脾酪氨酸激酶与食管鳞状细胞癌的关系

目的：探讨脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测30例食管鳞癌组织、27例食管鳞癌癌旁组织及30例相对正常食管黏膜组织中Syk mRNA的表达;应用免疫组化技术检测39例食管鳞癌组织、27例食管鳞癌癌旁组织及38例相对正常食管黏膜组织中Syk蛋白的表达并分析其与临床病理学指标间的关系。结果：食管鳞癌组织中Syk mRNA表达高于癌旁组织和正常食管黏膜组织,但差异无统计学意义（P〉0.05）。Syk蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率（34/39,87.2%）明显高于食管鳞癌癌旁组织（18/27,66.7%）和正常食管黏膜组织（26/38,68.4%）（P〈0.05）。Syk蛋白表达与食管鳞癌患者年龄、性别、肿瘤大小、临床分期均无明显相关关系（P均〉0.05）。结论：Syk mRNA和蛋白在食管鳞癌组织中表达增高,但Syk蛋白表达与临床病理学指标无相关关系。     

木鳖子提取物体外抗肿瘤活性的初步研究

目的：观察木鳖子（cochinchina momordica seed,CMS）水提物（water extract of CMS,CMSWE）和醇提物（ethanol extractof CMS,CMSEE）对肿瘤细胞生长的影响,探讨CMSEE的抗肿瘤机制。方法：制备CMSWE和CMSEE。MTT法检测CMSWE和CMSEE对人黑色素瘤B16、肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MDA-MB-231、食管癌细胞TE-13,以及正常人外周血淋巴细胞（PBMC）生长的影响,计算细胞生长抑制率;光镜下观察细胞形态变化;瑞氏-吉姆萨染色观察B16细胞凋亡形态学变化。流式细胞技术（FCM）检测B16细胞凋亡率和细胞周期分布。结果：CMSEE（25—300mg／L）对B16、A549、MDA-MB231和TE-13细胞增殖均有明显的抑制作用（P〈0．01）,对PBMC的增殖没有明显影响。CMSWE（25～300mg／L）对A549、TE-13、MDA-MB231、PBMC的生长没有明显影响,仅对B16细胞的增殖有较弱的抑制作用,且各浓度组抑制率均小于相同浓度的CMSEE（P〈0．01）。经CMSEE处理后,B16细胞显示典型的凋亡形态变化,凋亡率明显增高（P〈0．01）,G0／G1期细胞明显增加,S期、G／M期细胞减少（P〈0．01）。结论：CMSEE体外对人肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用,其抗肿瘤机制可能与阻滞肿瘤细胞周期和诱导凋亡有关。     

应用MALDI-TOF MS技术建立贲门癌血清蛋白指纹图谱诊断模型

背景与目的:贲门癌是常见的消化道肿瘤,预后差,5年生存率低.早期诊断是改善其预后的关键因素之一.近年来,蛋白质组学的迅速发展推进了肿瘤标志物研究的进程,其中基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)作为常用的蛋白质组学技术,成为检测和验证血液等体液肿瘤标志物的新技术及平台.本研究利用MALDI-TOF MS技术检测贵门癌患者血清蛋白指纹图谱,建立贲门癌诊断模型,探讨其临床应用价值.方法:收集河北医科大学第四医院2009年3月-2010年5月胸外科贲门癌患者血清63例和健康志愿者血清54例,采用弱阳离子蛋白芯片(WCX磁珠)对血清进行分析前处理,MALDI-TOF MS技术进行血清蛋白图谱检测,所得结果用ZUCI-蛋白芯片数据分析系统进行处理.运用遗传算法(genetic arithmetic,CA)结合支持向量机(support vector machine,SVM)运算建立贲门癌蛋白指纹图谱诊断模型:将117例标本随机分为训练组和盲法测试组,经训练后验证诊断模型的特异度和灵敏度.结果:采集贵门癌患者和健康对照者的血清蛋白指纹图谱,经数据对比分析找到69个有显著性差异的质荷比峰(P＜0.01);从中筛选出差异最显著的10个蛋白质荷比峰建立诊断模型(m/z分别为2 863、4 655、3 883、3 241、3 952、2 295、2 741、1 546、4 054和2 671).通过验证,该诊断模型的灵敏度为96.83%、特异度为90.74%.结论:应用MALDI-TOF MS技术能够检测贲门癌患者血清蛋白指纹图谱,建立贲门癌诊断模型.该模型在贲门痛诊断中具有较高的灵敏度和特异度,有一定的临床应用价值.     

