中药五加皮抗肿瘤作用体内外实验研究

目的：分离中药五加皮抗肿瘤活性物质,研究五加皮提取物在体内外的抗肿瘤细胞作用,为五加皮抗肿瘤新药开发、研制提供依据。经皮下注射肿瘤细胞建立荷瘤小鼠动物模型,通过灌胃给药检测五加皮提取物的体内抗肿瘤作用。方法：用^3H—TdR掺入法测定了肿瘤细胞增殖反应;用凝胶层析法初步分离、纯化了五加皮抗肿瘤成分。结果：五加皮提取物对多种组织来源的肿瘤细胞增殖有较强的抑制作用(P<0．01),而且有较好的量效关系。五加皮提取物经口投入荷瘤小鼠后,实验组小鼠一般情况较对照组小鼠好,肿瘤生长较慢,生存期明显延长(P<0．01)。经凝胶层析分析,分离得到一种对肿瘤细胞增殖反应有抑制作用的蛋白质成分,分子量为64kda。结论：中药五加皮不仅在体外对多种肿瘤细胞增殖有抑制作用,在体内也有较好的抗肿瘤效果。其抗肿瘤活性与一种分子量为64kda的蛋白质成分有关,该成分的进一步分离、纯化和作用机理研究,对五加皮抗肿瘤作用的临床应用和新药开发提供科学依据。     

血管内皮生长因子促进卵巢癌细胞AO体外侵袭的机制探讨

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)对上皮性卵巢癌细胞株AO体外侵袭能力和对细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2),金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)表达的影响,探讨VEGF在卵巢癌浸润转移中的作用及可能机制。方法以处理卵巢癌细胞株AO,采用Boyden小室侵袭实验检测AO细胞体外侵袭能力,采用RT-PCR和Western免疫印迹检测AO细胞MMP-2的mRNA及蛋白表达情况,采用DQ明胶荧光检测法分析MMP-2酶活性。结果VEGF能双相调节卵巢癌细胞AO的体外侵袭能力及细胞中MMP-2的分泌及活性,低浓度(20￣40ng/mL)时明显增强癌细胞体外侵袭能力,上调MMP-2的分泌及活性,并随着VEGF的浓度增加该作用增强;但高浓度时(80ng/mL),其体外侵袭能力减弱,MMP-2的活性下降。MMP抑制剂BB3103能降低VEGF刺激后卵巢癌细胞AO的体外侵袭能力。此外,VEGF不影响卵巢癌细胞AO中MMP-2,TIMP-2的基因表达。结论VEGF促进卵巢癌侵袭转移,其作用机制的关键环节是促进MMP-2的分泌与活化。     

△Np73基因蛋白在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的应用流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测食管鳞癌组织中△Np73蛋白的表达，以探讨它与食管鳞癌的临床病理特征的关系。方法选取2005年1月至2006年12月在我院胸外科住院手术的食管癌患者47例，制备单细胞悬液，采用间接免疫荧光标记法用△Np73多克隆抗体对细胞进行染色，应用FACS-420型流式细胞仪进行分析。结果食管癌组织中△ND73表达阳性率明显高于癌旁组织、正常组织（P均〈0.01）。△ND73蛋白表达与食管癌浸润深度相关（P〈0.05，P〈0.01），而与肿瘤大小、组织分化程度、有无淋巴结转移及TNM分期等因素无关（P均〉0．05）。结论△Np73基因的表达变化可能与食管癌的发哇右展右姜．     

ΔNp73基因蛋白在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测食管鳞癌组织中ΔNp73蛋白的表达,以探讨它与食管鳞癌的临床病理特征的关系。方法选取2005年1月至2006年12月在我院胸外科住院手术的食管癌患者47例,制备单细胞悬液,采用间接免疫荧光标记法用ΔNp73多克隆抗体对细胞进行染色,应用FACS-420型流式细胞仪进行分析。结果食管癌组织中ΔNp73表达阳性率明显高于癌旁组织、正常组织(P均<0.01)。ΔNp73蛋白表达与食管癌浸润深度相关(P<0.05,P<0.01),而与肿瘤大小、组织分化程度、有无淋巴结转移及TNM分期等因素无关(P均>0.05)。结论ΔNp73基因的表达变化可能与食管癌的发生发展有关。     

