1MTA2基因沉默对人乳腺癌MCF-7/ADR多药耐药的逆转作用

目的乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤,本研究探讨MTA2对乳腺癌耐药的作用及机制。方法 CCK-8检测MCF-7/ADR和MCF-7细胞株对阿霉素的耐药情况。体外化学合成MTA2序列特异性的shRNA,经慢病毒转染人乳腺癌细胞系,Western blot检测慢病毒介导的MTA2敲减效率以及PI3K/AKT/NF-κB信号通路蛋白。Annexin V-FITC和DAPI染色检测细胞凋亡情况。结果 MCF-7/ADR细胞中MTA2表达量显著高于MCF-7细胞株,慢病毒介导的基因沉默显著的敲减了MCF-7/ADR细胞中的MTA2。敲除MTA2逆转MCF-7/ADR细胞的耐药作用并促进细胞凋亡。敲除MTA2通过抑制PI3K/AKT通路抑制下游NF-κB通路活化,并下调p-gp蛋白表达而逆转耐药性。结论敲除MTA2可以逆转MCF-7/ADR细胞的耐药作用,表明MTA2可能参与调节乳腺癌多药耐药作用。     

SMYD3调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖机制的研究

目的：通过转染技术抑制或增强SMYD3基因的表达,以探讨SMYD3对乳腺癌MCF-7细胞增殖的调控机制机制。方法：以MTY法和软琼脂克隆形成实验研究抑制或增强SMYD3基因表达对细胞增殖的影响,以RT-PCR法和Western印迹法检测MCF-7细胞经转染后,胞内SMYD3、ERK／MAPK通路相关蛋白及其磷酸化产物,以及凋亡和细胞周期调控相关蛋白表达水平的变化。结果：用针对SMYD3基因的shRNAs表达质粒转染MCF-7细胞后,其SMYD3基因mRNA和蛋白表达水平下调,细胞生长受到抑制,细胞中ERK1／2、CyclinD1和CDK4蛋白水平明显下调;软琼脂克隆形成实验显示,增强SMYD3基因表达能明显促进MCF-7细胞克隆形成。结论：SMYD3可通过激活ERK／MAPK信号转导通路和上调细胞周期相关蛋白CyclinD1和CDK4的水平提高肿瘤细胞的增殖能力。     

达沙替尼体外抗鼻咽癌细胞增殖与转移的作用

目的SRC作为酪氨酸蛋白激酶在多种实体肿瘤中存在高表达,通过激活RAS/RAF/MEK/ERK、P13K/AKT通路促进肿瘤细胞的生长与增殖,并通过激活FAK促进肿瘤细胞的转移。此外,SRC还参与了EGFR抑制剂耐药的发生。本研究旨在研究SRC的抑制剂达沙替尼在体外对鼻咽癌细胞的抑制作用。方法采用M1Tr方法绘制细胞生长曲线,并计算达沙替尼对鼻咽癌细胞的半数抑制浓度（IC50值）;PI/AnnexinV双染法检测达沙替尼诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用;WesternBlot检测达沙替尼引起鼻咽癌细胞中信号通路的改变;Transwell实验检测达沙替尼对鼻咽癌细胞迁移的影响。结果达沙替尼能明显在体外抑制鼻咽癌细胞的增殖,诱导鼻咽癌细胞的凋亡,并且呈浓度依赖性;应用达沙替尼处理CNE2后发现,能明显抑制RAS/RAF/MEK/ERK、P13K/AKT通路活性表现为phospho-AKT、Phospho．MEK、Phospho-ERK的表达水平明显减低;达沙替尼还能明显抑制CNE2的迁移能力和Phospho-FAK的表达水平。结论SRC的抑制剂达沙替尼能在体外明显抑制鼻咽癌细胞中RAS/RAF/MEK/ERK、P13K/AKT通路的活性和FAK蛋白的表达,进一步抑制鼻咽癌细胞的增殖与转移,促进细胞凋亡。     

