生长分化因子-9在卵巢反应不良患者颗粒细胞中的表达

目的探讨生长分化因子-9(GDF-9)在卵巢反应不良患者颗粒细胞的表达及其在超促排卵中卵泡发育的作用。方法对49例接受体外受精-胚胎移植/卵胞浆内单精子注射(IVF-ET/ICSI)治疗的患者,给予相同的改良短方案超促排卵,采用免疫组织化学方法测定颗粒细胞中GDF-9水平,比较卵巢反应不良组(实验组,n=30)与正常对照组(对照组,n=19)GDF-9表达的差异。结果两组颗粒细胞中均测及GDF-9的表达,实验组颗粒细胞中GDF-9的表达显著低于对照组(P0.05)。结论颗粒细胞中GDF-9对控制性超排卵中卵泡的生长发育可能具有调节作用,且卵巢反应不良患者颗粒细胞中GDF-9表达降低,可能参与卵巢反应不良的发病机制。     

胰岛素样生长因子2通过磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路调控人卵巢颗粒细胞增殖的机制

目的 检测胰岛素样生长因子2（IGF2）对人卵巢颗粒细胞（KGN细胞）增殖的调控作用及作用机制。 方法 将体外培养的KGN细胞,分不同浓度IGF2处理组（对照组和25 μg/L、50 μg/L、100 μg/L IGF2组)和磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路干预组（以LY294002干预处理将细胞分对照组、100μg/L IGF2组、LY294002组和IGF2+LY294002组）。采用MTS和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)法检测IGF2对KGN细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞培养液上清中雌激素、孕激素的含量,Western blotting法检测各组胰岛素样生长因子受体1（IGF1R）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化的蛋白激酶B（p-Akt）及CYP19A1蛋白表达。 结果 随着IGF2的浓度梯度增高,KGN细胞的增殖率及雌激素、孕激素的分泌量逐渐升高,以 100 μg/L IGF2处理组的细胞增殖率和激素水平最高 (P<0.01),而抑制PI3K/Akt信号通路,细胞增殖率和激素的分泌量均明显降低(P<0.01);Western blotting结果显示,IGF1R、p-Akt及CYP19A1 蛋白表达水平随着IGF2的浓度梯度逐渐升高(P<0.05),而干预PI3K/Akt信号通路可影响上述蛋白的表达,与对照组相比,IGF2组和IGF2+ LY294002组IGF1R及p-Akt蛋白表达均明显升高（P<0.01）,CYP19A1在IGF2组明显升高（P<0.01）,LY294002组p-Akt及 CYP19A1蛋白明显降低（P<0.05）,IGF1R的表达差异无统计学意义。与IGF2组相比,IGF2+LY294002组p-Akt及CYP19A1蛋白表达降低（P<0.01）,IGF1R的表达差异无统计学意义,LY294002组p-Akt 及CYP19A1蛋白表达量均显著降低（P<0.01）。 结论 IGF2 可能由IGF1R介导通过PI3K/Akt 信号通路促进人卵巢颗粒细胞的增殖及分泌功能。     

不同分离方法对人卵巢颗粒细胞体外培养的影响

目的 比较人卵巢颗粒细胞不同分离方法.方法 取体外受精-胚胎移植(ⅣF-ET)采卵时的卵泡液,用裂解法、密度梯度离心法、酶解法分离纯化并原代培养人卵巢颗粒细胞.比较不同的分离方法获得的卵巢颗粒细胞数量、形态及其对早期培养的影响.结果 裂解法得到的颗粒细胞数较密度梯度离心法、酶解法多(P＜0.005,P＜0.001);比较3种分离方法获得的卵巢颗粒细胞的活性和孕激素分泌量差异无统计学意义;接种24h后,酶解法得到的卵巢颗粒细胞存活量最多(P＜0.05),裂解法得到的存活细胞最少(P＜0.05);裂解法获得的卵巢颗粒细胞继续培养48、72及96h均较培养24h有明显细胞增殖(P＜0.05),且与其他组存活的细胞量差异无统计学意义.结论 裂解法得到的颗粒细胞数量多,细胞生长较好,操作简单,是较理想的分离人卵巢颗粒细胞的方法.     