口腔癌患者外周血树突状细胞的生物学特性

目的:研究口腔癌患者外周血树突状细胞(DC)的形态、表型和功能性变化及其临床意义. 方法: 口腔癌患者(实验组)及正常人(对照组)15例外周血单个核细胞经GM-CSF,IL-4及TNF-α诱导培养, 获取成熟DC, 光镜和电镜观察细胞的形态,流式细胞仪检测细胞表型如CD1a,CD83,CD80,CD86和HLA-DR等分子的表达变化,用噻唑蓝(MTT)法检测DC与自体和同种异体的混合淋巴细胞反应(MLR)中对淋巴细胞增殖的刺激能力. 结果: 正常人及口腔癌患者的外周血单个核细胞经体外7 d诱导培养,均诱导出具有典型形态和表型的DC,其中实验组细胞的CD83,CD1a表达率分别为49.3±9.5和48.1±7.3,与对照组两者表达率62.1±7.9和60.2±6.8相比,差异有统计学意义(P＜0.05),CD86,CD80和HLA-DR的表达率分别为85.5±8.7,83.2±8.1和78.3±5.4,与对照组三者表达率89.2±6.7,87.7±7.2和82.3±4.1相比无明显统计学差异(P＞0.05);实验组DC细胞CD83,CD1a,CD86,CD80和HLA-DR表达的平均荧光指数(MFI)分别为4.80±2.13,3.96±1.15,12.33±6.75,19.63±8.12和39.44±7.9, 均低于对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05);口腔癌患者来源的DC在体外具有诱导同种异体和自体外周血T细胞增殖的能力. 结论: 口腔癌患者外周血单核细胞来源可诱导成为具有功能性的成熟DC,该细胞可应用于口腔癌的免疫治疗.     

动物毒素抗肿瘤作用研究进展

某些动物毒素如蝎毒、蛇毒、蟾蜍毒、蜂毒、蜈蚣毒和蜘蛛毒在体内和体外对肿瘤细胞的增殖均具有抑制作用.现对动物源性毒素的抗肿瘤药理作用进行总结,为研究开发新型抗肿瘤药提供思路和方法.     

抗Stat3多克隆抗体的制备和其在乳腺癌诊断中的应用

目的:制备兔抗信号转导与转录激活因子3(Stat3)抗体,分析其在乳腺癌诊断中的价值.方法:应用人工重组小鼠Stat3蛋白,免疫雄性家兔制备抗Stat3抗体;用免疫印迹法分析检测抗Stat3抗体的纯度和特异性;应用免疫组化染色法检测65例乳腺癌和30例正常乳腺组织中Stat3蛋白的表达.结果:用Stat3蛋白免疫家兔被免疫6 wk后,其血清中抗Stat3抗体效价＞1∶ 256,000(A450 nm=0.40);SDS-PAGE和免疫印迹分析均在分子质量(Mr)92 000处有明显的带;65例乳腺癌组织的细胞浆和细胞核中,Stat3蛋白表达量在不同的组织学分级之间有统计学差异(P＜0.05).结论:高效价和特异性强的抗Stat3抗体被成功制备. 该抗体可用于乳腺癌组织细胞Stat3蛋白表达的检测.     

