利用寡核苷酸芯片鉴定多种肠道致病菌方法的建立与初步应用

目前,临床上对腹泻样本的检测主要依靠传统的细菌学培养及生化鉴定,操作方法繁琐,检测周期较长,而利用分子生物学方法如PCR、探针杂交等及免疫学方法也存在特异性差和灵敏度低等问题[1].     

依据药物敏感试验根除幽门螺杆菌的临床疗效随访

目的:在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染的患者中,根据药物敏感试验选择治疗方案与常规一线治疗方案进行临床疗效优劣的随访.方法:在浙江省嘉兴市第一医院内镜室行胃镜检查的患者中,胃镜检查时取材标本2块,分别送检常规组织病理学检查及组织切片染色检测及H.pylori的分离、培养、鉴定:其中H.pylori培养结果阳性的纳入治疗组,仅组织切片染色检测H.pylori阳性纳入对照组.治疗组根据药敏试验结果治疗10 d,对照组根据标准一线治疗方案治疗10d.治疗结束4 wk后的患者进行复查,任选一种复查方式(H.pylori培养或组织切片染色或14C呼气试验),三项之一阴性者可判断H.pylori根除.结果:H.pylori培养结果阳性的纳入治疗组(n=4680),仅组织切片染色检测H.pylori阳性纳入对照组(n=3505).治疗组根据药敏试验结果选用2种敏感度最高值抗生素参与的四联疗法治疗,对照组选用常规四联疗法,治疗结束4 wk后复查评估根除率.最终,治疗组的根除率为91.18%,比对照组根除率73.07%高,且差异有统计学意义(P0.05).结论:依据H.pylori的药物敏感试验选择的治疗方案明显优于标准一线治疗方案.     

同时检测4种传染病病原体的蛋白质微阵列研究

[目的]建立1种用蛋白质微阵列法可同时检测血清中艾滋病病毒（HIV）抗体、丙型肝炎病毒（HCV）抗体、梅毒螺旋体（TP）抗体和乙型肝炎病毒表面抗原的方法。[方法]将基因工程HIV、HCV、TP重组抗原和乙肝病毒单克隆抗体共价结合于固相载体玻片上，制成蛋白质微阵列。血清样本经稀释、加样、孵育、洗涤后，加上Cy3荧光标记物，用激光芯片扫描系统对蛋白质微阵列进行扫描成像。将获得的图像用Imagene专用分析软件进行分析，所获数据根据cutoff值自动生成判断结果。用此蛋白微阵列系统检测了100份4个项目皆阴性的血清标本，确定了其cutoff值。检测了经酶联免疫吸附试验（EUSA）筛选出4个项目皆阴性的标本40例；艾滋病病毒抗体阳性标本30例；乙肝表面抗原、丙肝抗体、梅毒特异性抗体阳性血清各100份。[结果]蛋白质微阵列法检测艾滋病病毒抗体、丙肝抗体和乙型肝炎表面抗原的阳性和阴性标本的符合率皆为100％，梅毒特异性抗体阳性符合率为97％，阴性符合率为100％。[结论]蛋白质微阵列法检测HIV、HCV、TP和HBsAg与EUSA法检测结果具有高度的符合率。该法具有高通量、快速、特异性强、操作简便等特点，适用于大规模样本的分析，在卫生检疫传染病检测方面具有应用和推广价值。     

CYP2C19、CYP3A4基因多态性与十二指肠球部溃疡疗效的关系

目的检测肝脏细胞色素氧化酶CYP2C19、CYP3A4的基因多态性,并观察不同基因多态性患者予奥美拉唑治疗十二指肠溃疡的疗效,以明确CYP2C19、CYP3A4基因多态性对药物治疗效果的影响。方法65例十二指肠溃疡患者分别检测CYP2C19、CYP3A4基因多态性及幽门螺杆菌（Hp）,予奥美拉唑治疗及根治Hp治疗,观察治疗后腹痛缓解情况,并复查胃镜,观察溃疡缩小情况。结果在65例患者中,CYP2C19t3基因野生型为43例（66．15％）,突变型为12例（18．46％）,杂合型为10例（15．38％）,CYP3A4＊18未见基因多态性。CYP2C19＊3突变型腹痛缓解时间短于野生型及杂合型（P〈0．01）。治疗后2周CYP2C19＊3突变型患者溃疡缩小率大于野生型及杂合型（P〈0.01）,但治疗后4周无明显差异（P〉0．05）。结论在观察病例中可见CYP2C19基因多态性,未见CYP3A4基因多态性,CYP2C19基因多态性影响奥美拉唑治疗十二指肠溃疡的疗效。     

我院内镜检查患者幽门螺杆菌耐药性分析

幽门螺杆菌（Hp）与多种上消化道疾病密切相关,如慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌、胃黏膜淋巴组织相关性淋巴瘤等.我国人群中的Hp感染率很高,约为50%,由此引起的疾病也相应较多.临床上通常采取国际三联标准治疗方案根除Hp,但随着抗生素的广泛使用,Hp的耐药率逐渐增加,使临床上出现了Hp根除困难的情况.我们对本院内镜检查的患者进行Hp培养和药物敏感试验,以探讨Hp对不同抗生素的敏感性及耐药情况,为临床上根除Hp治疗提供依据.     