睾酮对体外培养小鼠卵巢颗粒细胞分泌抗苗勒管激素的影响

目的 探讨睾酮对体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞抗苗勒管激素（anti-Mullerian hormone,AMH） 分泌的影响。方法 小鼠卵巢颗粒细胞原代培养,添加不同浓度睾酮,ELISA 法检测颗粒细胞AMH 的表达。结果 ELISA 法证实颗粒细胞中有AMH 表达,不同浓度（10-8 mmol/L、10-7 mmol/L、10-6 mmol/L） 睾酮作用24 h 可促进颗粒细胞分泌AMH,且随睾酮浓度的增加、作用时间延长,AMH 分泌明显增加（P ＜ 0.01）。结论 睾酮促进小鼠卵巢颗粒细胞分泌AMH,高浓度比低浓度作用更强。     

超排卵周期中卵泡不同反应组钙粘素的表达研究

目的研究超排卵周期中卵巢不同反应组患者的卵泡液E-cadherin、N-cadherin、雌二醇、孕酮的表达及相互关系.方法对70例因输卵管、男性因素不孕患者行体外受精-胚胎移植,按取卵时卵泡发育数目不同分为低反应组、高反应组及正常反应组.用ELISA法及CL法分别测定各组卵泡液中E-cadherin、N-cadherin、雌二醇、孕酮水平,并作比较分析.结果高反应组N-cadherin显著高于正常反应组(P<0.05).低反应组E-cadherin显著高于正常反应组(P<0.05).低反应组FSH用量明显高于正常反应组及高反应组(P<0.05),且与E-cadherin呈正相关.高反应组雌二醇水平明显高于其余各组(P<0.05),低反应组孕酮水平明显高于其余各组(P<0.05).结论高反应组患者卵泡群发可能与卵泡局部N-cadherin的高表达有关,而低反应组卵泡发育受阻可能与高E-cadherin水平有关,使卵泡对FSH反应性降低并有黄素化倾向.     

PPARγ mRNA在卵巢颗粒细胞的表达调节及与多囊卵巢综合征的相关性

目的:研究PPARγmRNA在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者卵巢颗粒细胞的表达,以及不同浓度的睾酮、胰岛素及罗格列酮对卵巢颗粒细胞细胞核过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)mRNA的表达调节。方法:分别提取5例PCOS患者和30例正常人卵巢颗粒细胞,对PCOS患者及5例正常人(对照组)颗粒细胞应用Real-time PCR方法检测PPARγmRNA表达;剩余25例正常人卵巢颗粒细胞进行体外培养48 h后,分别用含不同浓度的睾酮、胰岛素及PPARγ激动剂(罗格列酮)的培养基培养颗粒细胞24 h后,应用Real-time PCR方法检测PPARγmRNA的表达。结果:PCOS患者卵巢颗粒细胞PPARγmRNA的表达明显低于对照组(P<0.05)。睾酮浓度为1 nmol/L时,PPARγmRNA的表达明显减少(P<0.05);睾酮浓度为10 nmol/L时,PPARγmRNA的表达升高,与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。胰岛素浓度为10 nmol/L时,PPARγmRNA的表达较对照组明显增加(P<0.05);当胰岛素浓度为100 nmol/L时,PPARγmRNA的表达与胰岛素浓度为10 nmol/L时差异无统计学意义(P>0.05)。罗格列酮浓度为1 nmol/L时,PPARγmRNA的表达较对照组明显增加(P<0.05);当罗格列酮浓度为10 nmol/L时,PPARγmRNA的表达较罗格列酮浓度为1 nmol/L时明显增加(P<0.05)。结论:卵巢颗粒细胞PPARγmRNA的表达与睾酮的浓度有关,胰岛素诱导颗粒细胞PPARγmRNA的表达,颗粒细胞PPARγmRNA的表达受PPARγ的正向调节,PCOS患者卵巢颗粒细胞PPARγmRNA的表达异常可能与PCOS的发生有关。     

育泡饮对大鼠卵巢颗粒细胞间隙连接蛋白43表达及分泌功能的影响

[目的]观察育泡饮对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞（GC）间隙连接蛋白43（CX43）表达及雌二醇（E2）分泌的影响,探索中药促进卵泡发育的可能作用机制。[方法]制备大鼠卵巢颗粒细胞进行原代培养,细胞培养48 h后,加入促卵泡激素（FSH）50 ng/mL和不同剂量的育泡饮,继续培养48 h,放免法测定颗粒细胞培养液中E2的含量,Westernblot法检测CX43蛋白的表达。[结果]1）育泡饮能够促进卵巢颗粒细胞分泌E2,随着药物浓度的增大,E2分泌逐渐增加。2）育泡饮可明显促进颗粒细胞CX43蛋白的表达,其中高剂量组的促进作用与FSH组作用相似。[结论]育泡饮能明显促进卵巢颗粒细胞CX43蛋白的表达及E2分泌,说明育泡饮可通过上调CX43蛋白的表达促进颗粒细胞的增殖,增强颗粒细胞的抗凋亡能力,进而调节卵泡的发育。     

