大鼠海马组织中神经元型一氧化氮合酶基因克隆

目的 :克隆胚胎大鼠海马组织中神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)基因。方法 :采用RT -PCR法 ,从胚胎大鼠海马组织mRNA中扩增nNOS基因CDS区片段 ,克隆入T载体 ,筛选阳性克隆、酶切签定并经序列测定。结果 :RT -PCR法扩增出一特异产物与预期长度 2 4 0bp相符 ,DNA序列测序的结果与GenBank的序列 (U6 730 9)比较 ,所克隆的nNOS基因与其中的 2 4 0bp完全相同 ,与nNOS基因 10 0 %同源。结论 :采用RT -PCR和T载体技术获得了胚胎大鼠海马组织中的nNOS基因克隆     

地高辛标记的小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶RNA探针的制备和应用

为了制备小鼠 β-1,4-半乳糖基转移酶 ( β-1,4-galactosyltransferase ,β-1,4-Gal T- )地高辛标记的 RNA探针以探讨β-1,4-Gal T- m RNA在坐骨神经组织的表达定位 ,本研究用提取的小鼠脑总 RNA,采用 RT-PCR方法 ,得到β-1,4-Gal T- 的 DNA片断 ,将其克隆到 p GEM-T载体 ;采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ;运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度 ;最后应用该探针 ,通过原位杂交的方法 ,分析 β-1,4-Gal T- m RNA在小鼠坐骨神经的表达。结果 :构建了β-1,4-Gal T- /p GEM-T质粒 ,获得了高效价的地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ,应用该探针发现 β-1,4-Gal T- 在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达。以上结果表明 ,制备的地高辛标记的正、反义 β-1,4-Gal T- RNA原位杂交探针可特异地检测β-1,4-Gal T- m RNA在组织中的表达。本研究为进一步分析β-1,4-Gal T- 在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础。     

异丙酚联合芬太尼或瑞芬太尼静脉麻醉用于结肠镜检查的疗效观察

目的观察异丙酚联合芬太尼或瑞芬太尼静脉麻醉用于纤维结肠镜检查的临床效果。方法60例需行纤维结肠镜检查的患者随机分为3组，每组20例。治疗组1给予异丙酚静脉注射，治疗组2给予芬太尼0.1 μg·kg^-1静脉注射＋异丙酚静脉注射，治疗组3给予瑞芬太尼0.2 μg·kg^-1·min^-1微泵维持＋异丙酚静脉注射，待患者进入4级镇静状态时开始进镜，肠镜进入回盲部开始退镜时停止用麻醉药。观察3组患者的麻醉时间、异丙酚用量，记录检查前、进镜时、肠镜进入肝曲时和检查结束时血氧饱和度、心率、收缩压、舒张压和停用麻醉药后睁眼时间、定向恢复时间、呼吸抑制发生例数。结果治疗组1异丙酚用量最大；治疗组3血流动力学波动最大。但3组均在正常范围。治疗组3睁眼时间、定向恢复时间最短。3组间呼吸抑制差异无显著性。结论纤维结肠镜检查静脉麻醉时异丙酚联合芬太尼或瑞芬太尼能减少异丙酚用量，联合瑞芬太尼时能使患者苏醒时间缩短，但使用过程中应注意患者血流动力学变化。     

医学科研管理者的信息素质教育

信息化的发展对医学科学研究的影响极大。医学科学技术和信息技术的迅猛发展需要医学科研管理者提高信息素质。医学科研管理者应具备的信息素质有：工具、资源、社会结构、研究、出版和传播信息素质等。医学科研管理的信息素质教育的方法包括：信息意识的培养、信息道德素质的养成、信息能力培养、信息基本技能培训等。医学科研管理具有与一般行政管理的不同点在于是技术管理，具有很强的专业性、时效性。应该加强对医学科研管理者的信息素质教育。     

