健康教育对长期住院慢性精神分裂症患者康复效果的影响

为了提高患者的生活质量,促进患者早日康复,我们积极开展健康教育的探索,现报告如下。对象与方法1.对象。随机抽取我院1个病区的60例患者作为入组对象。入组标准:(1)符合CCMD-Ⅱ-R精神分裂症的诊断标准。(2)病程≥10a,住院时间≥2a。(3)阴性症状评定量表(SANS)总分<52分[1],能进行有效交谈。将60例患者随机分为实验组和对照组,2组患者均为男性,年龄、病程、住院时间、文化程度、SANS评分、用药等统计学处理,差异无显著性(P>0.05)。2.方法。所有患者入组后常规用药,实验组实施健康教育12周,其他护理和对照组相同。(1)评定。由2名主管护…     

CDCP1基因重组慢病毒表达载体的构建及其对宫颈癌细胞增殖与迁移的影响

目的: 构建含CUB结构域包含蛋白1（CUB domain containing protein 1,CDCP1）基因的重组慢病毒表达载体,研究CDCP1蛋白对宫颈癌细胞增殖与迁移的影响。方法: 以人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）cDNA为模板,采用PCR法扩增出CDCP1基因,将其克隆至pHAGE CMV MCS IzsGreen载体中,构建重组慢病毒表达载体pHAGE-CDCP1。将重组质粒pHAGE-CDCP1以及对照质粒pHAGE分别与包装质粒psPAX2以及包膜质粒pMD2.G共转染入人胚肾上皮细胞（293 T细胞）,48 h后收集病毒悬液,并采用梯度稀释法测定病毒滴度。将重组慢病毒CDCP1感染人宫颈癌HeLa细胞,通过免疫印迹法检测CDCP1蛋白的表达,采用CCK-8实验检测过表达 CDCP1对 HeLa 细胞增殖的影响;采用划痕实验和Transwell细胞迁移实验观察过表达CDCP1对HeLa细胞迁移能力的影响。结果： 质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果证实重组质粒pHAGE-CDCP1构建成功。重组pHAGE-CDCP1慢病毒感染宫颈癌HeLa细胞后细胞状态良好,CDCP1蛋白表达水平明显增加。高表达CDCP1可以显著提高HeLa 细胞的增殖和迁移能力。结论： 过表达CDCP1能够促进宫颈癌 HeLa 细胞的增殖和迁移。     

吉林省延边州1991～1996年淋病流行病学分析

吉林省延边州１９９１～１９９６年淋病流行病学分析孙相德卢春爱张家亮近几年来，淋病作为８种主要监测性病之一，传播快，覆盖面最广。１９９１年以来延边州８个县市登记报告淋病患者６５１０例。现将流行情况分析如下。１发病情况延边州１９９１～１９９６年累计报告淋...     

精神科三班倒护士与非三班倒护士生活质量比较研究

目的 调查精神科三班倒护士的工作压力状况及对生活质量的影响.方法 选择77名精神科三班倒护士作为研究组,73名非三班倒护士作为对照组.对其工作压力和相关情况及生活质量进行调查,比较两组护士工作压力的程度及生活质量的状况,探索影响三班倒护士工作压力及生活质量的因素.结果 研究组护士在护士工作压力量表的5个压力源维度中,护...     