布鲁顿酪氨酸激酶靶向药物的研究进展

目的 探究青藤碱（sinomenine, SIN）逆转人乳腺癌MCF-7细胞他莫昔芬（tamoxifen, TAM）耐药及其相关机制。方法 通过短时间高浓度TAM刺激MCF-7细胞诱导耐药株,采用MTT法检测细胞耐药性的改变;进一步通过MTT法检测SIN和TAM对耐药株MCF-7/TAM的毒性作用,并采用CompuSyn软件分析两药联用的联合指数,评价联合效应;采用流式细胞术检测两药对MCF-7/TAM细胞凋亡和周期的影响;采用Western blot法检测MCF-7/TAM细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达情况,以及SIN干预后,MCF-7/TAM细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达情况。结果 MCF-7/TAM细胞株对TAM敏感性显著降低,耐药模型构建成功;SIN和TAM均能够剂量依赖性地抑制MCF-7/TAM细胞的增殖,SIN干预能够显著增加MCF-7/TAM细胞对TAM的敏感性,经CompuSyn软件分析显示两药呈协同作用;SIN和TAM联合应用能够更显著地诱导MCF-7/TAM细胞凋亡和阻滞细胞周期;MCF-7/TAM细胞中PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平显著高于MCF-7细胞,经过SIN干预后MCF-7/TAM细胞中PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平显著下降。结论 青藤碱能够有效逆转MCF-7细胞对他莫昔芬耐药,其机制可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路发挥作用。     

TP53基因沉默介导PI3K/PTEN/AKT信号通路对肾透明细胞癌侵袭转移的调控机制

目的探讨肿瘤蛋白p53基因(TP53)沉默介导PI3K/PTEN/AKT信号通路对肾透明细胞癌侵袭转移的调控机制。方法取60例肾透明细胞癌组织标本,免疫组化分析TP53蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达;取人肾透明细胞癌细胞株RLC-310进行细胞培养;细胞转染表达载体分为空白组(A组)、阴性对照组(B组)、sh TP53组(C组)、PTEN抑制剂bpv组(D组)、phen+sh TP53组(E组)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot检测各组细胞TP53、同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、AKT的m RNA和蛋白表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;划痕愈合试验检测各组细胞的迁移能力;Transwell侵袭试验检测各组细胞的侵袭能力。结果TP53蛋白在肾透明细胞癌组织中高表达(P<0.05);与A组和B组相比,C组的TP53,PI3K,AKT m RNA和蛋白表达水平显著下降,PTEN m RNA和蛋白表达水平均显著上升,且细胞增殖能力、迁移率、侵袭率均显著下降(P<0.05);D组TP53,PI3K,AKT m RNA和蛋白表达水平显著上升,PTEN m RNA和蛋白表达水平显著下降,且细胞增殖能力、迁移率、侵袭率均显著上升(P<0.05);同时,E组TP53下降(P<0.05),而其他指标与A组和B组相当(P>0.05)。结论沉默TP53基因抑制PI3K/PTEN/AKT信号通路,从而抑制肾透明细胞癌细胞浸润转移功能,并可逆转phen诱导的肾透明细胞癌细胞浸润转移。     

红景天苷对人舌癌细胞的凋亡作用及机制研究

目的：探讨红景天苷对人舌癌细胞增殖和凋亡的影响,并解释其分子机制,为舌癌的临床治疗提供新的思路。方法：CCK-8法和克隆形成实验检测红景天苷药物对人舌癌细胞增殖能力的影响;Annexin V/PI双染法和TUNEL法检测细胞凋亡情况;PI染色法检测红景天苷对细胞周期的影响;细胞迁移法检测红景天苷对舌癌细胞迁移的影响;免疫印迹法和实时荧光定量PCR法检测细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase 3的表达水平;免疫印迹法检测细胞内ERK和PI3K/AKT信号通路关键蛋白的表达水平的变化。结果：红景天苷能显著抑制人舌癌细胞的增殖且呈剂量依赖性。Annexin V/PI双染法和TUNEL法显示,随着红景天苷浓度的增加,Tca-8113细胞凋亡明显增多。PI染色法显示,红景天苷处理细胞后,G2/M期细胞明显减少。细胞迁移实验表明,红景天苷作用于舌癌细胞后,随着给药浓度的逐渐升高,细胞的迁移能力明显降低。免疫印迹结果表明,红景天苷可以使Bax和Cleaved caspase 3蛋白表达水平升高,Bcl2的蛋白表达水平降低。同时,红景天苷可以抑制ERK和PI3K/AKT信号通路。结论：红景天苷可以明显抑制人舌癌Tca-8113细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制ERK和PI3K/AKT信号通路有关。     

