低氧环境和生长分化因子-5联合诱导促进人骨髓基质干细胞分化成软骨细胞的研究

目的 探讨低氧环境下生长分化因子-5 (GDF-5)诱导人骨髓基质干细胞(hBMSCs)“自组装”形成工程化软骨的可行性和有效性。方法 分离培养hBMSCs,流式细胞学方法鉴定。将hBMSCs用含100 ng/mL GDF-5软骨诱导液(CM)分别在低氧（A组）和正常氧（B组）环境下诱导培养3周,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和Aggrecan表达情况。将A、B两组hBMSCs消化后,按一定密度接种于2％琼脂糖包被的24孔板,在不同氧浓度下CM继续诱导3周,免疫组化法检测组织Ⅰ、Ⅱ型胶原表达,甲苯胺蓝染色检测葡萄糖胺聚糖(GAG)表达。结果 hBMSCs呈梭形漩涡状生长,高表达CD44、CD29,不表达CD45分子。诱导5d后A组细胞较B组明显增殖,诱导10dA组细胞体积较B组小。含GDF-5的CM诱导hBMSCs 3周后,Ⅱ型胶原和Aggrecan mRNA表达阳性,A组Ⅱ型胶原和Aggrecan表达量较B组均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05)。GDF-5诱导hBMSCs可“自组装”形成一定形状大小类软骨样组织,A组Ⅱ型胶原表达较B组增加,A组Ⅰ型胶原表达量下降,B组表达阳性;A组甲苯胺蓝染色异染加深。结论 低氧促进GDF-5诱导hBMSCs向软骨分化,低氧环境下GDF-5诱导软骨分化的hBMSCs“自组装”形成的工程化软骨更具有软骨表型。     

外源性肿瘤坏死因子-α诱发兔椎间盘退变中β-catenin蛋白的表达及意义

目的 通过外源性肿瘤坏死因子(TNF)-α注射构建兔椎间盘退变动物模型,探讨该模型中β-catenin蛋白的表达及意义和炎性细胞因子在促进腰椎间盘退变过程中Wnt/β-catenin信号通路的作用.方法 选取12只健康成年日本白兔,雌雄随机,体质量2.5～3.0kg.手术暴露L2～5 3个间隙共36个椎间盘.随机分为4组,分别注入生理盐水、TNF-α 5 ng、TNF-α 10ng、TNF-α 20 ng,于术后第8周统一处死,取椎间盘髓核组织作苏木素-伊红(HE)-番红O染色病理切片进行形态学观察;各组分别随机选取4个椎间盘髓核组织标本,采用蛋白印迹法(Western blot)测定β-catenin蛋白含量并比较各组间差异.结果 HE-番红O染色病理切片显示,在5、10、20 ng组椎间盘组织中髓核细胞数量减少,正常网状结构破坏,细胞形态发生改变,出现肥大空泡样软骨细胞,组织基质蛋白聚糖含量明显降低,番红O淡染,生理盐水对照组椎间盘形态基本正常,无退变发生.蛋白印迹结果显示β-catenin蛋白含量在注射TNF-α组明显增加,各组吸光度比值分别为:0.142±0.036、0.351±0.041、0.472±0.052和0.710±0.063,组间差异有统计学意义(P＜0.05)且与TNF-α浓度相关.结论 通过外源性TNF-α盘内注射能够成功构建兔椎间盘退变动物模型,且退变程度与TNF-α呈浓度依赖性;在退变模型髓核组织中β-catenin蛋白含量增高且与TNF-α浓度正相关,提示炎症细胞因子触发了Wnt/β-catenin信号通路,在椎间盘退变过程中可能发挥了重要作用.     