H1299细胞中Plk3对p73转录活性的影响

背景与目的：研究表明蛋白激酶Plk3可以增加肿瘤抑制因子p53的转录活性,但对p73转录活性的影响尚不清楚,因此本实验旨在研究蛋白激酶Plk3对p73转录活性的影响。方法：选用p53缺失型人类肺癌细胞系H1299,采用荧光素酶报告剂分析、反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及克隆形成实验的方法研究蛋白激酶Plk3及激酶活性缺失的Plk3（K52R）对p73转录活性的影响。结果：荧光素酶报告剂分析结果显示,单独转染p73基因可以增加p21WAF1和Bax启动子介导的荧光素酶的表达（P〈0.05）;共转染p73基因和Plk3基因,p21WAF1和Bax启动子介导的荧光素酶的表达与单独转染p73基因组相比显著降低（P〈0.05）,且呈浓度依赖性;而激酶活性缺失的Plk3（K52R）对p21WAF1和Bax启动子介导的荧光素酶的表达没有显著影响（P〉0.05）。RTPCR检测结果也显示,p73诱导p21WAF1和Bax的mRNA表达（P〈0.05）,Plk3降低了p73诱导的p21WAF1和Bax的mRNA表达水平（P〈0.05）;而激酶活性缺失的Plk3（K52R）对p73诱导的p21WAF1和Bax的mRNA表达水平无显著影响（P〉0.05）。克隆形成实验结果显示,p73抑制了H1299细胞克隆的形成（P〈0.05）,Plk3降低了p73对H1299细胞克隆形成的抑制（P〈0.05）,而激酶活性缺失的Plk3（K52R）对p73抑制H1299细胞克隆形成无显著影响（P〉0.05）。结论：Plk3可以抑制p73的转录活性,而激酶活性缺失的Plk3（K52R）对p73的转录活性无明显影响。     

木鳖子醇提物对黑素瘤B16细胞增殖的抑制及其可能机制

目的：观察木鳖子醇提物(ethanol extract from cochinchina momordica seed, CMSEE)对黑素瘤B16细胞增殖的影响,初步探讨其作用机制。方法：MTT法和克隆集落形成实验检测CMSEE对小鼠黑素瘤B16细胞生长的影响,倒置相差显微镜和瑞氏吉姆萨染色观察细胞形态学变化,流式细胞技术（FCM）检测B16细胞周期分布和凋亡率的变化,比色法检测CMSEE对B16细胞黑素生成和酪氨酸酶活性的影响,RTPCR法检测CMSEE对B16细胞中Cmyc、〖STBX〗P38和Tyr〖STBZ〗基因表达的影响。结果：CMSEE（10～100 mg/L）明显抑制B16细胞的增殖(P<0.05, P<0.01),呈质量浓度和时间依赖性。10～40 mg/L CMSEE处理后,B16细胞呈现典型的细胞分化形态,细胞周期阻滞于G0/G1期,黑素产生和酪氨酸酶活性增加(P<0.01),Cmyc基因表达下调,〖STBX〗P38和Tyr〖STBZ〗基因表达上调;100 mg/L CMSEE处理后的B16细胞呈现凋亡形态变化\[凋亡率达(37.2±329)%\],黑素生成减少(P<0.05),酪氨酸酶活性降低(P<0.01)。结论：CMSEE体外对B16细胞增殖有明显的抑制作用,其机制与其低剂量诱导分化和高剂量诱导凋亡有关。     

食管鳞癌组织中PTEN、PI3K和Paxillin的表达及其临床意义

 目的 研究PTEN、PI3K和Paxillin在食管鳞癌组织（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC） 中的表达及其与ESCC细胞发生、发展与转移的关系以及PTEN、PI3K和Paxillin三者之间的相关 性。 方法 应用免疫组织化学SP法检测24例正常食管黏膜、94例ESCC组织中PTEN、PI3K和Paxillin的表达 情况。 结果 食管癌组织中PTEN、PI3K和Paxillin的阳性表达率与正常食管黏膜组织相比差异均有统计学意 义(P<0.01) 。PTEN表达与食管癌细胞的分化程度(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)、浸润深度 (P<0.05)及临床分期(P<0.05)显著相关;PI3K表达与分化程度、淋巴结转移、浸润深度及临床 分期显著相关(均P<0.01);Paxillin表达与淋巴结转移、浸润深度和临床分期等因素有关(均 P<0.01);PTEN 分别与 PI3K、Paxillin表达之间均呈显著负相关(P<0.01);PI3K与Paxillin 表达呈显著正相关(P<0.05) 。 结论 PTEN、PI3K和Paxillin表达均与食管癌发生发展及侵袭转移有关,可作为评价ESCC生物学行为 的指标。在食管癌的发生发展中 PI3K、PTEN 的作用可能互相拮抗,PI3K和Paxillin 协同促 进肿瘤的恶性进展。     