偶氮鎓二醇盐衍生物抑制肝癌细胞增殖的机制

目的通过体内实验与体外实验探究NO供体前药即偶氮鎓二醇盐衍生物PABA/NO对Bel-7402肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法MTT法检测PABA/NO对Bel-7402细胞增殖的影响;蛋白免疫印迹法检测Bel-7402细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-x L、促凋亡蛋白Bax和Bad、细胞色素C(Cyt c)、活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3、活化聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(cleaved-PARP)、胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、MAPK/ERK激酶(MEK)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)的表达。分别用PI3K抑制剂LY294002、ERK抑制剂U0126和NO清除剂Carboxy-PTIO预处理Bel-7402细胞,检测对上述因子的影响。用健康雄性BALB/c小鼠建立肝癌H22移植瘤小鼠模型,随机分为对照组、PABA/NO低剂量组(1 mg·kg~(-1))、PABA/NO中剂量组(2 mg·kg~(-1))和PABA/NO高剂量组(4 mg·kg~(-1))。将H22细胞悬液接种于小鼠腋下,第2天各组小鼠开始尾静脉注射药物,3 d注射1次,连续14 d。观察各组小鼠肿瘤的生长状况,计算抑瘤率。Western印迹法检测肿瘤组织中CD34,PI3K,AKT,mTOR,MEK和ERK的表达。结果 PABA/NO可以有效抑制Bel-7402细胞的增殖并诱导细胞凋亡,具有一定的浓度依赖性。PABA/NO可下调Bcl-2和Bcl-x L,上调Bax和Bad的表达,并释放Cyt c,激活胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3,诱导细胞凋亡。与此同时,PABA/NO还可以激活PARP,并抑制PI3K/AKT/m TOR和MEK/ERK信号通路在细胞内的表达。LY294002和U0126可以提高PABA/NO诱导Bel-7402细胞凋亡的发生率,而Carboxy-PTIO通过清除NO而明显降低PABA/NO引起的细胞凋亡。另外,PABA/NO还可以明显降低H22荷瘤小鼠的肿瘤体积、肿瘤重量以及CD34在体内的表达而发挥抗肿瘤作用。此外,经PABA/NO处理的小鼠体内PI3K/AKT/m TOR和MEK/ERK信号通路明显被抑制。结论 PABA/NO可以通过抑制PI3K/Akt/mTOR和MEK/ERK通路诱导肝癌细胞凋亡。     

nmhaFGF对人乳腺癌细胞增殖的影响及相关机制

目的比较nmhaFGF和haFGF对恶性肿瘤细胞的促增殖作用及其机制，探讨nmhaFGF临床应用的安全性。方法以haFGF和nmhaFGF分别处理人乳腺癌细胞(MCF-7)，用MTT法检测其细胞增殖活性；用流式细胞技术分析细胞周期；用蛋白免疫印迹法半定量检测MAPK通路中的信号蛋白Grb2和ERK1/2在MCF-7中的表达。结果nmhaFGF对MCF-7细胞的促增殖作用明显低于haFGF；haFGF组G₁/G₀和G₂/M期细胞比例均低于nmhaFGF组和对照组，S期细胞比例显著高于nmhaFGF组和对照组；nmhaFGF组的Grb2和ERK1/2信号蛋白表达水平均低于haFGF组，亦接近对照组。结论nmhaFGF的促增殖活性显著下降，其机制是通过下调MAPK信号通路中的Grb2和ERK1/2信号分子的表达来实现的。     

红杉黄酮通过下调PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖侵袭等干细胞特性

目的：探究红杉黄酮影响胃癌细胞的分子机制。方法：通过梯度浓度红杉黄酮处理胃癌细胞系AGS细胞，再使用PI3K/AKT信号通路激活剂对细胞进行诱导。采用CCK-8检测红杉黄酮对AGS细胞的最佳抑制浓度及时间，使用平板克隆、Transwell、细胞划痕实验检测细胞的增殖、迁移、侵袭能力变化。Western blot检测PI3K/AKT信号通路关键蛋白p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT。结果：红杉黄酮呈浓度依赖抑制AGS细胞，其半抑制浓度为0.5 mmol/L，最佳处理时间为48 h。红杉黄酮处理AGS细胞后，p-PI3K与p-AKT表达下调，AGS细胞增殖减少，迁移、侵袭能力降低；PI3K/AKT信号通路激活剂处理后，p-PI3K与p-AKT表达被部分逆转，增殖、迁移、侵袭能力降低也得到部分改善。结论：红杉黄酮通过失活PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭等恶性行为。     

