医源性表皮葡萄球菌ica操纵子转录水平对生物膜表型的影响

目的探讨表皮葡萄球菌临床株中ica操纵子转录水平对生物膜表型差异的影响。方法采用微量板半定量法检测细菌生物膜表型,用Southern杂交和聚合酶链反应检测icaA基因及ica操纵子中是否存在插入序列,用RNA狭缝杂交和逆转录实时定量聚合酶链反应检测icaA基因和icaR基因的转录水平;采用χ2检验分析icaA基因与生物膜表型的相关性,采用单因素方差检验分析转录水平的差异。结果101株临床分离株中,32.7%(33/101株)能形成生物膜,其中22株icaA基因阳性;67.3%(68/101株)无生物膜形成,其中15株icaA基因阳性。15株icaA /生物膜表型-分离株中,ica操纵子各基因中均不存在插入序列,icaA基因的转录水平明显低于生物膜阳性的ATCC35984株(P<0.05),其中2株icaR基因的转录水平高于ATCC35984株(P<0.01)。结论表皮葡萄球菌临床株中ica操纵子的存在与生物膜表型相关(χ2=19.045,P<0.01);ica操纵子的低转录是icaA /生物膜表型-临床株不形成生物膜的主要原因。     

2005年上海瑞金医院细菌耐药性监测

目的了解2005年我院临床分离菌的分布和耐药特征,指导临床合理使用抗菌药物。方法采用纸片扩散法(K-B法)对我院临床分离的菌株进行药敏试验并对肠杆菌科细菌进行ESBL检测,按CLSI2005年标准判定药敏结果,用WHO-NET5.3软件进行数据分析。结果2005年我院共分离细菌3960株,其中革兰阴性杆菌2448株,占61.8%,革兰阳性球菌1512株,占38.2%。大肠埃希菌和金葡菌分别占革兰阴性杆菌和革兰阳性球菌的首位。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌中ESBLs的检出率分别为39.5%、35.8%和6.6%。32.2%鲍曼不动杆菌和10.1%铜绿假单胞菌为泛耐药株(只对多黏菌素敏感);葡萄球菌属中MRSA和MRCNS的检出率分别为69.0%和80.4%;从肠球菌属中检出1株耐万古霉素的屎肠球菌。结论从我院住院患者分离的细菌耐药性比较严重,应该加强监测,指导临床合理使用抗菌药物。     

上海出现PER-1型超广谱β内酰胺酶

目的 分析多重耐药鲍曼不动杆菌148号试验菌株耐β内酰胺抗生素的原因及耐药性的转移能力。方法 用等电聚焦电泳试验和三相水解试验分析148号试验菌株所产β内酰胺酶，并进行初步分类，再用聚合酶链反应(PCR)扩增和PCR产物测序方法确认β内酰胺酶基因。结果 148号试验菌株产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)，经分子生物学方法证实有blaPER—1基因，同时还有aacA4基因。结论 148号试验菌株耐β内酰胺抗生素的原因，可能是产生了可转移的PER—1型ESBLs，blaPER—1基因位于质粒上。     

随机扩增多态性DNA分型法用于酵母菌基因分型

目的研究酵母菌随机扩增多态性DNA分型法(RAPD)的最佳实验条件.方法在改变引物、Mg2+、模板浓度、Taq多聚酶用量等不同条件下,采用RAPD法对酵母菌进行基因分型.结果经优化后的RAPD方法能清晰地对酵母菌进行基因分型.结论RAPD是从分子水平对酵母菌感染进行病原学、流行病学研究的一种快速、可靠的分子生物学分型方法.     

TEM-1β内酰胺酶介导的大肠埃希菌对哌拉西林-他唑巴坦和头孢哌酮耐药机制的研究

目的探讨临床分离大肠埃希菌RJ904对阿莫西林-克拉维酸、哌拉西林-他唑巴坦等含β内酰胺酶抑制剂抗菌药物和头孢哌酮耐药,而对头孢西丁、头孢噻肟敏感的机制。方法通过三相水解试验了解大肠埃希菌RJ904所产酶的水解特性;以大肠埃希菌J53Azr为受体菌,临床菌株RJ904为供体菌,通过接合试验了解该耐药特性是否由质粒介导;通过"鸟枪法"随机克隆试验将耐药质粒经BamHI和HindⅢ双酶切后的片段插入到克隆载体pACYC184中表达并测序,明确介导该耐药特性的基因;通过重叠延伸法定点突变及亚克隆了解启动子对耐药基因表达的影响。结果菌株RJ904中的酶可水解哌拉西林-他唑巴坦、头孢哌酮,但不水解头孢西丁、头孢噻肟,而且其耐药性可通过质粒接合转移。耐药质粒经BamHI和HindⅢ酶切后重组到载体pACYC184中的3.9 kb双酶切片段,含有大小861 bp的blaTEM-1B基因,其上游的启动子为Pa/Pb。该重组载体表达后对头孢哌酮、哌拉西林-他唑巴坦等含酶抑制剂抗菌药物耐药,而对头孢西丁、头孢噻肟敏感,重组载体中blaTEM-1B基因启动子经32位的T→C定点突变后,由强启动子Pa/Pb变为弱启动子P3,突变后的重组质粒转化入大肠埃希菌DH5α后所表达的耐药性与突变前相比MIC值均有较大下降。结论本试验首次证实在大肠埃希菌中Pa/Pb启动子调控TEM-1β内酰胺酶的高表达可使细菌对阿莫西林-克拉维酸、哌拉西林-他唑巴坦等含酶抑制剂抗菌药物和头孢哌酮耐药,而且这种耐药基因位于转座子和质粒上,可通过接合转移扩散。     

