腺病毒载体介导EB病毒潜伏期膜蛋白2A基因转染树突状细胞对其功能的影响

目的 探讨腺病毒载体介导EB病毒（EBV）潜伏期膜蛋白2A（LMP2A）基因转染树突状细胞（DC）对其功能的影响。方法 通过同源重组法构建带有EBV－LMP2A基因的重组腺病毒Ad5-LMP2A，用不同感染滴度（MOI）的Ad5-LMP2A转染成熟的DC，用流式细胞术（FACS）检测DC的LPM 2A蛋白表达细胞百分率及用台盼蓝染色计数DC死亡百分率，选择最佳MOI；用最佳MOI的Ad5-LMP2A转染成熟的DC，FACS检测转染前后DC表面分子CD1a、CD83、CD40、CD80及HLA－DR的变化；并用^3H-TdR掺入法检测转染前后DC刺激同种淋巴细胞增殖能力及荧光定量PCR检测表达IL－12 P40 mRNA等功能的改变。结果 MOI 200为Ad5-LMP2A转染DC的最佳滴度，此时约80％的DC表达LMP2S蛋白及92％以上细胞为活细胞。Ad5-LMP2A转染成熟DC前后对细胞表面共刺激分子及特征性表面标志无影响；转染后的DC仍具有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖能力和表达IL－12 P40 mRNA的功能。结论 腺病毒载体能高效介导EBV LMP2A基因在DC中表达，Ad5-LMP2A转染成熟DC对其功能无明显影响，便于进一步用于EBV相关肿瘤的免疫治疗。     

GM－CSF对人单核细胞HLA－DR抗原表达的影响

本文采用ＥＬＩＳＡ方法，研究了重组的人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）对体外培养的正常人外周血单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达的影响。结果表明ＧＭ－ＣＳＦ能提高单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达，并且呈剂量依赖关系，最适剂量（５００ｕ／ｍｌ）时能使ＤＲ抗原表达量提高到对照组的２．５倍。ＧＭ－ＣＳＦ对ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达的诱导作用并不是通过诱生的ＩＦＮ－γ的作用而实现的，因为有中和活性的ＩＦＮ－γ单抗并不能阻断这种效应。ＧＭ－ＣＳＦ能够增强低剂量ＩＦＮ－γ（５ｕ／ｍｌ）对单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原的诱导作用，但未观察到对高剂量ＩＦＮ－γ（１００ｕ／ｍｌ）的ＨＬＡ－ＤＲ抗原的诱导增强作用。     

单纯疱疹病毒体外诱导特异性抗体应答的实验研究

用灭活的单纯疱疹病毒（Ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ，ＨＳＶ１）为致敏原，体外诱导成人外周血淋巴细胞产生特异性抗体应答，特异性抗体诱生水平与血清抗体无相关性（Ｒ＝０．４５，Ｐ＞０．０５），抗体类型为ＩｇＧ。同法致敬新生儿淋巴细胞则不能诱生任何类型的特异抗体，表明此体外抗体应答属继发性免疫应答。特异性抗体应答有明显的ＨＳＶ１抗原剂量依赖性，且需要Ｔ、Ｂ细胞的相互作用。ＨＳＶ１体外致敏的实验研究，为探讨正常和疾病状态下体外特异性抗体应答和免疫调节提供一个有用的实验模型。     

呼吸道合胞病毒对致敏小鼠气道炎症和CD8+ T细胞功能的影响

目的观察呼吸道合胞病毒（RSV）对致敏小鼠气道炎症和CD8^＋T细胞功能的影响.方法BALB/c小鼠40只,随机分成4组,分别为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、鸡卵白蛋白（OVA）组、RSV组、OVA/RSV组;应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化结合RSV滴鼻激发哮喘;支气管肺泡灌洗液（BALF）作细胞分类计数;酶联免疫吸附试验（ELISA）测定BALF上清中白细胞介素（IL）-4、IL-5、干扰素（IFN）-γ含量;苏木精-依红（HE）染色观察肺病理变化;采用三色光流式细胞分析法测定气管旁淋巴结（PBLN）中CD4^＋、CD8^＋T细胞及细胞内细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5表达与TH2/TH1、Tc2/Tc1比值变化.结果（1）BALF中细胞总数及分类：与OVA组比较,OVA/RSV组细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞均明显增加（分别P＜0.01）;与RSV组比较,OVA/RSV组细胞总数、嗜酸性粒细胞明显增加（分别P＜0.01）.（2）BALF上清中细胞因子含量：与OVA组比较,OVA/RSV组IFN-γ、IL-4、IL-5含量均明显升高（分别P＜0.01）;与RSV组比较,OVA/RSV组IFN-γ无明显变化,而IL-4、IL-5显著上升（分别P＜0.01）.（3）肺组织病理：OVA/RSV组与其他各组比较气道黏膜增厚,管腔狭窄、收缩,上皮破坏,管壁周围炎症细胞浸润明显加重.（4）PBLN中CD4^＋（WN-γ^＋、IL-4^＋、IL-5^＋）、CD8^＋（IFN-γ^＋、IL-4^＋、IL-5^＋）T细胞各占CD3^＋T细胞百分比及TH2/TH1、Tc2/Tc1比值变化：与OVA组比较,OVA/RSV组CD8^＋（IFN-γ^＋、IL-4^＋、IL-05^＋）T细胞百分比、Tc2/Tc1比值增加（分别P＜0.01）,TH2/TH1比值无明显变化.与RSV组比较,OVA/RSV组CD4^＋（IL-4^＋、IL-5^＋）T细胞、TH2/TH1比值、CD8^＋（IL-4^＋、IL-5^＋）T细胞、Tc2/Tc1比值均明显上升（分别P＜0.01）.结论（1）OVA致敏小鼠RSV感染后可明显加重气道炎症,TH2、TH1型炎症均加强,且以TH2型炎症加重为主.（2）OVA致敏小鼠RSV感染后可引起CD8^＋T细胞数量及功能改变,即由产生IFN-γ^＋为特征的Tc1细胞向产生IL-4^＋、IL-5^＋为特征Tc2细胞转化,并可能与气道内IL-4、IL-5升高及嗜酸性粒细胞的大量募集有关.     