circMTO1调控Wnt/β-catenin抑制乳腺癌细胞增殖和转移能力的机制研究

目的 研究环状RNA MTO1（circMTO1）对乳腺癌细胞增殖和转移的影响及其可能机制。方法 收集102例浸润性乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织,选用乳腺癌细胞系MDA-MB-231、HCC-70、MCF-7和人乳腺正常细胞系MCF-10A,采用荧光定量PCR（qPCR）检测circMTO1在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平。分别构建circMTO1过表达和circMTO1敲减质粒转染乳腺癌细胞系,分为NC组、oe-circMTO1组和sh-circMTO1组,qPCR检测转染效果。MTS实验检测各组细胞增殖能力,Transwell实验检测各组细胞转移能力。TOP/FOP荧光素酶实验检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路活性,Western blot检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-catenin、cMyc、Cyclin D1和基质金属蛋白酶7（MMP7）的表达。结果 与癌旁组织和人正常乳腺细胞系相比,circMTO1在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的相对表达量降低（P<0.05）。有淋巴结转移和TNM分期为Ⅲ期的乳腺癌患者组织中circMTO1的相对表达水平较低（P<0.05）。与NC组相比,oe-circMTO1组circMTO1相对表达量增加,细胞的增殖、转移能力以及Wnt/β-catenin信号通路活性减弱,Wnt3a、β-catenin、cMyc、Cyclin D1和MMP7蛋白表达水平降低（P<0.05）;sh-circMTO1组circMTO1相对表达量降低,细胞的增殖、转移能力以及Wnt/β-catenin信号通路活性增强,Wnt3a、β-catenin、cMyc、Cyclin D1和MMP7蛋白表达水平增加（P<0.05）。结论 circMTO1在乳腺癌细胞中呈低表达,circMTO1通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活性,从而抑制乳腺癌细胞的增殖和转移能力。     

铜绿假单胞菌注射液对NCI-N87胃癌细胞株增殖能力的影响及其机制研究

目的 探讨铜绿假单胞菌注射液（Pseudomonas aeruginosa mannose-sensitive hemagglutinin,PA-MSHA）对NCI-N87胃癌细胞增殖能力的影响及其分子作用机制。方法 MTT法检测PA-MSHA对NCI-N87胃癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,划痕实验和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化,Western Blot检测PTEN蛋白和p-AKT蛋白的表达变化,转染PTEN siRNA敲低PTEN表达后,再次行MTT法检测PA-MSHA对细胞增殖的影响。结果 PA-MSHA抑制NCI-N87胃癌细胞的增殖具有剂量和时间依赖性。与对照组比较,NCI-N87细胞经PA-MSHA处理后,凋亡率显著增加（P<0.05）,迁移和侵袭能力显著下降（P<0.05）。与对照组比较,PA-MSHA显著提高PTEN蛋白表达,降低p-AKT蛋白表达（P<0.05）。通过siRNA转染敲低PTEN表达后,PA-MSHA抑制NCI-N87细胞增殖的能力较对照组显著下降（P<0.05）。结论 PA-MSHA对NCI-N87胃癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡、抑制侵袭转移的作用,其机制与PTEN/AKT信号通路有关。     

