住院儿童 ;116份妇女血清标本采自 1998年 10月至 1999年 4月西京医院妇产科门诊体检妇女 ,年龄在 2 2～ 31岁 ,无内外科合并症 ,其中 84份为孕妇标本 ,32份为正常未孕妇女标本。②HHV 6抗原片的制备 :将Ficoll密度梯度离心法分离的脐带血单个核细胞在含植物血凝素和重组白细胞介素 2及 10 %小牛…     

人疱疹病毒6型感染与白血病关系的初步研究

白血病是来源于造血系统的一种恶性肿瘤，好发于儿童和青少年，其病因和发病机制尚不完全清楚，但病毒病因学较受重视。人疱疹病毒6型(HHV-6)是1986年发现的疱疹病毒科中的一个新成员。研究发现，HHV-6的感染与淋巴瘤的发生有一定关系，在白血病患者中具有较高的感染率。为了探讨HHV-6感染与白血病的关系，我们采用间接免疫荧光试验(IFA)和PCR，分别检测了白血病患者血清抗HHV-6 IgG和外周血单个核细胞(PBMC)中HHV-6 DNA的序列。     

乙型肝炎病毒C基因重组逆转录病毒的构建和在真核细胞的表达

目的　构建含HBVC基因的重组逆转录病毒以用于慢性乙型肝炎的免疫治疗。方法　用PCR法扩增HBV的C基因片段 ,定向插入逆转录病毒质粒载体pLXSN中 ,重组质粒用脂质体转染包装细胞PT67,G418筛选抗性细胞 ,用抗性细胞培养上清液中的重组病毒感染NIH3T3、EL4和鼠骨髓来源的树突状细胞 (DC) ,用PCR检测目的基因的插入 ,用间接免疫荧光和流式细胞仪检测目的基因的表达 ,基因修饰的DC免疫C57BL 6鼠观察其诱导细胞免疫的能力。结果　含HBVC基因重组质粒载体经PCR、酶切和序列分析鉴定为阳性 ,转染PT67后经G418筛选获得抗性细胞 ,抗性细胞培养上清液中含有重组逆转录病毒 ,病毒效价达 3× 10 5CFU ml,感染NIH3T3和EL4细胞后PCR鉴定含目的基因 ,间接免疫荧光、流式细胞仪鉴定有HBcAg表达 ,基因修饰后的DC免疫C57BL 6鼠能诱导特异性CTL应答。结论　构建的HBVC基因重组逆转录病毒可将目的基因转移至真核细胞并得到有效表达     

EB病毒潜伏期膜蛋白2A重组腺病毒的制备及表达

目的 :构建EB病毒潜伏期膜蛋白 2A重组腺病毒 ,研究EB病毒相关肿瘤治疗性疫苗。方法 :利用RT PCR扩增出EB病毒B95 8株潜伏期膜蛋白 2A(LMP2A)全部编码蛋白的基因 ,并克隆至pGEM T载体中。并将LMP2AcDNA插入E1、E3区替代的腺病毒载体pAX1CW ,选择正确的克隆pAX1CW LMP2A与Ad5DNA 末端肽复合体共转染 2 93细胞 ,通过同源重组获得复制缺陷型的重组腺病毒。提取重组腺病毒转染的 2 93细胞DNA ,通过酶切初步鉴定。选择阳性克隆感染CV1细胞 ,通过流式细胞仪和激光共聚集显微镜分析LMP2A蛋白表达情况。结果 :挑选同源重组 17个克隆中有 9个为阳性克隆 ,扩增到的病毒滴度为 2 3× 10 8pfu/ml。用MOI =10 0的重组腺病毒感染CV1细胞 ,48h后在激光共聚焦显微镜下可见LMP2A蛋白表达于CV1细胞膜上 ,经流式细胞仪检测LMP2A蛋白表达阳性细胞数为 94 4 %。结论 :重组腺病毒能有效地介导LMP2A基因的表达 ,为进一步研究该基因功能及其工程疫苗打下了基础。