骨髓基质细胞和壳聚糖/明胶共混材料生物相容性研究

目的:研究壳聚糖/明胶共混材料对离体培养的骨髓基质细胞粘附及增殖的影响,寻找骨髓基质细胞新的载体材料。方法:取2周龄幼兔的长骨采集骨髓,培养骨髓基质细胞,体外扩增1周后,种植于纯壳聚糖和壳聚糖/明胶共混材料的表面。在倒置光学显微镜、扫描电镜的辅助下,观察细胞的粘附和生长情况,种植7d后用透射电镜观察细胞功能状况,用MTT方法检测种植后2d、4d、6d、8d细胞的增殖情况。结果:壳聚糖/明胶共混材料和纯壳聚糖能促进骨髓基质细胞在材料表面粘附并保持其在机体内的形态。壳聚糖/明胶共混材料表面的骨髓基质细胞功能活跃。在材料表面和培养板表面培养的骨髓基质细胞均能持续增殖,而壳聚糖/明胶共混材料能显著促进骨髓基质细胞的增殖(P<0.01)。结论:壳聚糖/明胶共混材料保持了壳聚糖的某些生物活性,同时由于加入明胶,能促进骨髓基质细胞的增殖,可作为骨髓基质细胞的载体应用于组织工程。     

短发夹状RNA使骨肉瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α基因沉默

目的构建低氧诱导因子HIF-1α发夹状小干涉RNA真核表达载体，观察发夹状双链小干涉RNA对骨肉瘤细胞HIF-1的转录后的基因沉默效果?方法体外合成两对互补的寡核苷酸链，分别针对缺氧诱导因子HIF-1αmRNA序列的两个靶位点。退火形成双链，插入pSilencer^TM neoU62．1真核表达载体。将构建好的载体经脂质体介导转染骨肉瘤SaOS-2细胞，观察HIF-lα基因的沉默效果。半定量RT—PCR检测HIF-1αmRNA的抑制程度，免疫荧光和免疫印迹(Western Blot)检测HIF-1α蛋白表达情况。结果测序证实成功构建HIF-1α发夹状小干涉RNA真核表达载体。转录生成的发夹状小干涉能够特异抑制HIF-1α表达。RT—PCR结果显示针对HIF-1αmRNA序列的两个靶位点的沉默效果分别为69％和92％，免疫荧光显示转染后荧光强度显著降低，免疫印迹显示两个靶位点的发夹状小干涉RNA分别使HIF-1α蛋白表达下降66％和90％。结论通过体内转录生成的发夹状小干涉RNA能够使骨肉瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α基因沉默。     

组织工程化凝胶诱导股骨头坏死血管化的实验研究

目的验证内皮细胞和平滑肌细胞(EC/SMC)移植可通过促进血管生成和骨再生治疗股骨头坏死。方法先建立无水乙醇诱导兔股骨头坏死模型,将制备的组织工程聚合物凝胶注射到骨坏死区域。分为未干预组、细胞/凝胶组、微球/凝胶组、细胞/微球/凝胶组,干预后第2、4、6周,通过影像学(X线和MRI)和组织病理学(HE染色)检测股骨头坏死后血管和骨组织再生。使用Image-Pro Plus图像分析软件对新生血管密度进行分析。结果 X线、MRI和组织病理学检测均显示骨坏死面积缩小,新生毛细血管和新生骨修复坏死区域。图像软件定量分析细胞/微球/凝胶组的新生血管密度明显高于其它各组。结论骨坏死区域形成稳定和功能成熟的血管网证明EC/SMC在治疗性血管再生的作用。局部注射组织工程化凝胶提供了治疗早期股骨头坏死的新方法。     

兔主动脉内皮细胞制备方法的优化

目的为构建骨组织工程血管化提供优质种子细胞。方法采用血管内膜外翻和胶原酶消化法分离培养兔主动脉内皮细胞并传代;采用倒置显微镜、透射电镜观察和免疫荧光法鉴定。结果培养的血管内皮细胞在第3~5天为对数生长期,倒置显微镜下可见内皮细胞呈紧密排列、短梭多角形的"鹅卵石"形态;透射电镜可见内皮细胞特征性Weible-Palade小体;经免疫荧光法鉴定证明该细胞CD31抗原阳性。结论采用血管内膜外翻等方法制备的兔血管内皮细胞的成活率高,且纯度高、数量多、具有良好的生物学活性。该法可为骨组织工程血管化的研究提供种子细胞。     