人乳头瘤病毒E6蛋白通过上调氯离子蛋白通道5的表达促进宫颈癌细胞迁移

目的: 探讨人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）E6蛋白与氯离子通道蛋白5（chloride voltage gated channel 5,CLCN5）之间的关系以及CLCN5对宫颈癌细胞迁移的影响。方法: 采用RNA干扰技术敲低HPV E6基因,实时荧光定量PCR（RT qPCR）和蛋白质印迹法检测敲低HPV E6后宫颈癌HeLa细胞中CLCN5 mRNA及蛋白的表达水平。通过PCR扩增CLCN5基因片段,并将其克隆至表达载体pCDNA3.1 3×Flag（简称pCDNA3.1）质粒中,构建重组质粒pCDNA3.1 CLCN5。将目的质粒pCDNA3.1 CLCN5及其对照pCDNA3.1质粒分别转染宫颈癌HeLa细胞,蛋白质印迹法检测CLCN5蛋白的表达。Transwell迁移实验检测过表达CLCN5对宫颈癌HeLa细胞迁移的影响。同时,将CLCN5的小干扰RNA及其阴性对照分别转染宫颈癌HeLa细胞,Transwell迁移实验检测敲低CLCN5对宫颈癌HeLa细胞迁移的影响。结果： RT qPCR和蛋白质印迹检测结果显示,敲低HPV E6可显著降低CLCN5的mRNA和蛋白表达水平。质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果证实重组质粒pCDNA3.1 CLCN5构建成功。蛋白质印迹检测结果显示CLCN5蛋白在宫颈癌HeLa细胞中被有效过表达或敲低。Transwell迁移实验结果表明,过表达CLCN5可促进宫颈癌细胞的迁移,敲低CLCN5可抑制宫颈癌细胞的迁移。 结论： HPV E6蛋白通过上调CLCN5的表达促进宫颈癌细胞迁移。     

分泌性HIV-1 Nef-EGFP融合蛋白表达载体的构建与鉴定

目的： 构建含有人类免疫缺陷病毒I型（human immunodeficiency virus type I,HIV-1）负性调节因子（negative regulation factor,Nef）和增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因的重组融合蛋白分泌性表达载体,并检测该融合蛋白在真核细胞中的表达及其在培养上清中分泌情况,为进一步研究Nef功能奠定基础。方法： 利用PCR扩增出HIV-1 Nef和EGFP基因,插入到分泌性表达载体pSecTag2B中。构建的pSecTag2B-Nef-EGFP融合蛋白表达质粒,转染293T细胞,荧光显微镜下观测细胞中Nef-EGFP融合蛋白的表达。收集细胞及上清液,蛋白质印迹和ELISA法分别检测Nef-EGFP融合蛋白的表达及其分泌。结果： 限制性内切酶酶切鉴定和核酸序列测定证实,成功构建了含有Nef-EGFP基因的分泌性表达载体,该质粒转染293T细胞后,蛋白质印迹法能够检测到Nef EGFP融合蛋白的表达条带,ELISA法检测上清液中目的蛋白分泌量为1.7 ng/ml。结论： 成功构建含有Nef-EGFP的融合蛋白表达质粒,融合蛋白Nef EGFP在293T细胞中获得表达,并能分泌到胞外。     

KSHV抗凋亡蛋白vFLIP编码基因的克隆表达及抗vFLIP多克隆抗体的制备与鉴定

目的： 制备由卡波济肉瘤相关疱疹病毒（Kaposi′s sarcoma associated herpesvirus,KSHV）编码的病毒FLICE抑制蛋白（viral FLICE inhibitory protein,vFLIP）的多克隆抗体,通过vFLIP重组蛋白对该抗体特异性进行鉴定,并将此抗体初步应用于天然病毒vFLIP蛋白表达的检测。方法： 对vFLIP蛋白抗原表位进行预测分析,设计并合成3条多肽,将合成肽与载体蛋白钥孔戚血蓝素（KLH）偶联作为抗原,免疫新西兰白兔,制备抗vFLIP的多抗;以pCDH-vFLIP质粒为模板扩增vFLIP片段,插入到真核表达载体pEF-MCS-Flag-IRES/Puro中,构建pEF-vFLIP表达载体,利用脂质体将其转染HEK293T细胞,并在其中表达vFLIP。采用ELISA、蛋白质印迹法鉴定vFLIP多克隆抗体的效价及特异性,将该抗体用于天然病毒vFLIP的检测。结果： 经限制性内切酶鉴定和核酸序列测定证实成功构建了重组质粒pEF-vFLIP,Flag抗体可以特异性识别该质粒在HEK293T和EA.hy926细胞内表达的vFLIP-flag融合蛋白。进一步的ELISA结果显示,制备的兔抗vFLIP多克隆抗体效价为1∶11 000以上。该抗体不但与HEK293T和EA.hy926细胞内表达的重组vFLIP-flag融合蛋白反应,而且能够特异性识别PEL细胞中天然的病毒vFLIP蛋白。结论： 构建了含vFLIP基因的重组真核表达载体;采用人工合成肽作为半抗原制备的抗KSHV vFLIP多抗,可以成功地检测重组vFLIP蛋白和天然病毒蛋白。     