雷公藤红素通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对胃癌MFC细胞增殖和凋亡的影响

目的研究雷公藤红素对胃癌MFC细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响及其对胃癌MFC细胞增殖的抑制和促凋亡作用机制。方法分别设置对照组和雷公藤红素低、中、高剂量(5、10、20 mmol/L)组,采用MTT法检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞增殖的影响;采用流式细胞技术检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞周期的影响及MFC细胞凋亡的情况;Western blotting检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和PI3K、AKT和mTOR蛋白表达的影响;实时定量PCR检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞内PI3K、AKT和mTORm RNA表达的影响。结果与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制胃癌MFC细胞的增殖(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著引起MFC细胞G2/M期阻滞(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著促进MFC细胞的凋亡(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制MFC细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白和PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达(P0.05),显著促进MFC细胞内促凋亡蛋白Bax的表达(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制MFC细胞内PI3K、AKT和mTORm RNA的表达(P0.05)。结论雷公藤红素能够抑制胃癌MFC细胞的增殖并促进胃癌MFC细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制胃癌MFC细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路中PI3K、AKT、mTOR等蛋白的表达而抑制胃癌MFC细胞的增殖,进而促进胃癌MFC细胞内促凋亡蛋白Bax的表达,同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而促进胃癌MFC细胞凋亡。     

姜黄素通过调控miR-7641/PTPN14分子轴抑制乳腺癌发展进程的分子机制研究

目的 探讨姜黄素通过调控miR-7641/PTPN14分子轴抑制乳腺癌发展进程的分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测乳腺癌患者癌组织及细胞系中miR-7641表达情况;使用Kaplan-Meier方法作乳腺癌患者生存曲线;采用不同浓度的姜黄素处理细胞,或转染miR-7641 mimic、Anti-miR-7641及pcDNA-PTPN14载体,采用qRT-PCR检测miR-7641表达情况,MTT实验及克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭,western blotting检测Ki67、pcDNA、CyclinD1、Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-8蛋白表达水平,采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-7641与PTPN14靶向调控关系。结果 与癌旁组织或乳腺正常上皮细胞比较,miR-7641在乳腺癌患者癌组织及乳腺癌细胞系中高表达（P<0.01、0.001）,且miR-7641能够明显促进乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭（P<0.05、0.01、0.001）,并促进Ki67、pcDNA、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达,抑制Bax、caspase-3、caspase-8蛋白表达;miR-7641与PTPN14 3''-UTR靶向结合,姜黄素通过miR-7641/PTPN14分子轴抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭（P<0.01、0.001）,并抑制Ki67、pcDNA、CyclinD1、Bax蛋白表达,促进Bcl-2、caspase-3、caspase-8蛋白表达。结论 姜黄素可通过下调miR-7641促进PTPN14表达,进而抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

二甲双胍在结肠癌中通过抑制lncRNA-MALAT1的表达发挥抗肿瘤效应

目的 探讨二甲双胍（MET）对结肠癌细胞的抑制作用及其机制。方法 采用CCK-8、流式细胞术及Transwell检测MET对结肠癌细胞SW480和SW620增殖、凋亡及侵袭的影响,qRT-PCR检测5种lncRNA在结肠癌细胞中的表达,Western blotting检测MET和/或MALAT1基因敲减在体外对PI3K/AKT和ERK通路活性的影响。结果 MET在体外对SW480和SW620细胞具有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性（P<0.05）。MET可促进SW480和SW620细胞凋亡（P<0.05）。在5种lncRNA中,lncRNA-MALAT1在SW480和SW620细胞中的表达水平最高（P<0.01）。siRNA可抑制lncRNA-MALAT1表达,并进一步增强MET介导的抗结肠癌作用（P<0.05）。MET可下调结肠癌细胞中lncRNA-MALAT1的表达（P<0.05）,并通过PI3K/AKT和ERK信号通路与lncRNA-MALAT1敲减协同抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭,并促进其凋亡（P<0.01）。结论 MET在结肠癌细胞中通过抑制lncRNA-MALAT1的表达发挥抗肿瘤效应。     