正、反义β1,4半乳糖基转移酶-V表达质粒的构建

目的 :探讨不同 β1,4半乳糖基转移酶 -V (β -1,4-GalTV)表达水平的生物学意义 ,构建正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。方法 :设计 β -1,4-GalTV全长引物 ;提取小鼠脑总RNA ,通过RT -PCR方法 ,得到全长 β -1,4-GalTV基因片段 ,将其克隆到 pGEM -T载体。再通过多克隆酶切位点 ,将 β -1,4-GalTV全长序列克隆到 pcD NA 3 .1表达载体中。设计反义引物 ,以pGEM -β -1,4-GalTV质粒为模板 ,将PCR产物克隆到 pcDNA 3 .1表达载体中。通过酶切和测序鉴定构建的质粒。结果 :通过酶切和测序证实 ,得到了正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。 结论 :正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒的构建 ,为进一步研究不同 β -1,4-GalTV表达水平的生物学意义奠定基础。     

阿扎司琼和氟哌利多预防腹腔镜胆囊切除术后恶心呕吐的效果观察

目的观察阿扎司琼和氟哌利多对腹腔镜胆囊切除手术(LC)患者术后恶心呕吐(PONV)的预防作用。方法150例ASAⅠ~Ⅱ级LC患者随机分为3组,每组50例,全麻诱导前静脉注射C组生理盐水2ml,B组氟哌利多5mg和A组阿扎司琼10mg。观察3组患者手术结束后0~4小时、5~8小时、9~24小时、25~48小时各时段恶心、呕吐和48小时内头痛、头晕、嗜睡和锥体外系症状的发生情况。结果3组中A组PONV的发生率最低(P<0.05),B组次之;头晕发生率B组明显高于C、A两组(P<0.05),头痛发生率B组高于C组(P<0.05),C、A两组间无显著性差异,嗜睡的发生率B组高于C组。结论阿扎司琼10mg和氟哌利多5mg静脉注射能明显减少LC患者PONV的发生率,但阿扎司琼10mg效果更佳,不良反应少;使用氟哌利多5mg会增加头痛、头晕、嗜睡的发生率。     

β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ影响雪旺细胞衰老的研究

目的:探讨β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ与雪旺细胞衰老的相关性.方法:以不同浓度的β-1,4-GalT-Ⅰ表达质粒转染雪旺细胞,观察衰老相关半乳糖苷酶染色情况.以Ha-Ras转染雪旺细胞诱导衰老,采用Northern blot 方法检测转染后不同时间β-1,4-GalT-Ⅰ表达变化.结果:随着转染β-1,4-GalT-Ⅰ表达质粒浓度的提高,细胞衰老相关半乳糖苷酶染色阳性率增高;随着Ha-Ras转染时间的延长,β-1,4-GalT-Ⅰ表达逐渐增高.结论:β-1,4-GalT-Ⅰ与雪旺细胞的衰老相关,并可能在周围神经雪旺细胞的增殖调节中发挥重要作用.     

星形胶质细胞的基因表达谱差异

目的 研究1型和2型星形胶质细胞的基因表达谱差异，为深入研究TIA和T2A生物学特性及功能方面的异同打下基础。方法 以振荡法和差速贴壁纯化培养1型星形胶质细胞（TIA）和2型星形胶质细胞（T2A），提取总RNA，分别以Cy3-dCTP和Cy5-dCTP标记TIA和T2A的mRNA，进行基因表达谱芯片检测分析。结果 基因芯片上检测点4096个，4次结果交集显示共有差异表达基因138条（60条在TIA中高表达，78条在T2A中高表达），其中生物学功能较为明确的差异表达基因为99条（42条在T1A中高表达，57条在T2A中高表达）。结论 通过该研究获得了大鼠大脑TIA和T2A的基因表达谱，TIA和T2A之间存在99条生物学功能较为明确的差异表达基因。     