人细小病毒B19实验诊断技术研究

目的建立一种快速、准确、特异和定量检测人细小病毒B19的实验检测方法。方法以B19病毒NS1基因为靶序列,设计并合成引物和Taqman探针,优化引物与探针比例,调整镁离子浓度,建立对细小病毒B19进行荧光定量检测的实验方法。同时利用荧光定量PCR技术检测本院收集的490例孕妇血清。结果引物与Taqman探针比例为1∶4,镁离子浓度为2.5mmol/L时,反应的本底最低,荧光信号最强。该方法的灵敏度为1.0×101拷贝,有较好的特异性和重复性。检测的490例临床孕妇血清标本,人细小病毒B19DNA阳性为44例,感染率为8.9%(44/490)。结论使用Taqman探针技术的荧光定量聚合酶链反应,能够准确快速定量检测血清中的人细小病毒B19。     

针对不同基因靶点的胃黏膜标本幽门螺杆菌PCR检测敏感性分析

目的分析针对3种不同基因靶点的胃黏膜标本幽门螺杆菌PCR检测的敏感性,评价PCR方法从胃黏膜标本中检测幽门螺杆菌用于临床诊断的价值。方法采集320例13C呼气试验阳性患者的胃黏膜标本,用针对ureA、ca-gA和vacA基因的3对引物进行PCR检测,同时进行幽门螺杆菌分离培养。分别对3对引物的PCR结果相互进行Kappa一致性检验,并比较组合PCR与培养结果。结果幽门螺杆菌培养的阳性率为81.88%(262/320);ureA、cagA和vacA PCR扩增阳性率分别为56.25%(180/320)、58.13%(186/320)和81.56%(261/320),组合PCR阳性率为90.94%。ureA、cagA和vacA PCR结果经一致性检验,Kappa值分别为0.209、0.137、0.129,检测结果具有互补性。结论单一基因PCR扩增的敏感性较低且不同基因扩增效果间的一致性较差。3对引物组合使用可提高PCR方法的敏感性,幽门螺杆菌检出率高于培养法,具有一定的实际应用价值。     

利用寡核苷酸芯片鉴定多种肠道致病菌方法的建立与初步应用

目前,临床上对腹泻样本的检测主要依靠传统的细菌学培养及生化鉴定,操作方法繁琐,检测周期较长,而利用分子生物学方法如PCR、探针杂交等及免疫学方法也存在特异性差和灵敏度低等问题[1].     

小儿人博卡病毒感染临床与实验研究

目的 研究人博卡病毒检测方法与小儿感染的临床特征,以提高对小儿人博卡病毒感染的诊治技术。方法 采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测患者鼻咽部抽取物、咽拭子和血清标本中的人博卡病毒DNA及特异性抗体,并全面分析感染患儿的各种临床症状、体征及常规实验室检测,同时做远期随访。结果 240例急性下呼吸道感染患者的标本中检出人博卡病毒DNA阳性7例,阳性率为2．92％,其临床表现以高热、阵咳为主,实验室检查外周血白细胞、C-反应蛋白、血沉和血生化指标大多正常。X线胸片表现无特异性,远期随访心肺功能良好。结论 人博卡病毒是引起小儿急性呼吸道感染的重要病原之一,荧光定量PCR和蛋白免疫印迹是灵敏、特异的检测技术。     

酶免疫斑点试验作钩体病血清学诊断的研究

本文用优选的最适条件对619份钩体病人血清和520份对照血清进行IgM-EIDT和MAT检测比较,发现早期病人血清IgM-EIDT阳性率显著高于MAT(P<0.001),恢复期血清则无差异。IgM-EIDT的诊断敏感性为95.53％,特异性为96.73％,两种方法对194份钩体病人双向血清的滴度检测呈显著正相关(r=0.7670)。对部分钩体病人血清用IgG-EIDT检测,其阳性率与MAT相似。因此,IgM-EIDT和IgG-EIDT结合使用,既可作钩体病的早期诊断,也可作追溯诊断和血清流行病学调查。