2015—2021年CHINET链球菌属细菌耐药性监测

目的 了解2015—2021年国内主要地区医疗机构临床分离链球菌属细菌对抗菌药物的耐药性。方法 对国内主要地区51所医院临床分离的链球菌属采用纸片扩散法（K-B法）或E试验方法或自动化商业药敏测试系统，按CHINET统一监测方案进行抗菌药物敏感性试验，并按2022年CLSI折点标准统计分析总结。结果 2015—2021年共收集到89 684株链球菌属细菌，包括肺炎链球菌35 254株（39.3%）,β溶血链球菌42 563株（47.6%），草绿色链球菌11 767株（13.1%）。42563株β溶血链球菌中A群、B群以及未能鉴定分型的链球菌分别为39.8%、52.8%、7.4%。非脑脊液样本儿童患者分离的25 552株肺炎链球菌中青霉类敏感、中介、耐药（PSSP、PISP、PRSP）菌株的检出率分别为86.2%～97.7%、1.7%～6.5%和0.6%～7.3%，在成人患者7 997株中的检出率分别为92.0%～95.1%、3.8%～5.3%和1.4%～2.7%。脑脊液分离肺炎链球菌PRSP占比81.2%。无论是脑脊液或非脑脊液分离儿童和成人的肺炎链球菌对红霉素和克林霉素高度耐药，耐药...     

泌尿生殖道分离无乳链球菌药物敏感性分析

目的了解泌尿生殖道无乳链球菌感染及耐药状况，为临床用药提供依据。方法对临床送检的泌尿生殖道标本常规培养鉴定，并对分离出的无乳链球菌进行纸片扩散法药敏试验，对红霉素耐药、克林霉素敏感的菌株做D试验检测。结果144株无乳链球菌（尿77株，前列腺液36株，阴道分泌物31株）药敏结果显示，对万古霉素、利奈唑胺、青霉素和头孢曲松的耐药率最低，全部144株无乳链球菌中未发现耐药株；左氧氟沙星的耐药率较低，为16．2％；红霉素和克林霉素耐药率较高，分别为56．2％和53．5％。D试验阳性率为26．7％。结论从泌尿生殖道分离的无乳链球菌对青霉素、氨苄西林和头孢菌素类抗菌药物的敏感性较高，但对大环内酯类和克林霉素已有一定的耐药。     

105株志贺菌流行菌株的血清分型及耐药性分析

目的　调查志贺菌在上海地区流行的主要血清型和耐药性。方法　收集临床分离的志贺菌 1 0 5株进行生化鉴定、血清学分型和抗生素敏感性试验。结果　 1 0 5株志贺菌中 5 1株为宋氏志贺菌 ,占 4 8.6 % ;5 4株为福氏志贺菌 ,占 5 1 .4 % (包括 5株福氏变异株 ,占总数的 4 .7% )。宋氏志贺菌对抗菌药物的敏感率依次为氟喹诺酮类 1 0 0 %、头孢噻肟 94 .1 %。而福氏志贺菌对抗菌药物的敏感率依次为头孢噻肟 98.1 %、氟喹诺酮类70 %。结论　上海地区志贺菌感染以福氏志贺菌和宋氏志贺菌为主 ,福氏志贺菌中以福氏 2型为主 ,占 6 6 .7% ,其次为福氏 1型 ,占 2 0 .4 %。福氏志贺菌对各种抗生素耐药性有增高趋势 ,必须引起临床重视     

上海地区3所医院MRSA的随机扩增多态DNA分型

目的分析上海3所医院分离的MRSA分布现状,以确定在这些医院内是否存在MRSA流行。方法用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、mecA基因扩增等方法检测MRSA,用随机扩增多态DNA(RAPD)法对所分离的112株MRSA进行同源性分析。结果RAPD法将检测菌株分为4个型别(A～D型),其中RAPDC型是上述2所医院的惟一流行菌株,B型和C型存在于另1所医院。结论在上述3所医院内存在相对单一的MRSA流行株。     

从肺炎克雷伯菌临床菌株中检出质粒介导的AmpC DHA-1型β-内酰胺酶基因

目的研究肺炎克雷伯菌的耐药机制,检测肺炎克雷伯菌中AmpC酶的基因.方法用纸片扩散法药敏试验和三相水解试验,从23株耐药的肺炎克雷伯菌临床菌株中初筛产AmpC酶的菌株;用PCR扩增耐药基因,将试验产物测序,并在Genbank中进行比对;用转化试验确证耐药基因是否通过质粒传播.结果发现3株肺炎克雷伯菌产诱导型质粒介导的DHA-1型AmpC β-内酰胺酶.结论国内首次发现肺炎克雷伯菌出现质粒介导的DHA-1型AmpC β-内酰胺酶.