SARS-CoV N基因重组腺病毒对树突状细胞前炎症细胞因子mRNA表达和分泌的影响

目的 探讨严重急性呼吸综合征相关的冠状病毒(SARS-CoV)感染后炎症细胞因子的mRNA表达和分泌水平的动态变化,在蛋白质水平上阐明SARS-CoV的致病机理.方法 本研究在建立树突状细胞(dendritic cells,DC)培养方法的前提下,利用SARS-CoV的N基因重组腺病毒(rAd-N)和对照的腺病毒(rAd-LacZ)来感染成熟的DC,用RT-PCR和ELISA法检测DC对IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-a的mRNA表达和分泌水平的变化.结果 IL-6和TNF-a mRNA的表达和分泌水平在前24 h之内是逐渐升高的,与对照组(rAd-LacZ感染)相比,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 SARS-CoY的N蛋白与SARS的急性期DC分泌过量的前炎症细胞因子有关.     

gp96蛋白影响HHV⁃6 gB糖蛋白的成熟

目的：寻找与糖蛋白96（glycoprotein 96,gp96）相互作用的人疱疹病毒6型（human herpesvirus 6,HHV?6）的病毒因子,并研究其相互作用对病毒感染的影响。方法：通过免疫共沉淀、Western blot以及激光共聚焦显微镜寻找并验证gp96和HHV?6糖蛋白B（glycoprotein B,gB）的相互作用;提取外泌体检测gp96过表达对HHV?6 gB成熟的影响。结果：免疫共沉淀实验发现HHV?6 gB和gp96有相互作用;激光共聚焦证实gB和gp96在空间上共定位; Western blot确认gp96过表达会影响gB的成熟。结论：gp96蛋白与HHV?6 gB糖蛋白特异性结合,并且影响HHV?6 gB的成熟。     

逆转录病毒介导乙型肝炎病毒C基因在树突状细胞中的转移

目的：探讨逆转录病毒介导乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因在骨髓来源的树突状细胞(DC)的转移效率，以及对DC成熟和功能的影响。方法：用含有HBV C基因的重组逆转录病毒载体，感染处于分裂期的小鼠骨髓祖细胞，感染后的骨髓细胞在GM—CSF和IL—4存在的条件下继续培养获得成熟的DC，用PCR、RT—PCR，分析目的基因的整合与转录；用Western blot和流式细胞仪，分析HBcAg的表达及基因转移效率，以及检测感染前后DC CD80和MHC—Ⅱ类分子的表达以及分泌IL—12能力的变化；通过将基因转移后的DC与淋巴细胞进行混合培养，检测其体外诱导CTL的能力。结果：逆转录病毒感染后并不影响骨髓来源的DC成熟，对其表面分子CD80和MHC-Ⅱ类分子的表达和分泌IL-12的能力没有影响。目的基因能整合到DC的基因组DNA中，并能转录和翻译。约28％的DC能表达HBcAg，感染后的DC体外能诱导T细胞应答。结论：逆转录病毒能有效地将HBV C基因转移到骨髓来源的DC中，对DC的成熟和功能无明显影响，并能诱导CTL应答，这将有助于开展以DC为基础的慢性乙肝的免疫治疗。     

膦乙酸治疗家兔单疱性角膜炎的实验性观察

报道角膜接种Ⅰ型单疱病毒(HSV-Ⅰ)形成实验性家兔单疱性角膜炎,用1％和2％膦乙酸(PAA)治疗均育疗效,并证明用药愈早,疗效愈佳,和其他抗病毒药比较,PAA疗效与α-干扰素相同,而略好于疱疹净(IDU)和环胞苷(CC)。     

人CD4分子cDNA的克隆及序列分析

目的：克隆人的CD4基因，为进一步研究病毒感染CD4^ 细胞的分子机制奠定基础。方法：用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出SupT1细胞株的编码CD4蛋白分子全长的基因，克隆至质粒pAS2—1中，并转入大肠杆菌DF15α。通过Amp抗性筛选、PCR及限制性内切酶EcoRⅠ，BamH Ⅰ双酶切等鉴定重组质粒并测定其中编码CD4片段的核苷酸序列。结果：克隆出编码CD4蛋白分子全长的cDNA，测序结果与文献报道进行同源比较，序列基本一致。结论：本实验成功克隆了编码人CD4蛋白全长的cDNA片段。     

痘苗病毒载体介导爱泼斯坦-巴尔病毒潜伏期膜蛋白2A基因转染树突状细胞对其功能的影响

目的：探讨痘苗病毒载体介导爱泼斯坦－巴尔病毒（EBV）潜伏期膜蛋白2A（LMP2A）基因转染树突状细胞（DC）对DC的表型和功能的影响，以及EBV相关肿瘤免疫治疗性疫苗的可行性，方法：用EBV－LMP2A基因重组痘苗病毒（Vac-LMP2A)转染成熟的DC，流式细胞术（FACS）检测转染前后DC表面分子CD1a,CD83,CD40,CD80,HLA-DR变化，3H－TdR掺入法检测转染前后DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖等功能的改变。结果：转染后LMP2A蛋白在DC细胞内高表达，Vac-LMP2A转染成熟DC前后对其表面共刺激分子及特征性表面标志无影响，转染后的DC仍具有较强的刺激同种异体TI林巴细胞增殖的能力。结论：痘苗病毒载体是介导外源基因LMP2A转染DC的有效载体，Vac-LMP2A转染成熟DC对DC表型和功能无明显影响，是EBV相关肿瘤如鼻咽癌免疫治疗的理想载体。     

人巨噬细胞集落刺激因子(hM-CSF)对60C0γ射线照射后小鼠血细胞生成的影响

本文研究了人巨噬细胞集落刺激因子(hM-CSF)对经亚致死剂量⁶⁰COγ射线照射后小鼠血细胞生成的影响。细胞生成的影响。结果显示hM-CSF可刺激照射后小鼠CFU-M和CFU-S的形成,并增加BMC的数量。hM-CSF还可以增加照射小鼠外周血白细胞的总数,且增加的白细胞主要为单核细胞和中性粒细胞。hM-CSF对外周血红细胞和血红蛋白的影响无显著意义.上述结果提示hM-CSF可促进⁶⁰Coγ射线照射小鼠造血功能的恢复。     

莲必治注射液(穿心莲内酯)对免疫功能的调节作用

目的 :研究穿心莲内酯对免疫功能的影响 ,探索其发挥作用的免疫机制。方法 :采用生物活性法和ELISA法检测用有效成分为穿心莲内酯的莲必治注射液处理人外周血单个核细胞上清中的IFN α、IFN γ、TNF α、IL 8含量 ;用单核巨噬细胞巨噬鸡红细胞来研究其促吞噬功能以及用LDH释放法检测其对NK细胞杀伤活性的影响。结果 :和空白对照组比 ,莲必治注射液作用外周血单个核细胞能显著诱导IFN α、IFN γ、TNF α产生 (P <0 .0 5 ) ,但对IL 8诱生无明显影响 ,甚至轻度抑制。莲必治注射液能提高豚鼠腹腔单核巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率 (P <0 .0 5 )及提高人外周血中NK细胞杀伤K5 6 2细胞的活性 (P <0 .0 5 )。结论 :穿心莲内酯是一种具有调节机体非特异免疫功能的免疫刺激剂 ,通过对NK、MΦ及细胞因子分泌的影响而发挥免疫调节作用