中枢髓鞘膜蛋白抑制神经突起生长与胞内cAMP关系的研究

目的：探讨中枢神经髓鞘膜蛋白抑制神经突起生长与神经元胞内cAMP水平的关系。方法：应用体外培养方法观察经密度梯度离心法提取的中枢神经髓鞘膜蛋白对小脑颗粒细胞突起生长的影响。用放射免疫方法检测神经元接触髓鞘膜蛋白后胞内cAMP水平的变化。结果：1．中枢神经髓鞘膜蛋白抑制培养小脑颗粒细胞突起的生长;2．神经元接触髓鞘膜蛋白后的最初5min,胞内cAMP水平即开始下降,12h降至最低点,结论中枢神经髓鞘膜蛋白抑制神经突起生长的作用可能与抑制因子通过信号转导使神经元胞内cAMP水平降低有关。     

CuInS2/ZnS量子点对人卵颗粒细胞的毒性效应与机制

目的: 体外原代培养人卵颗粒细胞,检测CuInS₂/ZnS量子点的细胞毒性效应并分析其分子机制。方法: 采用透明质酸酶消化收集人超排卵外的颗粒细胞,进行体外原代培养,设立PBS对照组和低(1 μg/mL)、中(10 μg/mL)、高(100 μg/mL) CuInS₂/ZnS量子点实验组,利用CCK-8法检测量子点处理后颗粒细胞活力的变化并计算半数抑制浓度(IC₅₀);采用Annexin V/PI双染色法流式细胞术检测颗粒细胞凋亡情况;采用不同试剂盒分别检测性激素孕酮(P)和雌二醇(E2)的释放以及氧化应激相关指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)及谷胱甘肽还原酶(GSH)活性的变化。结果: 体外原代培养人卵颗粒细胞生长良好,在体外培养72 h后开始自发凋亡并黄素化。采用CuInS₂/ZnS量子点处理后48 h 的IC₅₀为66.72 μg/mL。与PBS对照组比较,高剂量量子点处理组明显抑制细胞活力(P<0.01),诱导细胞凋亡(P<0.01),增加颗粒细胞P和E2的释放(P<0.05或P<0.01),中、高剂量量子点处理后颗粒细胞中ROS水平显著增加(P<0.05或P<0.01),颗粒细胞内的MDA、T-AOC及T-SOD活性均显著降低(P<0.01),高剂量量子点作用后细胞内的GSH活性显著升高(P<0.01)。结论: 本研究成功进行了人卵颗粒细胞系的体外原代培养,发现10 μg/mL 剂量以上CuInS₂/ZnS 量子点可以通过侵入颗粒细胞引起氧化损伤,促进细胞凋亡引发毒性效应,为CuInS₂/ZnS量子点在临床应用中的生物安全性评估提供了有价值的信息。     

芹菜素对雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡影响

目的 探讨芹菜素(apigenin,Api)对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法 选情前期成年雌性SD大鼠20只,取卵巢颗粒细胞进行原代细菌培养,贴壁后随机分为4组(对照组、Api 10-4M组、Api 10-5M组、Api 10-6M组),加入处理因素.培养结束后,收集各组培养卵巢颗粒细胞,经苏木精-伊红染色和吖啶橙染色观察颗粒细胞形态,经MTT法及流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡率,观察Api对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.结果 MTT法检测对照组,Api 10-4M组、Api 10-5M组、Api 10-6M组A值分别为(0.87±0.059)、(0.29±0.057)(0.49±0.03)、(0.63±0.035);实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),提示实验组颗粒细胞数量减少,出现凋亡细胞;流式细胞仪检测对月强组、Api 10-4M组、Api 10-5M组、Api 10-6M组的颗粒细胞凋亡率分别为(3.63±0.37)%、(36.37±2.28)%、(34.67±1.96)%、(30.92±1.65)%,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),提示实验组颗粒细胞凋亡率明显增高.结论 Api能抑制卵巢颗粒细胞的增殖,并促进其凋亡.