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1.
目的 建立同时测定N6-甲基腺嘌呤核苷(m6A)和腺嘌呤核苷(A)的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),检测肝癌细胞m6A甲基化水平。方法 HepG2和L02细胞mRNA经分离、消化为核苷,再经含对乙酰氨基酚为内标的甲醇沉淀处理。色谱柱为Agilent Proshell 120 EC-C18柱,流动相为0.1 g/dl甲酸水-甲醇(82:18),流速0.4 ml/min,柱温为30 ℃。质谱检测模式为多反应监测(DMRM)模式,测定m6A和A的浓度,计算细胞m6A甲基化水平。 结果 建立的LC-MS/MS法检测m6A和A的浓度分别在0.15~50.00 ng/ml和1.50~500.00 ng/ml浓度范围内线性关系良好(r > 0.999),日内、日间精密度均小于15.00 %,准确度为93.67 %~101.10 %,回收率为91.46 %~97.60 %,基质效应为90.26 %~99.27 %,样品稳定性良好。HepG2和L02细胞m6A甲基化水平分别为(0.73 ± 0.11)%和(1.26 ± 0.22)%。结论 该方法准确、快速、稳定和灵敏,可用于检测肝癌细胞m6A甲基化水平。  相似文献   
2.
目的建立超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆右美托咪定的浓度,评价梗阻性黄疸对患者体内右美托咪定药动学参数的影响。方法样品经液-液萃取后测定,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18,流动相为甲醇?0.1%甲酸水溶液,流速为0.2 ml/min,柱温为35℃,质谱检测采用动态多反应离子检测模式。结果人血浆中右美托咪定在0.01~10.00 ng/ml浓度范围内线性关系良好,日内和日间精密度均小于15.00%,提取回收率为85.5%~93.1%,基质效应为91.2%~95.6%,样品在分析期间稳定性良好。与对照组相比,梗阻性黄疸患者体内右美托咪定药动学参数cmax、AUC(0?t)、AUC(0?∞)和Vz分别增加63.4%、78.9%、66.4%、82.5%;CLz降低42.1%。结论该方法结果准确,灵敏度高,重现性好,适用于检测人血浆右美托咪定的浓度;梗阻性黄疸患者体内右美托咪定消除减慢。  相似文献   
3.
目的 建立白狼毒药材中月腺大戟素A的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18 (4.6 mm× 150 mm,5 μm),流动相为乙腈∶0.1%甲酸水溶液=55∶45,等度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长为290 nm,柱温25℃,进样量20 μ上L,运行时间为20 min.结果 月腺大戟素A与周围干扰峰达到基线分离,线性范围为4.545~227.3 μg·mL-1,相关系数r=0.999 9;日内、日间精密度均小于2%;平均回收率为(99.1±3.4)%(n=6),狼毒大戟2个批次药材及月腺大戟对照药材中月腺大戟素A含量分别为(56.73±1.09)、(18.98±2.11)及(235.2±2.4) μg/g(n=6).结论 该法简便快捷、测定结果准确,重复性好,可用于白狼毒药材中月腺大戟素A的含量测定.  相似文献   
4.
目的 建立高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法测定肉桂预煎液中有效成分肉桂酸的含量,研究不同储存温度和时间对肉桂酸稳定性的影响。方法 采用HPLC-DAD法,色谱柱为Agilent Zorbax C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相:0.1%甲酸溶液-乙腈(60:40),比例流速1.0 ml/min,柱温25 ℃;进样量5 μl。检测波长275 nm;肉桂预煎液分别置于低温(4 ℃)、常温(25 ℃)、高温(40 ℃)条件下储存,分别于第0、1、3、7、14、21、30天检测肉桂酸的含量。结果 肉桂酸在该条件下分离良好,在10.21~204.20 μg/ml浓度范围内线性关系良好,其精密度、重复性、稳定性和加样回收率均良好;与储存第0天相比,常温储存21、30 d,高温储存14、21、30 d测得肉桂预煎液中肉桂酸的含量均显著降低(P<0.01),其他组未发现明显变化(P>0.05)。结论 该HPLC-DAD 法稳定性、重复性好,快速便捷;肉桂代煎液冷藏30 d内有效成分肉桂酸比较稳定。  相似文献   
5.
目的:探讨黄连解毒汤对衰老小鼠的抗衰老作用及其机制。方法:采用皮下注射D- 半乳糖的方法制备衰老小鼠模型。将ICR小鼠随机分为正常对照组、模型组、1、2、4和8g/kg黄连解毒汤生药量处理组,采用自发活动实验检测小鼠的自主活动,用跳台实验检测小鼠的学习记忆能力,用硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果:与正常对照组相比,模型组小鼠的学习记忆能力减退,MDA含量增加,SOD活性降低。黄连解毒汤各剂量组小鼠的学习记忆能力明显改善,与1g/kg和8g/kg相比,2g/kg和4g/kg黄连解毒汤组小鼠脑内的MDA含量明显降低,SOD活性显著增高。结论:黄连解毒汤能显著改善口半乳糖衰老小鼠学习记忆能力,其机制可能与其抗氧化特性有关。  相似文献   
6.
