HMGB1 siRNA干扰对食管鳞癌细胞放射敏感性的影响

目的： 采用siRNA技术干扰人食管鳞癌细胞中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达，观察经X射线照射后细胞增殖活性、存活能力及细胞凋亡率的变化。方法： 针对HMGB1 mRNA序列，设计合成有效的干扰序列HMGB1 siRNA，并转染食管鳞癌KYSE30细胞，同时设置转染阴性对照序列的阴性对照组以及未进行转染的空白对照组。采用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot法检测各组细胞HMGB1 mRNA和蛋白的表达；分别用MTS比色、克隆形成实验、流式细胞术和Western blot法检测HMGB1 siRNA干扰对食管鳞癌细胞KYSE30细胞的增殖活力、存活能力、细胞凋亡率及凋亡相关蛋白表达的影响。结果： HMGB1 siRNA干扰后，KYSE30细胞HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平明显降低（P均 < 0.01）；MTS数据显示HMGB1 siRNA干扰后经X射线照射显著抑制了食管鳞癌细胞的增殖水平（与空白对照组和阴性对照组比较，P < 0.05）；克隆形成实验结果显示空白对照组、阴性对照组、HMGB1 siRNA组的D₀值分别为2.57、2.54、1.55 Gy；D_q值分别为1.69、1.65、1.30 Gy；SF₂值分别为0.27、0.27、0.13；外推数N值分别为1.93、1.91、2.31；X射线照射后HMGB1 siRNA组肿瘤细胞的凋亡率明显增加，同时bcl-2蛋白表达显著降低，而bax、caspase-3蛋白的表达明显增加（与空白对照组和阴性对照组比较，P < 0.01）。结论： siRNA干扰技术可用来抑制食管鳞癌细胞中HMGB1基因的表达，联合X射线照射降低了肿瘤细胞的增殖水平和存活能力，诱导了细胞凋亡，增加了放射敏感性，该作用可能与调控bcl-2、bax和caspase-3基因表达有关。     

抗Stat3多克隆抗体的制备和其在乳腺癌诊断中的应用

目的:制备兔抗信号转导与转录激活因子3(Stat3)抗体,分析其在乳腺癌诊断中的价值.方法:应用人工重组小鼠Stat3蛋白,免疫雄性家兔制备抗Stat3抗体;用免疫印迹法分析检测抗Stat3抗体的纯度和特异性;应用免疫组化染色法检测65例乳腺癌和30例正常乳腺组织中Stat3蛋白的表达.结果:用Stat3蛋白免疫家兔被免疫6 wk后,其血清中抗Stat3抗体效价＞1∶ 256,000(A450 nm=0.40);SDS-PAGE和免疫印迹分析均在分子质量(Mr)92 000处有明显的带;65例乳腺癌组织的细胞浆和细胞核中,Stat3蛋白表达量在不同的组织学分级之间有统计学差异(P＜0.05).结论:高效价和特异性强的抗Stat3抗体被成功制备. 该抗体可用于乳腺癌组织细胞Stat3蛋白表达的检测.     

动物毒素抗肿瘤作用研究进展

某些动物毒素如蝎毒、蛇毒、蟾蜍毒、蜂毒、蜈蚣毒和蜘蛛毒在体内和体外对肿瘤细胞的增殖均具有抑制作用.现对动物源性毒素的抗肿瘤药理作用进行总结,为研究开发新型抗肿瘤药提供思路和方法.     

雷氏大疣蛛毒素对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨雷氏大疣蛛Macrothele raveni毒素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及细胞周期的抑制作用，进一步探讨其作用的分子机制。方法 采用MTT法测定雷氏大疣蛛毒素对SMMC一7721细胞增殖作用的影响；采用[^3H]TdR掺入法检测雷氏大疣蛛毒素作用前后SMMC7721细胞DNA合成的变化；采用流式细胞术（FCM）探讨雷氏大疣蛛毒素对SMMC-7721细胞凋亡率和细胞周期的影响；采用Western Blot方法研究雷氏大疣蛛毒素对细胞周期相关c-myc蛋白表达的影响。结果 MTT方法表明雷氏大疣蛛毒素对SMMC-7721细胞增殖有较强的抑制作用（P〈0．05），时效和量效关系良好。雷氏大疣蛛毒素可以抑制SMMC-7721细胞DNA的合成。流式细胞仪检测结果发现雷氏大疣蛛毒素作用后SMMC-7721细胞凋亡率增加，细胞周期阻滞在G2／M期。Western Blot方法进一步检测到雷氏大疣蛛毒素作用SMMC7721细胞72h后，c-myc蛋白表达减弱。结论 雷氏大疣蛛毒素可以抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和DNA的合成，其机制可能是诱导细胞凋亡，使细胞周期相关c-myc蛋白表达减弱，导致细胞周期的变化。     