间充质干细胞免疫调节活性的研究进展

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是一种多功能的非造血前体细胞,主要存在于骨髓,在其他某些组织器官如脂肪、胎盘、胎肝等,也有少量存在。MSC起源于中胚层,具有向内、中、外三胚层的多种细胞分化的能力。早期认为,MSC的主要功能是通过分泌各种细胞因子支持造血干细胞     

异体血小板输注对人肺癌A549细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制

目的：观察输注的异体血小板对人肺癌细胞A549侵袭、转移的影响，初步探讨其作用机制。方法：选取2017年1月至 2018 年 12 月于河北医科大学第四医院化疗科就诊输注血小板的 89 例晚期肺癌患者，实验分为 Ctrl 组（与培养液共孵育的A549细胞组）、Before组和After组（分别指与输注血小板前和后患者血浆共孵育的A549细胞组）。通过划痕实验和Transwell实验检测与输血小板前后患者血浆共孵育的A549细胞的迁移和侵袭能力，采用Western blotting法检测金属基质蛋白酶（MMPs）及其抑制剂（TIMPs）和上皮-间质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin及Vimentin，以及血管内皮生长因子VEGF及受体2（VEGFR2）的表达水平。结果：After 组的 A549 细胞的划痕愈合率明显高于 Before 组及 Ctrl 组（[ 73.67±2.60）% vs（58.33±2.33）%、（35.33±2.03）%，P<0.01或P<0.05]，Before组与Ctrl组比较也具有显著差异（P<0.05）。细胞迁移实验结果显示，After组的穿膜细胞数明显高于Ctrl组和Before组（[ 69.67±7.84）vs（18±2.08）、（39.33±2.03）个，均P<0.01]。细胞侵袭实验显示，After组的穿膜细胞数明显高于Ctrl组和Before组（[ 59.34±3.46）vs（18.34±1.56）、（37.58±2.79）个，均P<0.01]。A549细胞与输注血小板前、后的血浆共孵育48 h后，MMP9、MMP2的表达均升高（P<0.05）而其抑制剂 TIMP1和TIMP2的水平均下降（P<0.01）；EMT相关蛋白N-cadherin、Vimentin表达升高（P<0.05）而E-cadherin 表达降低（P<0.01）；血管形成相关蛋白VEGF、VEGFR2的表达均升高（P<0.05）。结论：输注异体血小板能促进肺癌A549细胞的侵袭和转移，其作用机制可能与调节EMT、金属基质蛋白酶及血管生长因子相关蛋白的表达有关。     

塞来昔布促进T细胞淋巴瘤对化疗药物的敏感性

目的:研究塞来昔布对T细胞淋巴瘤细胞化疗敏感性的影响,并探讨其作用机制.方法:MTF法检测不同浓度塞来昔布分别作用24、48和72 h,对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat和Hut78增殖活性的影响;MTT法检测化疗药物[顺铂(cis-platinum,DDP)、表柔比星(epirubicin,EPI)及长春新碱(vincristine,VCR)]联合塞来昔布对Jurkat和Hut78细胞增殖活性的影响;并计算IC50值;流式细胞术检测塞来昔布联合化疗药对Jurkat和Hut78细胞凋亡水平的影响;Real-time PCR及Westernblotting技术分别从mRNA及蛋白水平检测塞来昔布对Jurkat和Hut78细胞表达MDR1、MRP1、LRP及TopoⅡ的影响.结果:塞来昔布对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat和Hut78增殖活性具有一定抑制作用,且可明显增强化疗药物对Jurkat和Hut78细胞的杀伤作用;在塞来昔布作用下Jurkat和Hut78细胞的凋亡水平明显增加(P＜0.01);与塞来昔布共培养的Jurkat和Hut78细胞,TopoⅡmRNA和蛋白的表达水平均明显增加,而MDR1、MRP1、LRP mRNA及蛋白的表达水平均明显下降(P＜0.05).结论:塞来昔布可通过调控耐药相关基因的表达而增强T淋巴瘤细胞对化疗药物的敏感性,因此在T细胞淋巴瘤的临床治疗中具有良好应用前景.     

香加皮杠柳苷抑制Stat5信号通路诱导SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的 研究香加皮提取物杠柳苷对Stat5信号通路的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制.方法 MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术观察肿瘤细胞的周期变化和凋亡,western blot法检测杠柳苷作用前后人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内Stat5蛋白质表达.结果 杠柳苷明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,使细胞周期停滞在G2/M期,并能够诱导SMMC-7721细胞凋亡.杠柳苷作用后,细胞核内的Stat5蛋白量降低而胞浆中的量未见明显改变.结论 香加皮杠柳苷能够抑制Stat5信号转导通路,进而抑制SMMC-7721细胞的增殖并诱导其凋亡.