反义K-ras基因对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨反义K-ras癌基因对胰腺癌细胞增殖和凋亡及Fas/FasL、Bcl-2、Bax表达的影响.方法 将重组逆转录病毒载体pLXSN转染包装细胞PT-67,获得重组逆转录病毒.在细胞和动物水平将该重组逆转录病毒分别感染PC-3和BxPC-3胰腺癌细胞,经G418筛选获得稳定细胞系,应用MTT、流式细胞仪和免疫组化法分别研究其增殖、凋亡及其相关基因表达情况.结果 成功制备含反义K-ras基因的重组逆转录病毒.感染含反义K-ras基因重组病毒后,胰腺癌PC-3细胞和移植瘤(有K-ras基因第12密码子点突变GGT→GTT)增殖受到抑制,G<,0/1>期细胞增加而S期细胞明显减少,细胞凋亡增加.免疫组化显示含反义K-ras癌基因逆转录病毒感染后PC-3细胞Bax/Bcl-2比值升高,Fas表达上调.结论 反义K-ras基因可使胰腺癌细胞及移植瘤增殖受到抑制,并可通过上调Bax/Bcl一2比值和(或)促进Fas表达诱导细胞凋亡.     

HIV-1型病毒蛋白R基因表达载体的构建及其在前列腺癌细胞系PC-3中的表达

目的：利用AdEasy腺病毒载体系统构建含HIV-1病毒蛋白R（viral protein R,Vpr）基因的重组腺病毒,使之有效感染靶细胞前列腺癌细胞系PC-3,并在其中表达Vpr。方法：自表达载体pCI—neo—Vpr中扩增出Vpr基因,插入到pAdTrack—CMV中构建成腺病毒穿梭质粒pAdTrack—Vpr,经限制性内切酶Pme I酶切线性化后,利用磷酸钙介导法将其与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转化到BJ5183大肠埃希菌。挑选同源重组质粒,经Pac I酶切后回收大片段,并将其转染包装细胞AD293。利用荧光显微镜观察AD293细胞中绿色荧光蛋白（GFP）表达。收集第一代重组病毒上清,使之感染AD293细胞得到第二代病毒,如此反复感染AD293细胞3—4轮,使病毒大量扩增。梯度稀释法测定病毒滴度后,分别以感染复数（MOI）为1、5、10的病毒量感染靶细胞PC-3,荧光显微镜观察细胞中GFP表达,并利用RT＋PCR和蛋白质印迹技术分别从mRNA和蛋白水平检测目的基因的转录与表达情况。结果：经限制性内切酶检测、GFP表达和病毒上清液PCR证实成功构建了携带Vpr基因的重组腺病毒,滴度为3．0&#215;10^8efu／ml。以MOI为5的重组腺病毒感染24h后,80％以上的靶细胞能够表达GFP,RT—PCR和蛋白质印迹能够同时检测到目的基因Vpr的转录与表达。结论：成功构建含Vpr基因重组腺病毒,并且病毒能够有效感染PC-3细胞,使得目的基因在其中获得大量表达,为进一步研究Vpr蛋白对PC-3肿瘤细胞的影响及其可能涉及的信号通路奠定了基础。