参芪扶正注射液对血液系统恶性肿瘤患者红细胞免疫功能的影响

红细胞免疫学作为现代免疫学的分支越来越受到人们的关注 ,本研究通过测定正常献血员及血液系统恶性肿瘤患者 RBC- C3h RR、 RBC- ICR、 TRR,探讨血液系统恶性肿瘤患者红细胞免疫功能变化及中药制剂参芪扶正注射液对血液系统恶性肿瘤患者红细胞免疫功能的影响。1　临床资料1 .1　诊断标准 :全部淋巴瘤患者化疗前均经淋巴结切取活检 ,经病理证实。全部急性白血病患者化疗前均经骨髓穿刺病理证实。1 .2　一般资料 :正常献血员 30例及 1 999年 1 0月～2 0 0 0年 1 0月在河北省肿瘤医院血液科住院治疗的化疗间歇期的血液系统恶性肿瘤患者…     

转染CD40配体的卵巢癌细胞株OVHM抗卵巢癌肝转移机制的研究

Objective To examine the in vivo anti-metastatic effect of enhanced expression of CD40L cDNA in murinc ovarian cancer OVUM cells (CD4OL-OVHM) injected into the spleen on liver metastasis in mice. Methods OVUM cells were inoculated into the spleen of 6 ～ 8 week-old female B6C3F1 (C57BL/6N × C3H/He) mice. The established liver metastasis was identified by histopathology (HE staining). OVUM cells, DNA-pMKITneo-OVHM cells or CD40L-OVHM cells were inoculated into the spleen of female B6C3F1 mice and the expressions of CD11c in splenic cells were detected by flow cytometry. The specific cytotoxicity of splenic cells was detected by MTT assay, and the serum cytokines of IFN-γ, TNF-α, IL-12, IL4 and IL-10 of the mice were measured by enzyme linked immunoabsorbent assay. The liver metastases and the survival time of the mice were also recorded. Results The mouse models with liver metastasis by injecting tumor cells into the spleen of mice were established. The expression of CD11c and the specific killing rote in CD40L-OVHM cells group was significantly higher than that in the OVHM cells group and DNA-pMKITneo-OVHM cells group. The expressions of IFN-γ, TNF-α and IL-12 in the CD40L-OVHM cells group were much more increased than OVHM cells group and DNA-pMKITneo-OVHM cells group, but the expressions of IL-4 and IL-10 in the CD40L-OVHM cells group were decreased significantly (P < 0.05). The average weights of livers and spleens of mice in CD40L-OVHM cells group were significantly lower than those of DNA-pMKITneo-OVHM cells group and OVHM cells group. The survival time of mice in CD40L-OVHM cells group was also significantly longer than that in the OVHM cells group and DNA-pMKITneo-OVHM cells group (P < 0.05). Conclusion The data directly demonstrate that the expression of CD40L in ovarian cancer cells (CD40L-OVHM) can enhance the proliferation and differentiation of dendritic cells in the spleen and induce specific cytotoxic effect of T cells in the spleen, and may regulate the immune function of peripheral blood cells and the immune balance between Thl cells and Th2 cells, which maybe the possible mechanism induced by CD40L in mice inhibiting the development of liver metastasis.     

白花蛇舌草的免疫学调节活性和抗肿瘤活性

目的：研究白花蛇舌草的免疫学调节活性和抗肿瘤活性。方法：用^3H介入法分析了白花蛇舌草提取物（Oldenlandia diffusa extract,ODE）对小鼠脾细胞的增殖活性；用^51Cr游离实验测定了小鼠和人杀伤细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤活性，用ELISA法和生物法研究了B细胞抗体的以及单核细胞的细胞因子产生，并用^3H介入法分析了单核细胞对肿瘤细胞的吞噬功能；用层析法、蛋白酶消化法和糖分解处理（即NaIO4处理）分析了白花舌草的化学成分。结果：ODE对小鼠脾细胞的增殖活性有很强的促进作用；ODE增强小鼠和人杀伤细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤活性，增强B细胞抗体的产生以及单核细胞的细胞因子产生，并增强单核细胞对肿瘤细胞的吞噬功能，白花蛇舌草的化学成分为90道尔顿的糖蛋白。结论：ODE对小鼠的人有免疫调节作用，并通过刺激机体的免疫系统杀伤或蚕噬肿瘤细胞，这些活性可应用于临床调节免疫功能和治疗肿瘤等疾病。