月腺大戟素A抗乳腺癌活性

目的 从中药狼毒药材中分离、纯化化合物月腺大戟素A,探讨其抗乳腺癌活性。方法 采用回流提取、溶剂萃取和吸附色谱法从狼毒药材中分离、纯化月腺大戟素A,通过质谱和核磁共振谱解析其化学结构。以乳腺癌细胞SUM149（三阴型）、MCF-7（luminal A型）、ZR-75-1（luminal B型）、SK-BR-3（HER2阳性型）为测试细胞株,用MTT法测定月腺大戟素A的抗乳腺癌细胞增殖活性,用流式细胞术检测月腺大戟素A对SUM149细胞周期的影响,用裸鼠移植SUM149细胞建立肿瘤模型并评价月腺大戟素A对肿瘤的抑制效果。结果 月腺大戟素A结构为3,3’-二乙酰基-2,4’-二甲氧基-2’,4,6,6’-四羟基-5’-甲基二苯基甲烷;对SUM149、MCF-7、ZR-75-1和SK-BR-3细胞的半数抑制浓度分别为5.50、6.16、7.08、8.64 μmol/L。月腺大戟素A作用SUM149细胞12、24和48 h后,随着月腺大戟素A浓度（2.5、5、10 μmol/L）的升高,G₀/G₁期细胞比例下降（P<0.05,P<0.01）,S期细胞比例上升（P<0.05,P<0.01）。给予35 mg/kg腹腔注射月腺大戟素A后,裸鼠肿瘤体积和质量的抑制率分别为37.94%和41.38%。结论 月腺大戟素A对4种乳腺癌细胞增殖均有抑制作用,并可抑制裸鼠SUM149细胞移植肿瘤生长,其机制可能与抑制SUM149细胞周期从S期到G₂/M期的转换有关。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定抑郁大鼠脑脊液中5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法,同时检测抑郁模型大鼠脑脊液中5-羟色胺及其代谢产物5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）的水平,并观察氟西汀治疗后抑郁模型大鼠脑脊液中5-羟色胺和5-HIAA的含量变化。方法 将24只SD大鼠随机分为对照组、模型组和氟西汀治疗组,每组8只。造模第35天,待行为学测试后取大鼠脑脊液,用蛋白沉淀法进行前处理,然后采用UPLC-MS/MS测定5-羟色胺和5-HIAA的含量。色谱柱为ACE C₁₈-PFP柱（4.6 mm×150 mm,3 μm）,流动相为乙腈-0.2%甲酸水,梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,柱温为25℃,质谱检测采用动态多反应监测（DMRM）模式。结果 大鼠脑脊液中5-羟色胺和5-HIAA分别在0.10~100.00 ng/mL和1.00~1 000.00 ng/mL浓度范围内线性关系良好（r>0.999）,日内和日间精密度均<15.00%,提取回收率为86.86%~98.49%,基质效应为89.80%~95.25%,样品稳定性良好。与对照组比较,模型组大鼠脑脊液中5-羟色胺的含量降低（P<0.01）,5-HIAA含量上升（P<0.01）;与模型组比较,氟西汀组大鼠脑脊液中5-羟色胺含量上升（P<0.01）,5-HIAA含量降低（P<0.01）。结论 本实验所建立的方法操作简便,结果准确,灵敏度高,重现性好,适用于检测抑郁大鼠脑脊液中5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸水平。     

钩藤代煎液中6种生物碱的稳定性研究

目的 建立超高效液相色谱串联质谱法(UHPLC-MS/MS)测定钩藤代煎液中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱和去氢毛钩藤碱的含量,考察不同储存条件对有效成分的放置稳定性的影响。方法 采用UHPLC-MS/MS,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,线性梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^–1,柱温为30℃;进样量为2μL,质谱检测采用动态多反应离子检测模式;考察不同储存温度和储存时间对钩藤代煎液中6种有效成分稳定性的影响。结果 钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱和去氢毛钩藤碱运用本法被成功分离,且在相应浓度范围内线性关系良好,其精密度、重复性、稳定性和加样回收率均良好;低温储存的药液14 d内6种生物碱基本稳定,常温储存3 d内基本稳定,高温储存较不稳定。结论 所建立的UHPLC-MS/MS稳定、快速、重复性好,可用于测定钩藤代煎液中6种有效成分的含量;冷藏有利于钩藤代煎液的稳定性。     