老年移位髋臼骨折手术治疗策略及疗效

目的探讨切开复位内固定术和一期全髋关节置换术治疗老年髋臼骨折的临床疗效并进行比较研究。方法1998～2005年间共收治45位年龄超过60岁的髋臼骨折患者，其中21例行切开复位内固定，10例行一期全髋关节置换术。手术距受伤时间不到2周，平均7d。术后常规给予抗凝药预防深静脉血栓形成，按康复计划进行恢复性功能锻炼，定期随访行髋关节功能Harris评分。结果本组随访1．5～7年，平均4年；最后随访时，切开复位内固定组Harris评分为69～84分，平均79分，优良率为57％，伴有较高的创伤性关节炎、异位骨化、股骨头骨坏死发生率；全髋关节置换术组患者的Harris评分为75～90分，平均84分，优良率为80％，仅有髋臼杯轻度移动（〈4mm），无假体松动、深部感染等并发症。结论全髋关节置换术治疗老年移位髋臼骨折可以取得比切开复位内固定更好的稳定性，术后恢复快、功能质量高，并发症少，是一种较好的选择。     

球囊后凸成形术治疗骨质疏松椎体压缩性骨折

目的 探讨球囊后凸成形术对骨质疏松椎体压缩性骨折的疗效.方法 回顾性随访2005～2007年采用经皮球囊后凸椎体成形术治疗老年人骨质疏松椎体压缩性骨折27例,43个椎体,测量术前术后骨折椎体的后凸角度,采用视觉模拟评分(VAS)比较患者术前和术后的疼痛变化.结果 本组病例均能耐受该手术,有5个椎体出现轻度骨水泥渗漏,但患者没有临床症状.术前术后脊柱X线片显示椎体高度有所恢复,脊柱后凸畸形改善,术前椎体后凸角度(19.7±7.2)°,术后(11.6±5.3)°,所有患者疼痛明显缓解,疼痛视觉模拟评分由术前8.0±1.3下降至术后3.7±1.5.结论 球囊后凸成形术能够有效地控制骨折疏松椎体压缩性骨折导致的疼痛,并可以部分恢复椎体高度和脊柱后凸畸形,有利于改善脊柱的功能,提高患者的生活质量.     

国产超高分子聚乳酸可吸收螺钉治疗髌骨骨折术后下肢功能评定半年随访

目的探讨国产超高分子聚乳酸可吸收螺钉治疗髌骨骨折的效果及安全性.方法病例来源于2002/2003在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科住院的行手术切开复位超高分子聚乳酸可吸收螺钉内固定的髌骨骨折患者28例.术后第2～3天患肢置于下肢持续被动器上做持续被动屈伸功能锻炼,第5天开始进行床上练习患肢主动屈膝活动;1周后持拐下地患肢不负重行走并逐渐加大屈膝活动,术后6周可逐渐脱拐行走.术后1,2,4,12和24周进行定期随访,评定膝关节功能,观察骨折愈合时间.结果全部病例平均随访11.7(6～20)个月.①远期膝关节功能评定术后6个月对患者关节功能评定结果为优17例,良9例,可2例,差0例.优良率93%.②骨折愈合时间随访3,4个月时,患者无畸形及延迟愈合发生;股四头肌萎缩6例,术后6～12个月恢复4例,12～18个月恢复2例;无一例患者发生螺钉松动或移位.结论超高分子聚乳酸可吸收螺钉具有良好的生物相容性及有效性;在早期能保证骨折端固定所需有强度,能达到安全、稳固牢靠的要求,且随着骨折的愈合,强度逐渐降低,和骨折愈合同步进行,不产生应力遮挡,有利于恢复骨的正常生物学结构和功能;固定强度维持时间长达6个月;最终能被人体完全吸收并排除体外.用于治疗髌骨骨折,膝关节功能恢复好,安全可靠,是髌骨骨折的理想内固定物.     