地皮菜抗三阴性乳腺癌作用活性成分的发现与靶点验证

目的 采用网络药理学方法和分子生物学实验探究地皮菜抗三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）的活性成分与靶点。方法 查阅文献并结合实验室前期研究收集地皮菜的活性成分,采用Swiss Target Prediction数据库进行靶点预测,TTD、Genecards和OMIM数据库获取TNBC靶点。应用STRING在线平台进行蛋白互作,使用Metascape数据库进行KEGG信号通路和GO基因功能富集分析。通过AutoDock软件将地皮菜成分N-乙酰基色胺与靶点AKT1进行分子对接。采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测地皮菜活性成分对乳腺癌细胞凋亡的影响。利用RT-qPCR和Western blotting检测地皮菜活性成分抗TNBC的作用机制。结果 网络药理学结果发现N-乙酰基色胺、Scytonemin和Nostocionone等8个有效成分,涉及细胞信号传导和AKT1、STAT3、CCND1等75个关键靶点。KEGG信号通路和GO基因功能富集分析结果涉及癌症相关信号通路、PI3K-Akt信号通路和MAPK信号通路等。分子对接显示N-乙酰基色胺与AKT1的亲和作用较好。N-乙酰基色胺对乳腺癌细胞没有明显的促凋亡作用,Western blotting结果显示N-乙酰基色胺下调了AKTI的蛋白表达量。RT-qPCR结果显示N-乙酰基色胺可以有效降低乳腺癌细胞AKT1的mRNA表达。结论 N-乙酰基色胺可能通过抑制AKT1信号通路抑制TNBC细胞增殖,从而发挥抗TNBC作用。     

蠲毒消瘤饮抑制结肠癌细胞的作用机理

目的 探讨中药蠲毒消瘤饮对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法 以人结肠癌HCT116细胞为模型,分别使用平板克隆形成实验,对细胞的克隆形成能力进行增殖检测;运用Transwell 肿瘤细胞侵袭实验和细胞划痕运动实验,分别检测中药蠲毒消瘤饮对HCT116细胞侵袭和迁移的影响;采用Western blot实验检测蠲毒消瘤饮对VEGF/MEK/Ras/Raf 信号通路上关键蛋白表达。结果 中药蠲毒消瘤饮作用后,HCT116细胞增殖、迁移和侵袭受到显著抑制,细胞内VEGF/MEK/Ras/Raf蛋白表达水平显著降低。结论 中药蠲毒消瘤饮在体内体外具有抑制结肠癌细胞生长的作用。     

人参皂苷Rg3对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察人参皂苷Rg3对雌激素受体阳性的乳腺癌细胞MCF-7增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用MTT法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期分布以及凋亡比率,通过Transwell小室观察细胞侵袭力,RT-PCR法检测细胞中的MMP-9 mRNA的表达。结果 与对照组相比,人参皂苷Rg3能显著抑制MCF-7细胞的增殖;G₀/G₁期及S期细胞比例减少,而G₂/M期细胞比例显著增加;同时细胞凋亡比率亦明显提升,而细胞侵袭指数降低,且呈现良好的剂量、时间依赖性。同时人参皂苷Rg3还能显著抑制细胞中MMP-9 mRNA的表达水平(P<0.05)。结论 人参皂苷Rg3能抑制MCF-7细胞的增殖和侵袭,其作用机制可能与其能降低MMP-9基因的表达有关。     

circ_0000064靶向miR-503对甲状腺癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨环状RNA 0000064（circ_0000064）靶向微小RNA 503（miR-503）对甲状腺癌细胞生物学行为的影响。方法 实时定量PCR（RT-qPCR）分析21例甲状腺癌组织和对应癌旁组织中circ_0000064和miR-503的表达水平。将circ_0000064小干扰RNA（si-circ_0000064）、miR-503模拟物、si-circ_0000064+miR-503抑制物（anti-miR-503）分别转染甲状腺癌SW579细胞,采用平板克隆形成实验、细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测SW579细胞增殖,Transwell实验检测SW579细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测SW579细胞凋亡,蛋白质印迹法检测上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）和神经型钙黏蛋白（N-cadherin）表达量。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR分析circ_0000064和miR-503的靶向调控关系。结果 甲状腺癌组织中circ_0000064表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）,miR-503表达量显著低于癌旁组织（P<0.05）。沉默circ_0000064后SW579细胞活力、克隆形成数、迁移和侵袭数、N-cadherin蛋白表达量均显著降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达量显著增加（P<0.05）。过表达miR-503后SW579细胞活力、克隆形成数、迁移和侵袭数、N-cadherin蛋白表达量均显著降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达量显著增加（P<0.05）。miR-503是circ_0000064的靶基因,沉默circ_0000064可显著上调miR-503表达（P<0.05）。抑制miR-503表达可显著减弱沉默circ_0000064对SW579细胞生物学行为的影响（P<0.05）。结论 沉默circ_0000064可通过上调miR-503抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,从而抑制甲状腺癌进展。     

High salt diet may promote progression of breast tumor through eliciting immune response