一次婴儿毛细支气管肺炎爆发流行中病毒学和血清学观察

1985年12月至1986年2月江苏省泗洪县爆发流行小儿毛细支气管肺炎。12月份收住的例数占住院总例数的32%。发病最小年龄为28天,最大年龄为1岁半。6个月之内的占71.5%。从8份急性患儿的鼻咽洗液中分离出6株病毒,经鉴定为呼吸道合胞病毒。8例采得急性期和恢复期双份血清,恢复期中和抗体效价较急性期升高8~64倍。     

GM－CSF与IFN－r联合刺激人PBMC产生TNF－α

ＧＭ－ＣＳＰ本身并不能诱导人外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）产生ＴＮＰ－α对ＬＰＳ的刺激作用也不具有协同性，但与ＩＦＮ－ｒ联合刺激ＰＢＭＣ可以产生ＴＮＦ－α，最大效应出现于刺激后１８～２４ｈ，且呈明显的时间和剂量依赖关系，消炎痛和多粘菌素Ｂ对此效应无影响，排除了ＰＧＥ２和ＬＢＳ存在影响的可能性。     

HSV-1感染单核巨噬细胞及其影响因素的研究

用HSV-1接种人单核细胞传代系U937细胞和小鼠腹腔巨噬细胞,并在接种前后以细菌脂多糖(LPS)或/和卡介苗(BCG)处理细胞,通过病毒滴定、间接荧光抗体试验检测病毒抗原及PCR技术检测病毒基因,初步研究了HSV-1感染单核巨噬细胞的特点及其影响因素。结果如下。 U937细胞接种HSV-1的剂量为1.0 TCID_(50)/细胞,在2周内降至测不出水平。病毒抗原阳性细胞于感染后第4天达高峰,为47.6％,随即迅速下降,2周内降至10％以下,3周后几乎全部消失。病毒DNA在感染2周后即不能从细胞中检出。感染过程中始终未见典型的CPE,但MTT比色分析法显示感染后1～2周细胞增殖受到明显抑制。2周后细胞增殖开始恢复。将细胞     

CFS-l对巨噬细胞形态和增殖的调节作用

<正> 巨噬细胞集落刺激因子(CSF-1)是集落刺激因子中的重要成员之一,主要作用于骨髓中的单核细胞前体细胞,促进其分化和增殖。近来人们的研究还发现CSF-1对成熟的巨噬细胞也有很强的调节作用。本文研究了CSF-1对鼠腹腔巨噬细胞的调节作用。     

EB病毒潜伏膜蛋白2A胞外区重组基因在大肠杆菌中的表达及其在血清学检测中的应用

目的:构建EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)胞外区重组基因的表达载体在大肠杆菌中表达,并将表达的蛋白用于EB病毒相关鼻咽癌(NPC)患者的血清学检测.方法:用BamHⅠ和EcoRⅠ将含LMP2A胞外区重组基因的质粒pEC2A双酶切后,克隆到pET32a中.重组质粒经PCR、酶切鉴定、核酸序列分析后转化大肠杆菌(E.coli)BL21,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,表达的蛋白经镍柱亲和层析纯化,并用Western blot法检测其抗原活性.用纯化的蛋白进行鼻咽癌患者血清学检测.结果:重组表达质粒经PCR及酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确.SDS-PAGE和Western blot结果显示表达的重组蛋白分子质量约为40 ku.以此为抗原能在鼻咽癌患者血清中检测到特异性的抗体.结论:成功获得了LMP2A胞外区重组基因表达的蛋白,纯化的蛋白可用于EBV相关鼻咽癌患者的血清学检测.     

热毒宁注射液对人鼻病毒(N_(36))的体外抑制作用

目的：研究中草药热毒宁注射液对人鼻病毒（HRV，N36）的抑制作用。方法：以利巴韦林为阳性对照药，采用细胞培养技术及MTT比色法，观察在热毒宁干预下，人胚胎上皮细胞的病变效应（CPE）及吸收度值（A），计算各组细胞的病毒抑制率。比较不同药物剂量及不同给药方式下热毒宁对HRV的抑制作用效果。结果：热毒宁注射液半数中毒浓度TC50为5．873g／L。预防、直接灭活及治疗给药方式下，CPE法测定的半数有效浓度EC50分别为0．576、0.836及0．640g／L，治疗指数（TI）分别为10．20、7．03及9、18；MTT法测定的EC50分别为0．551、2.310及1．230g／L，TI分别为10．66、2．54及4．78。结论：热毒宁对HRV（N36）有直接灭活及抑制增殖作用，对其感染靶细胞有阻断作用，且呈明显量效关系。热毒宁对HRV（N36）的抑制作用，以预防给药更明显。