转铁蛋白-多聚乙烯亚胺介导IL-12基因对小鼠抗骨肉瘤免疫的增强作用

目的：研究以转铁蛋白一多聚乙烯亚胺(transferririn-polyethylenimine．Tf-PEI)为靶向性载体，体内转染小鼠白细胞介素12(murine interleukin-12，mIL-12)基因治疗小鼠骨肉瘤模型的疗效。方法：分别以PEI和Tf-PEI为载体，将mIL-12基因导人体外培养的小鼠骨肉瘤细胞，并观察游离转铁蛋白对Tf-PEI转染效率的影响。建立小鼠骨肉瘤动物模型，在荷瘤部位将Tf-PEI包裹mIL-12基因直接注入肿瘤中，检测此基因在肿瘤细胞中的蛋白表达情况和小鼠脾脏自然杀伤细胞(NK)、细胞毒T淋巴细胞(CTL)的活性。结果：Tf-PEI组mIL-12蛋白表达效率显著高于PEI组(f=38．15，P&;lt;0．001)。游离转铁蛋白可显著抑制Tf-PEI组的转染效率(1=44．36，P&;lt;0．001)。在注射有mIL-12基因的肿瘤组织中，小鼠IL-12蛋白水平明显升高，为(72&;#177;5)ng／L(F=3．449，P&;lt;0．001)，小鼠脾细胞：NK，CTL活性增强(t=5．04，t=6．13，P&;lt;0．001)。结论：Tf-PEI是一种高效率的肿瘤靶向性基因转染载体，它可以成功的将mIL-12基因导入小鼠骨肉瘤模型，mIL-12基因治疗可提高机体的抗肿瘤免疫应答。     

外源性肿瘤坏死因子-α诱发兔椎间盘退变中β-catenin蛋白的表达及意义

目的 通过外源性肿瘤坏死因子(TNF)-α注射构建兔椎间盘退变动物模型,探讨该模型中β-catenin蛋白的表达及意义和炎性细胞因子在促进腰椎间盘退变过程中Wnt/β-catenin信号通路的作用.方法 选取12只健康成年日本白兔,雌雄随机,体质量2.5～3.0kg.手术暴露L2～5 3个间隙共36个椎间盘.随机分为4组,分别注入生理盐水、TNF-α 5 ng、TNF-α 10ng、TNF-α 20 ng,于术后第8周统一处死,取椎间盘髓核组织作苏木素-伊红(HE)-番红O染色病理切片进行形态学观察;各组分别随机选取4个椎间盘髓核组织标本,采用蛋白印迹法(Western blot)测定β-catenin蛋白含量并比较各组间差异.结果 HE-番红O染色病理切片显示,在5、10、20 ng组椎间盘组织中髓核细胞数量减少,正常网状结构破坏,细胞形态发生改变,出现肥大空泡样软骨细胞,组织基质蛋白聚糖含量明显降低,番红O淡染,生理盐水对照组椎间盘形态基本正常,无退变发生.蛋白印迹结果显示β-catenin蛋白含量在注射TNF-α组明显增加,各组吸光度比值分别为:0.142±0.036、0.351±0.041、0.472±0.052和0.710±0.063,组间差异有统计学意义(P＜0.05)且与TNF-α浓度相关.结论 通过外源性TNF-α盘内注射能够成功构建兔椎间盘退变动物模型,且退变程度与TNF-α呈浓度依赖性;在退变模型髓核组织中β-catenin蛋白含量增高且与TNF-α浓度正相关,提示炎症细胞因子触发了Wnt/β-catenin信号通路,在椎间盘退变过程中可能发挥了重要作用.     

不同剂量激素对股骨近端的影响

目的 观察不同剂量地塞米松对大鼠股骨近端组织学、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)及其受体表达、细胞凋亡的影响.方法 将96只雄性Wister大鼠随机分为对照组(C组)、地塞米松剂量5 mg/kg组(L组)、10 ms/ks组(M组)、15 ms/kg组(H组).各组分别于用药后2、4、6、8周对股骨近端1/3骨质进行组织学、BMP-2及其受体表达和细胞凋亡检测.结果 实验组骨小梁/髓腔面积比、皮质/髓腔面积比、骨形态发生蛋白Ⅰ型受体(BMP-R T)的含量均随用药时间的增加以及剂量的增加而降低,均低于C组.空骨陷窝计数和凋亡细胞计数则有随用药剂量及时间的增加而增加的趋势.L组的BMP-2平均染色面积百分比和BMP-2染色的平均吸光度在2周时明显高于对照组,而后降低,至8周时已明显低于对照组;M组和H组2周时接近正常水平,4、6、8周逐渐降低至较低水平.结论 大剂量地塞米松可以显著降低股骨近端的骨质质量;激素对股骨近端的影响具有剂量依赖性.