正、反义β-1,4半乳糖基转移酶Ⅱ和Ⅴ地高辛标记RNA探针的制备和应用

目的 :为了探讨 β1,4半乳糖基转移酶 -Ⅱ和V(β1,4-galactosyltransferaseⅠ ,β -1,4-GalT -ⅡandⅤ )表达定位 ,本实验通过分子生物学手段 ,制备了正、反义 β -1,4-GalT -Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针。 方法 :设计引物 ,提取小鼠脑总RNA ,通过RT -PCR方法 ,得到 β -1,4-GalT -Ⅱ和Ⅴ基因序列 ,将其克隆到 pGEM -T载体。根据其多克隆酶切位点和Sp6及T7位置 ,分别酶切后作为转录模板 ,通过Sp6及T7RNA聚合酶 ,得到正、反义 β -1,4-GalT -Ⅱ和V地高辛标记的RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后 ,最后通过原位杂交分析标记探针的特异性和杂交效果。结果 :本实验得到了高效价的正、反义 β -1,4-GalT -Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针 ,并表现出很好的杂交效果。结论 :正、反义 β -1,4-GalT -Ⅱ和VRNA原位杂交探针的制备 ,为进一步研究 β -1,4-GalT -Ⅱ和Ⅴ在组织中的表达 ,尤其在神经组织的定位奠定基础     

预防医学定稿会议在泰州市举行

本期预防医学栏目定稿会议于 2 0 0 2年 7月 1 4日在泰州市举行 ,与会代表有泰州市、盐城市、无锡市、苏州市以及南通市、海门市预防医学方面的专家共 1 4名。会议收到论文 50余篇 ,有论著、经验交流、专题讲座、技术方法、案例报告等 ,内容比较丰富、贴近实际。会议审定录用稿件 3 0余篇。泰州市卫生防疫站熊国华副站长 ,为会议的召开作了筹组工作 ,并给予有力支持。编辑部再次表示衷心感谢。预防医学定稿会议在泰州市举行@严美娟     

神经生长因子高亲和力受体互补核糖核酸探针的研究

目的 制备用地高辛标记的神经生长因子高亲和力受体(Trk A)正、反义互补核糖核酸(cRNA)探针的研究。方法 设计Trk A引物，构建pGEM-T Easy-Trk A重组质粒，分别用ApaI和SacI进行酶切得到线性DNA片段，以SP6和T7RNA聚合酶转录合成带有地高辛标记的高比活度的正、反义单链cRNA探针。结果 经斑点杂交证实，该探针敏感性高、特异性强。Trk A-ApaⅠ探针稀释12500倍后的浓度为40ng／μl；Trk A-SacⅠ稀释1：2500倍后的浓度为8ng/μl。结论 成功制备了地高辛标记的Trk A cRNA探针，为毒理学中有关Trk A mRNA在组织、细胞的表达和分布的研究提供了有效工具。     

两型星形胶质细胞基因表达谱差异的初步观察

目的:研究不同型别星形胶质细胞的基因表达谱,比较1型和2型星形胶质细胞基因表达谱之间的差异,以进一步研究两者的生物学特性及其功能。方法:原代培养新生SD大鼠大脑皮质混合胶质细胞,经振荡和差速消化纯化培养1型星形胶质细胞(T1A)和2型星形胶质细胞(T2A);应用基因芯片技术获取T1A和T2A的基因表达谱,并对两者的基因表达谱进行初步分析。结果:基因芯片上检测点4096个,共有差异表达基因267条,其中113条在T1A中高表达,154条在T2A中高表达。结论:本实验获得大鼠大脑T1A和T2A的基因表达谱,首次报道267条存在于T1A和T2A之间的差异表达基因。     

β1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ影响雪旺氏细胞增殖的机制

目的探讨β1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ影响雪旺氏细胞增殖的机制.方法将不同浓度的β-1,4-GalT-Ⅰ表达质粒转染雪旺氏细胞,采用Westem blot方法检测增殖相关信号分子cyclin D1、p16INK4以及p27Kipl的表达水平,Northem blot方法检测p19ARF的表达变化.结果随着β-1,4-GalT-Ⅰ在雪旺氏细胞中的表达增加,cyclin D1表达降低,而p16INK4a和p19ARF呈现相反的变化;p27Kipl变化不明显.结论β-1,4-GalT-Ⅰ影响雪旺氏细胞增殖可能与cyclin D1、p16INK4a和p19ARF介导的信号传导途径有关.     

正、反义β-1,4-半乳糖基转移酶V表达质粒在星形胶质细胞瘤细胞中的转染与鉴定

目的：构建β-1，4-半乳糖基转移酶-V(β-1，4-GalTV)正、反义表达质粒，并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中，为探讨神经胶质瘤细胞表达β-1，4-GalTV的生物学意义提供研究基础。方法：构建β-1，4-GalTV表达质粒，并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中；用Western印迹和Northern印迹鉴定转染情况。结果：通过酶切鉴定和测序分析，实验成功构建β-1，4-GalTV表达质粒。将构建的表达质粒转染到胶质细胞瘤细胞SHG-44中，经鉴定表明，转染的正义表达质粒能增加胶质细胞瘤细胞SHG-44中的β-1，4-GalTV表达量，而转染反义质粒则能降低细胞中β-1，4-GalTV表达量。结论：正、反义β-1，4-GalTV表达质粒在人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中的稳定转染和表达，对分析胶质瘤细胞表达β-1，4-GalTV的意义如对肿瘤细胞的增殖、迁移和黏附等的影响提供了研究基础。     