骨肉瘤肺转移与血管内皮生长因子和微血管密度的关系

目的 探讨骨肉瘤盱市转移与血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的关系.方法 用免疫组织化学法检测30例骨肉瘤组织中VEGF的表达和MVD.结果 VEGF在骨肉瘤中的阳性率表达分别为70.00%(21/30),其中有肺转移的病例阳性率为92.31%(12/13).无肺转移病例的阳性率为52.94%(9/17),差异有统计学意义(P<0:05).骨肉瘤组织中VEGF阳性表达与骨肉瘤的组织学分型无明显相关(P>0.05).骨肉瘤中VEGF表达强度与MVD呈正相关(r=0.799,P<0.01);有肺转移的骨肉瘤患者其瘤组织中MVD与无肺转移的骨肉瘤患者其瘤组织中MVD差异有统计学意义(P<0.05),有肺转移的明显高于无肺转移的病例.结论 VEGF是促进微血管生成的主要细胞因子,检测VEGF表达与MVD值可作为判断肿瘤预后的重要指标.     

髋臼骨折的外科治疗

目的 探究内固定技术在治疗髋臼骨折中的临床疗效和优越性.方法 2000年1月至2005年1月行切开复位内固定术治疗髋臼骨折48例.按照Letournel分型,其中后壁骨折8例,横形骨折7例,横行加后壁骨折10例,T型骨折7例,前柱伴后半横形骨折7例,双柱骨折6例,后柱后壁骨折3例.单纯应用拉力螺钉11例,单纯应用重建钢板21例,重建钢板加拉力螺钉16例.结果 48例患者随访12～48个月,骨折全部愈合,复位质量按Matta标准达到解剖复位30例,满意复位18例.按照美国矫形外科研究院评价髋关节功能的方法最终结果优26例,良15例,可5例,差2例,优良率85.4%.结论 手术复位和内固定治疗髋臼骨折可获得良好的临床效果.     

RNA干扰沉默PPARγ基因对小鼠骨髓基质干细胞成脂与成骨分化潜能的影响

目的 观察RNA干扰沉默PPAγ基因对小鼠骨髓基质干细胞成脂与成骨分化潜能的影响.方法 针对小鼠PPARγ基因,构建短发夹RNA(shRNA)真核表达载体并转染小鼠骨髓基质干细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹沉淀(Wetem-blot)观察PPARγ的基因沉默效果.分别在成脂及成骨诱导培养基条件下,诱导培养14 d,采用油红O(Oil Red O)染色及茜素红染色鉴定分化结果.并与空载体转染组和未转染组比较.结果 测序证实成功构建PPARγ的shRNA真核表达载体pSilencer-shPPARγ,转染小鼠骨髓基质干细胞后,PPARγ基因表达在转录水平和翻译水平都显著受到抑制,与两对照组相比,抑制率分别为92%和90%.成脂及成骨诱导分化后,shPPARγ转染组小鼠骨髓基质干细胞的成骨分化率为56.46%±1.92%,明显高于pSilencer-neo空载体转染组和未转染组(P<0.01);成脂分化率为19.24%±0.98%,显著低于pSilencer-shPPARγ-neo空载体转染组和未转染组(P<0.01).结论 RNA干扰沉默PPARγ基因后,可增强小鼠骨髓基质干细胞的成骨分化潜能,抑制其成脂分化潜能.     

跟骨骨折的手术治疗

目的 探讨跟骨骨折的手术治疗方法及临床效果评价.方法 我院自2005年1月至2008年4月对53 例（58足）跟骨骨折采用切开复位钢板内固定治疗.按Sanders CT进行分型,Ⅱ型33足,Ⅲ型18足,Ⅳ型7足.结果 53 例术后均获随访,时间6～36月,平均18月.采用Maryland Foot Score系统进行术后功能评价,优35足,良14足,中7足,差2足,优良率84.5%.术后并发症：3 例皮瓣坏死,愈合延期;4 例慢性疼痛;2 例创伤性关节炎.结论 选择合适的手术时机,采用钢板内固定,必要时植骨,争取最佳解剖复位,配合术后合理康复锻炼,能使足功能达到最大程度的恢复.     