目的乳腺癌是世界上最致命的恶性肿瘤之一。月腺大戟素A(EA)是从中药月腺大戟中提取的乙酰间苯三酚类化合物。探讨EA抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖的具体机制,以期为乳腺癌的临床治疗提供新的思路。方法在乳腺癌细胞MCF-7中添加不同浓度的EA药物,检测PKD1蛋白表达水平的变化。构建PKD1的过表达质粒体并转染至细胞,用实时荧光定量PCR技术和Western Blot实验检测PKD1的mRNA和蛋白表达水平。CCK-8实验用于检测细胞增殖能力的变化。Western Blot实验用于检测PKD1介导的相关信号通路中关键蛋白的表达水平。结果EA以剂量依赖的方式抑制乳腺癌细胞中PKD1蛋白的表达(P<0.05)。当转染过表达质粒后,PKD1在mRNA和蛋白水平上显著升高(P<0.001)。同时过表达PKD1显著逆转EA对MCF-7的增殖抑制作用(P<0.001)。信号通路分析证实EA通过抑制PKD1介导的MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路活性影响乳腺癌细胞的增殖能力(P<0.05)。结论EA通过调控PKD1介导MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路,能够抑制乳腺癌细胞的增殖。  相似文献   
7.
目的 建立高效液相色谱法测定扶正平消胶囊中吴茱萸次碱含量的方法。方法 样品经乙醇提取,乙酸乙酯液-液萃取后测定,色谱柱为Agilent TC-C18,流动相为乙腈-四氢呋喃甲酸水溶液(2%四氢呋喃+0.2%甲酸),流速为1.0 ml/min,柱温为40℃,检测波长为240 nm。结果 吴茱萸次碱含量在1.18~118 μg/ml范围内线性关系良好,r=0.999 9;其中日内、日间精密度RSD均<2%,平均加样回收率为94.20%。结论 本法准确、专属性强、重复性好,可用于测定扶正平消胶囊中吴茱萸次碱的含量。  相似文献   
8.
目的 建立UPLC-MS/MS法测定人血浆中丙硫氧嘧啶的含量,为临床治疗药物监测(TDM)和生物等效性试验(BE)提供方法学基础。方法 采用Agilent SB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液(80∶20,V/V),等度洗脱。质谱采用AJS-ESI源,多反应监测(MRM)正离子模式,检测离子对为:丙硫氧嘧啶m/z 171.1→112.1、内标(丙硫氧嘧啶-D5)m/z 176.1→117.0。结果 血浆中丙硫氧嘧啶在10~5 000 ng/ml范围内线性关系良好,r=0.999 3;批内和批间的精密度和准确度良好(RSD<10%,RE<±10%);不同浓度的基质效应均<110%,变异系数<5%;不同浓度的平均回收率为101.60%~113.56%,符合方法学要求。结论 该方法快速简便、灵敏准确,适用于血浆中丙硫氧嘧啶的含量测定。  相似文献   
9.
[目的]观察黄连解毒汤(huanglian-jian-du-tang,HJDT)对PC12细胞和小鼠全脑缺血损伤的保护作用.[方法]建立体外糖氧剥夺(oxygenglucose deprivation,OGD)和谷氨酸诱导的PC12细胞损伤模型,分别给予不同浓度的HJDT,以四甲基偶氮唑盐(MTT)和乳酸脱氢酶(LDH)法观察HJDT对细胞损伤的保护作用.采用双侧颈总动脉阻断30min建立C57BL/6小鼠全脑缺血模型,术前7d开始灌服HJDT(1、2、4、8 g·kg-1)至术后3d,采用新奇事物探究实验检测小鼠学习记忆能力,采用Nissl染色检测海马神经元存活的情况.[结果]OGD 4 h复灌2h后,HJDT可显著增加PC12细胞活性,显著减少LDH释放(P<0.01);谷氨酸处理24 h后,HJDT能显著增加PC12细胞活性,减少LDH释放(P<0.05).HJDT(4 g·kg-1)能显著提高全脑缺血小鼠对新物体的分辨比,(2、4 g·kg-1)可显著提高小鼠海马CA1区的神经元密度.[结论]HJDT对PC12细胞和小鼠全脑缺血损伤具有保护作用.  相似文献   
10.
目的 建立高效液相色谱(HPLC)梯度洗脱方法同时测定瑞香狼毒中狼毒色原酮、新狼毒素A、狼毒素、异狼毒素及7-甲氧基新狼毒素A 5种黄酮类成分的含量。方法 采用HPLC-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18 (3.0 mm×100 mm,3.5 μm);流动相A为0.1%甲酸水溶液,流动相B为纯乙腈,洗脱梯度为0~6 min 20% B、6~10 min 20%~35% B、10~50 min 35% B;流速为0.4 mL/min;平衡时间设置为10 min;采集时间为50 min;柱温为25℃;DAD检测波长为290 nm;进样量为5 μL。结果 狼毒色原酮、新狼毒素A、狼毒素、异狼毒素及7-甲氧基新狼毒素A在该条件下分离良好,分别在4.680~468.0、2.016~201.6、3.784~378.4、5.520~552.0、0.974~97.40 μg/mL浓度范围内线性关系良好,且其精密度、稳定性、重复性和回收率均良好。结论 HPLC-DAD法稳定性、重复性好,可用于测定瑞香狼毒中狼毒色原酮、新狼毒素A、狼毒素、异狼毒素及7-甲氧基新狼毒素A 5种黄酮类成分的含量。  相似文献   
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