五加皮Age蛋白在正常小鼠与荷瘤小鼠体内的组织分布

目的探讨五加皮抗肿瘤成分A ge蛋白在正常小鼠与荷瘤小鼠体内的组织分布。方法用氯胺T法对A ge蛋白进行125I标记(形成125I-A ge),由尾iv小鼠后,于不同时间取组织和血液标本,测定放射cpm比值。以放射参与量(即脏器与血液中cpm比值)作为125I-A ge在组织中分布的依据。结果在一次性快速iv125I-A ge 2 h后,正常小鼠和荷瘤小鼠体内均以肾脏中125I-A ge的分布量最高,肝脏和肺部放射参与量也较高,与心脏、脾脏等其他脏器相比差异有显著性(P<0.01);尿中125I-A ge的量很高。iv同等剂量125I-A ge后,荷瘤小鼠的肾脏、肝脏和肺部组织的放射参与量比正常小鼠偏高(P<0.05)。结论五加皮A ge蛋白在小鼠体内主要分布于血流丰富的组织,主要通过泌尿系统排泄,不易透过血脑屏障。     

中药北豆根抗肿瘤活性的体外实验

背景与目的 :探讨中药北豆根(Rhizomamenispermi)提取物的抗肿瘤作用并分离其活性物质。材料与方法 :采用MTT法测定了北豆根提取物对肿瘤细胞增殖反应的影响 ;用三步法初步分离、纯化了北豆根提取物的抗肿瘤有效部位。结果 :北豆根提取物对多种组织来源的肿瘤细胞增殖有较强的抑制作用 ,量效关系良好 ,并且对原代培养肿瘤组织细胞增殖反应有抑制作用,IC50 多在9μg/ml以下 ,最低可达0.7μg/ml。并找到了其有效部位。结论 :北豆根水提物和北豆根醇提物体外均有很强的抗肿瘤作用 ;醇提物的作用高于水提物 ;PE2是北豆根醇提物抗肿瘤的有效部位 ;PE2不仅对各肿瘤细胞株有广泛的杀伤作用 ,而且对原代培养肿瘤细胞也有杀伤作用 ;北豆根作为抗肿瘤药物有待进一步开发     

香加皮水提取物诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制

目的研究香加皮水提取物(CPE)诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制。方法采用G iem sa染色观察细胞凋亡形态学变化;电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构变化;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳方法检测BGC-823细胞凋亡率、细胞周期和细胞凋亡的DNA水平变化;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和surv iv in mRNA表达水平变化;免疫细胞化学方法检测bcl-2、bax和surv iv in蛋白表达的变化。结果经CPE作用后,人胃癌细胞BGC-823出现明显的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变,细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现梯形图。经250μg/mL CPE处理48 h后,多数BGC-823细胞被阻滞在G2/M期,而且细胞发生明显的凋亡变化,BGC-823细胞凋亡率可达18.9%。CPE可抑制BGC-823细胞bcl和surv iv in mRNA及蛋白的表达,促进baxmRNA及蛋白的表达。CPE可明显延长S180荷瘤小鼠生存期,且具有剂量依赖性。结论CPE通过阻滞BGC-823细胞于G2/M期及诱导BGC-823细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其作用机制与抑制细胞的bcl-2和surv iv in基因mRNA及蛋白表达、促进bax基因和蛋白的表达有关。     

白细胞介素23对结肠癌细胞凋亡率及Survivin的影响

肿瘤的发生发展与细胞凋亡有着非常密切的关系，细胞凋亡的发生涉及到促凋亡基因以及抑制凋亡基因的表达，细胞凋亡的改变与这两种基因的异常表达有关。Survivin是一个新发现的凋亡蛋白抑制剂(IAP)家族成员，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能。白细胞介素23(IL-23)是Oppmann等在2000年新发现的一种新的细胞因子，已有研究证实，IL-23有一定的抗肿瘤作用。有关细胞因子抑制肿瘤对Survivin表达的影响尚未见详细报道。本研究目的是探讨逆转录病毒介导的小鼠IL-23对结肠癌细胞细胞凋亡率及Survivin表达的影响。     

VEGF反义RNA对人食管癌细胞抑制作用的研究

目的: 研究血管内皮生长因子(VEGF)反义RNA对人食管癌细胞的抑制作用,探讨以VEGF反义RNA进行食管癌基因治疗的可行性.方法: 采用脂质体法将反义VEGFcDNA质粒转染入食管癌细胞TE-1;用MTT法检测细胞增殖情况;用免疫组化法检测VEGF蛋白表达;原位杂交和RT-PCR技术检测VEGFmRNA的表达.流式细胞术检测细胞的凋亡率和周期分布.结果: 被反义VEGFcDNA质粒转染的食管癌细胞有外源性VEGF反义基因的整合及表达,该细胞的VEGFmRNA及蛋白表达水平降低,但细胞生长速率无明显改变,未发生明显凋亡现象;接种裸鼠后,形成肿瘤的时间明显延长,肿瘤的体积和重量明显减小.结论: VEGF反义RNA可抑制食管癌细胞VEGF表达和裸鼠体内的肿瘤生长.该表达体系为食管癌基因治疗的进一步研究奠定了基础.