SHG-44胶质瘤细胞表达β-1,-半乳糖基转移酶V后对鬼臼乙叉甙敏感性影响

目的研究鬼臼乙叉甙(Etoposide,P16)对表达β-1,-半乳糖基转移酶V(beta-1,-galactosyltransferase V,β-1,-GalT V)的SHG-44胶质瘤细胞死亡和凋亡的影响,为进一步探讨β-1,-GaIT V与化疗药物敏感性的关系莫定基础.方法通过流式细胞仪(FCM)和Hoechst 33258染色法,分析不同浓度的VP16处理转染了正义(GalTV-HA/SHG-44)、反义β-1,-GalT V(GaITV-AS/SHG-44)和空载体(Mock)的SHG-44细胞后细胞的凋亡和死亡情况.结果①低浓度的VP16(20 μmoL/L)处理24 h后,alTV-HA/SHG-44组的死亡细胞加上凋亡细胞的比例明显低于Mock组(t=4.550 6,＜0.01)和GalTV-AS/SHG-44组(t=5.086 5,＜0.001).GalTV-AS/SHG-44组的死亡细胞加上凋亡细胞比例明显高于Mock组(t=3.287 3,＜0.01).高浓度的VP16(120μmoL/L)处理48 h和72 h后,alTV-HA/SHG-44组死细胞所占比例明显低于Mock组(t=3.3664,P＜0.05;t=5.495 3,＜0.01)和GalTV-AS/SHG-44组(t=3.173 2,＜0.01;t=4.603 5,＜0.001).②MTr分析显示,P16处理48,2h后,alTV-HA/SHG-44组活细胞数明显高于Mock组(t=5.078 3,＜0.05;t=3.8923,＜0.01)和GalTV-AS/SHG-44组(t=4.566 7,P＜0.01;t=4.784 9,＜0.001).③VP16(20 μmoL/L)处理24 h后,用Hoochst 33258染色.镜下观察到死亡或者凋亡细胞中的细胞核仁及断裂的核片段呈新月形,或核固缩并深染.GalTV-AS/SHG-44组平均死亡和凋亡阳性率为41%,大大高于经同样处理的转染空载体和转染正义β-1,-GalT V的SHG-44细胞.结论β-1,-GalTV能够影响抗肿瘤药VP16的杀伤作用,过表达β-1,4-GalT V可以拮抗VP16的作用,为解释胶质瘤的化疗耐药性提供了新的依据.     

SHG-44胶质瘤细胞表达β-1，4-半乳糖基转移酶V后对鬼臼乙叉甙敏感性影响

目的：研究鬼臼乙叉甙(Etoposide，VP16)对表达β-1，4-半乳糖基转移酶V(beta-1，4-galactosyltransferase V，β-1，4-GaITV)的SHG-44胶质瘤细胞死亡和凋亡的影响，为进一步探讨β-1，4-GaIT V与化疗药物敏感性的关系奠定基础。方法：通过流式细胞仪(FCM)和Hoeehst 33258染色法，分析不同浓度的VP16处理转染了正义(GalT V-HA／SHG-44)、反义β-1，4-GalT V(GalT V-AS／SHG-44)和空载体(Mock)的SHG-44细胞后细胞的凋亡和死亡情况。结果：①低浓度的VP16(20μmoL／L)处理24h后，GalT V-HA／SHG-44组的死亡细胞加上凋亡细胞的比例明显低于Mock组(t=4．5506，P&;lt;0．01)和GalT V-AS／SHG-44组(t=5．0865,P&;lt;0．001)。GalT V-AS／SHG-44组的死亡细胞加上凋亡细胞比例明显高于Mock组(t=3．2873，P&;lt;0．01)。高浓度的VP16(120μmoL／L)处理48h和72h后，GalT V-HA／SHG-44组死细胞所占比例明显低于Mock组(t=3．3664，P&;lt;0．05；t=5．4953，P&;lt;0．01)和GalT V-AS／SHG-44组(t=3．1732，P&;lt;0．01：t=4．6035，P&;lt;0．001)。②MTT分析显示，VP16处理48，72h后，GalT V-HA／SHG-44组活细胞数明显高于Mock组(t=5．0783,P&;lt;0．05；t=3．8923,P&;lt;0．01)和GalT V-AS／SHG44组(t=4．5667，P&;lt;0．01；t=4．7849，P&;lt;0．001)。③VP16(20μmoL／L)处理24h后，用Hoechst 33258染色。镜下观察到死亡或者凋亡细胞中的细胞核仁及断裂的核片段呈新月形。或核固缩并深染。GalT V-AS／SH组平均死亡和凋亡阳性率为41％，大大高于经同样处理的转染空载体和转染正义β-1，4-GaIT V的SHG44细胞。结论：β-1，4-GalT V能够影响抗肿瘤药VP16的杀伤作用，过表达β-1，4-GalT V可以拮抗VP16的作用，为解释胶质瘤的化疗耐药性提供了新的依据。