月腺大戟的化学成分及其乳腺癌细胞毒活性研究

目的 研究大戟科植物月腺大戟的化学成分及其对乳腺癌细胞毒活性。方法 采用多种色谱技术对化合物进行分离纯化,根据化合物的理化性质和光谱数据分析鉴定化合物的结构。采用噻唑蓝（MTT）比色法研究化合物对6种乳腺癌细胞的抑制活性。结果 月腺大戟植物中分离得到10个化合物,分别鉴定为：2,4-二羟基-6-甲氧基-3-甲酰基苯乙酮（1）;2,4-二羟基-6-甲氧基-3-甲基苯乙酮（2）;月腺大戟素A（3）;3,3''-乙酰基-4,4''-二甲氧基-2,2'',6,6''-四羟基二苯基甲烷（4）;岩大戟内酯B（5）;岩大戟内酯A（6）;亚油酸（7）;fischeria A（8）;β-香树脂醇乙酸酯（9）;单十九酸甘油酯（10）。乳腺癌细胞毒活性研究显示：化合物3对乳腺癌细胞MDA-MB-231、Sum149、MCF7、ZR-75-1、SKBr3、BT474的IC₅₀值分别为6.69、5.50、5.50、7.08、8.64、5.42 μmol/L。结论 化合物6、7、8、10为首次从该植物中分离得到;化合物3对乳腺癌细胞具有显著的抑制活性。     

UPLC-MS/MS法测定五倍子洗剂中5种指标性成分的含量

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时检测五倍子洗剂中没食子酸、紫丁香苷、黄柏碱、秦皮乙素、大黄酸的含量。方法 采用UPLC-MS/MS法,色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C₁₈（2.1 mm×150 mm,2.7 μm）,流动相为0.2%甲酸溶液-乙腈,梯度洗脱,流速为0.3 ml/min,柱温30 ℃;进样量2 μl。质谱检测采用动态多反应离子检测模式（DMRM）。结果 没食子酸、紫丁香苷、黄柏碱、秦皮乙素、大黄酸分别在153.8～15380、10.31～1031、5.265～526.5、50.70～5070、1.054～105.4 ng/ml浓度范围内线性关系良好,其精密度、重复性、稳定性和加样回收率均良好。结论 该UPLC-MS/MS法稳定、快速、重复性好,适用于检测五倍子洗剂中没食子酸、紫丁香苷、黄柏碱、秦皮乙素、大黄酸的含量。     

物体材质与检测间隔时间对小鼠新物体识别实验结果的影响

目的：研究不同实验条件下,新物体识别实验（NOR 实验）在ICR小鼠学习记忆能力评价中的应用效果。方法：将130只ICR雄性小鼠随机分为10组：4组用于不同间隔时间（10 min、90 min、4 h、24 h）的测试,4组用于不同物体材质（木质木质、塑胶塑胶、塑胶木质、木质塑胶）的测试,2组用于重复测试（隔1 d或3 d测1次,共测3次）。视频跟踪记录小鼠在开场内的活动轨迹,分析其探索新旧物体的时间,计算小鼠对新物体的分辨比（DR）和分辨指数（DI）,评价各组小鼠的学习记忆情况。结果：检测间隔时间为10 min和90 min组的小鼠对新物体的DR和DI较旧物体显著加大（均P<001）;新旧物体不同材质对小鼠探究物体的时间、DR和DI影响较大,选择同一材质物体可使小鼠对新物体保持较为稳定的DR和DI;NOR实验可在同一批小鼠中重复测试,小鼠可持续保持对新物体的探究兴趣。结论：进行NOR实验时,选择较短的检测间隔时间和选用相同材质的物体可较好地评价小鼠学习记忆能力。NOR实验可重复测试。