ObjectiveDietary patterns are believed to regulate tumor progression by altering the tumor microenvironment. Of note, a high salt diet is a risk factor for various diseases. However, the role of high salt intake in the progression of cancers remains unknown.MethodsWe constructed an in vivo high salt diet model in MMTV-PyVT mice with spontaneous tumor-forming properties to explore the role of a high salt diet in the progression of breast cancer as well as the modulation of the tumor microenvironment. Also, in vitro experiments were performed to understand the mechanism.ResultsHigh salt diet accelerated the development (P < 0.05) and lung metastasis (P < 0.05) of breast cancer in MMTV-PyVT mice, compared to the normal diet model. Moreover, higher frequency of Th17 cells in circulation, tumor tissue and draining lymph node tissue were observed in the high salt diet model (P < 0.05 for all). In vitro, co-culture with Th17 cells facilitated the proliferation, migration and invasion of MCF-7 human breast cancer cells, while these enhanced aggressive behaviors could be reversed by application of 1,25-vitamin D₃ which could inhibit the differentiation of Th17 cells (P < 0.001 for all). In vitro, co-culture with Th17 cells activated MAPK signaling in MCF-7 cells (P < 0.001 for all). Consistently, activated MAPK/ERK signaling was observed by immunohistochemistry in breast cancer cell nodes in the high salt diet model (P < 0.05 for all). Mechanistically, higher level of IL-17F could be detected in breast tumors and serum from the high salt diet model through qRT-PCR and ELISA (P < 0.05 for all). IL-17F treatment facilitated the proliferation, migration and invasion of MCF-7 human breast cancer cells and activated MAPK/ERK signaling in MCF-7 cells (P < 0.001 for all). Moreover, the tumor-promoting function induced by Th17 cells and IL-17F could be inhibited by the administration of ERK inhibitor (sch772894) (P < 0.001 for all). Lastly, high concentration NaCl-induced Th17 cells promoted the proliferation, migration and invasion of MCF-7 human breast cancer cells and activated MAPK/ERK signaling in MCF-7 cells which could be inhibited by neutralizing anti-IL-17F (P < 0.001 for all).ConclusionHigh salt intake accelerates the growth of breast cancer and facilitates lung metastasis, as well as increases the level of Th17 cells. Increased Th17 cells might promote the growth of breast cancer via the secretion of IL-17F to activate the MAPK signaling pathway in breast cancer cells.     

Downregulation of Dickkopf-1 is responsible for high proliferation of breast cancer cells via losing control of Wnt/β-catenin signaling

Aim:

To investigate the role of DKK-1/Wnt/β-catenin signaling in high proliferation of LM-MCF-7 breast cancer cells, a sub-clone of MCF-7 cell line.

Methods:

Two cell lines (MCF-7 and LM-MCF-7) with different proliferation abilities were used. LM-MCF-7 cells were transiently transfected with the pcDNA3-DKK-1 plasmid encoding the DKK-1 gene (or MCF-7 cells were transfected siRNA targeting DKK-1 mRNA). Flow cytometry analysis and 5-bromo-2′-deoxyuridine (BrdU) incorporation assay were applied to detect the cell proliferation. The expression levels of β-catenin, phosphorylated β-catenin, c-Myc, cyclin D1 and Survivin were examined by Western blot analysis. The regulation of Survivin was investigated by Luciferase reporter gene assay.

Results:

Western blot and RT-PCR analysis showed that the expression level of DKK-1 was downregulated in LM-MCF-7 relative to MCF-7 cells. Flow cytometry and BrdU incorporation assay showed DKK-1 could suppress growth of breast cancer cells. Overexpression of DKK-1 was able to accelerate phosphorylation-dependent degradation of β-catenin and downregulate the expression of β-catenin, c-Myc, cyclin D1 and Survivin. Luciferase reporter gene assay demonstrated that Survivin could be regulated by β-catenin/TCF4 pathway.

Conclusion:

We conclude that the downregulation of DKK-1 is responsible for the high proliferation ability of LM-MCF-7 breast cancer cells via losing control of Wnt/β-catenin signaling pathway, in which c-Myc, cyclinD1 and Survivin serve as essential downstream effectors. Our finding provides a new insight into the mechanism of breast cancer cell proliferation.