不同气腹压力对全麻下腹腔镜胆囊切除术呼吸循环功能的影响

目的观察不同气腹压力对全麻下腹腔镜胆囊切除术(laparoscopiccholecystectomy,LC)血流动力学和呼吸功能的影响。方法60例美国麻醉医师协会(americansocietyofanesthesiologists,ASA)分级Ⅰ、Ⅱ级,因胆石症或胆囊息肉行LC的病人,随机分为高气腹压力组(H组)和低气腹压力组(L组),每组30例,两组病人全麻诱导均选择咪唑安定0.1mg/kg、芬太尼4μg/kg、异丙酚1mg/kg、维库溴铵0.1mg/kg,术中吸入异氟醚、间断静注芬太尼及维库溴铵维持麻醉。L组术中气腹压力控制在(8±1)cmH2O,H组术中气腹压力控制在(12±1)cmH2O,记录两组病人气腹前、气腹后10、20和30min和放气后5min时的BP、HR、Ppeak、PETCO2,并抽取桡动脉血行血气分析测定PaO2、PaCO2、pH、SBE,根据血气分析计算VCO2、A-aDO2、Pa-PETCO2。结果与气腹前比,气腹后两组病人的SBP、DBP均增高,HR增快,但两组间差异无显著性;两组病人的Ppeak、PETCO2、PaCO2、A-aDO2、SBE、VCO2气腹后10、20和30min均明显高于气腹前(P<0.05),且H组高于L组。结论全麻下腹腔镜胆囊切除术时采用12cmH2O腹腔CO2气腹压力会使机体CO2的吸收和排出增加,机体有呼吸性酸中毒的危险。     

鬼臼乙叉甙对SHG-44胶质瘤细胞表达β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅴ后粘附相关分子表达的影响

目的　研究人脑星形胶质细胞瘤SHG 4 4细胞表达 (β 1,4 半乳糖基转移酶Ⅴ (beta 1,4 galactosyltransferaseⅤ ,β 1,4 GalTⅤ )后对化疗药物敏感性的影响 ,分析鬼臼乙叉甙 (VP16 )处理表达 β 1,4 半乳糖基转移酶Ⅴ的SHG 4 4细胞后其细胞粘附作用相关因子水平的变化。方法　用 12 0 μmol/L的VP16处理转染了正义、反义 β 1,4 GalTⅤ和空载体的SHG 4 4细胞 2 4h后 ,采用westernblot检测整合蛋白 β1表达变化及局部粘着斑激酶 (focaladhesionkinase,FAK)的蛋白水平和FAK的酪氨酸磷酸化水平。结果　在未经VP16处理的 3株SHG 4 4细胞中 ,FAK的蛋白水平没有明显改变 ,而整合蛋白 β1的蛋白表达在转正义 β 1,4 GalTⅤ的细胞中最高 ;经VP16处理后 ,SHG 4 4细胞中整合蛋白β1的表达水平增高 ,FAK及其磷酸化水平下降。但整合蛋白β1,FAK及其磷酸化水平随细胞中 β 1,4 GalTⅤ表达水平不同而变化。 结论　VP16处理对表达不同水平的β 1,4 GalT Ⅴ的SHG 4 4胶质瘤细胞的粘附影响有所不同 ,提示胶质瘤表达 β 1,4 GalTⅤ不仅与肿瘤的恶性行为有关 ,而且与肿瘤的化疗敏感性有关。     

β1,4-GalT I在大鼠坐骨神经损伤后脊髓和背根神经节中的表达

目的:观察β1,4-GalTImRNA在坐骨神经损伤后相应节段脊髓和背根神经节中的表达变化。方法:采用real-timePCR方法,分析β1,4-GalTImRNA在大鼠坐骨神经损伤后相应脊髓和背根神经节中的表达变化。运用原位杂交检测β1,4-GalTI在脊髓和背根神经节中的定位情况。结果:Real-timePCR显示,与正常脊髓和背根神经节相比,β1,4-GalTI在坐骨神经损伤后发生表达变化。原位杂交结果显示β1,4-GalTI在正常脊髓中的表达较弱,主要表达于脊髓灰质中,而损伤后在灰质和白质中均可见有大量的阳性信号。β1,4-GalTI在背根神经节中则主要定位于神经元。结论:本实验发现β1,4-GalTI在正常脊髓和背根神经节中有表达,并在坐骨神经损伤后发生表达变化。提示β1,4-GalTI在周围神经损伤后再生和退变过程中可能发挥一定的作用。     

右旋美托咪啶对冠状动脉旁路移植术患者气管插管时的血流动力学影响

目的 观察右旋美托咪啶(镇静药)和小剂量舒芬太尼(麻醉药)在服用β-受体阻滞剂的冠状动脉旁路移植术患者麻醉诱导时的血流动力学状态.方法 选择30例欲行冠状动脉旁路患者,随机分为2组:对照组,使用生理盐水;试验组,在麻醉诱导前,使用右旋美托咪啶0.5gμg·kg<'-1>,接着持续用0.5 μg·kg<'1>·h<-1>,记录基础、安慰剂或右旋美托咪啶注射后、全麻诱导后及气管内插管后1,3,5 min时的血压和心率.结果 试验组,各个时间点的SAP、DAP和MAP与基础值相比明显降低,有统计学差异(P<0.05);在麻醉诱导后(T<,2>)与对照组相比,有统计学差异(P<0.05);在试验药物注射后(T<,1>)、气管插管后1min(T<,3>)与对照组相比明显降低,有统计学差异(P<0.05);试验组的心率,在气管插管后与对照组相比明显降低,有统计学差异(P<0.05).结论 冠状动脉旁路移植术患者使用右旋美托咪啶,安全并可降低麻醉诱导时的血流动力学反应.