髋臼骨折手术入路的选择

在过去的30年,对于移位的髋臼骨折采取积极的早期切开复位内固定治疗已为大多数学者认可。但由于髋臼位置特殊、骨折的极度复杂性、骨折线分布与走向判断困难,导致髋臼骨折治疗困难。而合适的手术入路对于术中满意的显露、复位、固定尤为重要,可以减少手术创伤,减少手术并发症,有利于术后关节及肢体功能恢复。     

大转子截骨术治疗PipkinⅠ和Ⅱ型股骨头骨折疗效观察(英文)

目的评估大转子截骨术治疗PipkinⅠ和Ⅱ型股骨头骨折的中远期临床疗效。方法回顾分析采用大转子截骨术治疗股骨头骨折并髋关节后脱位患者23例,其中男性15例,女性8例,平均年龄44.1岁。临床疗效依据和d’Aubigne-Postel评分标准而确定。结果除1例患者因随访少于12个月而没有纳入研究外,余22例患者随访时间均不少于12个月。患者平均随访时间为23.5个月(最短12个月,最长36个月)。最后一次随访d’Aubigne-Postel的评分为13.41±4.0分;Thompson-Epstein的临床评价结果:8例优(36.4%),9例良(40.9%),3例一般(13.6%),2例差(9.1%),优良率为77.3%。患者术后无脱位发生,2例患者术后发生异位骨化,1例坐骨神经损伤患者术后6月后完全恢复正常,3例患者出现术后创伤性关节炎,其中1例术后1年因发生股骨头缺     

Promotion of chondrogenesis of marrow stromal stem cells by TGF-β3 fusion protein in vitro

The purpose of this study was to investigate the repair of the osteoarthritis（OA）-induced car- tilage injury by transfecting the new TGF-β3 fusion protein （LAP-MMP-mTGF-β3） with targeted ther- apy function into the bone marrow-derived mesenchymal stem cells （MSCs） in rats. The recombinant of plRES-EGFP-MMP was constructed by combination of DNA encoding MMP enzyme cutting site and eukaryotic expression vector plRES-EGFP. LAP and mTGF-β3 fragments were obtained from rat em- bryos by RT-PCR and inserted into the upstream and downstream of MMP from plRES-EGFP-MMP respectively, so as to construct the recombinant plasmid ofplRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3, plRES- EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3 was transfected into rat MSCs. The genetically modified MSCs were cul- tured in medium with MMP-1 or not. The transfected MSCs were transplanted in the rat OA models. The OA animal models were surgically induced by anterior cruciate ligament transaction （ACLT）. The pathological changes were observed under a microscope by HE staining, Alcian blue, Safranin-fast Gre- en and graded by Mankin＇s scale, plRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3 was successfully constructed by means of enzyme cutting and sequencing, and the mTGF-β3 fusion protein （39 kD） was certified by Western blotting. Those genetically modified MSCs could differentiate into chondrocytes induced by MMP and secrete the relevant-matrix. The transfected MSCs could promote chondrogenesis and matrix production in rat OA models in vivo. It was concluded that a new fusion protein LAP-MMP-mTGF-β3 was constructed successfully by gene engineering, and could be used to repair the OA-induced cartilage injury.     

TGF-β1短时间干预间充质干细胞可增加其CXCR4的表达及迁移能力

目的 观察转化生长因子β1 (TGF-β1)短时间干预间充质干细胞(MSCs)后趋化因子受体4(CXCR4)的表达及对MSCs迁移能力的影响.方法 MSCs被不同浓度(0、0.01、0.1、1、10 ng/mL)和时间梯度(6、12、24、48 h)的TGF-β1干预后,采用流式细胞术鉴定MSCs细胞,通过Western blot和real-time quantitative PCR检测CXCR4的表达,并使用transwell小室实验来鉴定MSCs细胞的迁移能力.CXCR4基因的甲基化状态通过甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测.结果 将MSCs细胞短时间暴露在TGF-β1中会导致CXCR4的蛋白水平以浓度依赖性的方式升高,且随着干预时间的延长表达升高,于24 h时达到高峰;而此时,检测MSCs细胞暴露于TGF-β124 h这个时间点的CXCR4的mRNA水平,发现其以浓度依赖性的方式升高,而且MSCs的迁移能力增强,但MSP的结果显示CXCR4基因甲基化状态并未发生改变.结论 MSCs细胞经TGF-β1干预后,其CXCR4的表达增加,迁移能力增强.