中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2,bax表达的影响

目的通过测定不同剂量的中药何首乌饮含药血清作用后的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达及caspase-3活性,探讨何首乌饮对卵巢自身功能的影响。方法制备排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养,Western blotting检测GC内凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达情况;分光光度法检测颗粒细胞内caspase-3活性。结果何首乌饮含药血清可上调颗粒细胞bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达,中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,可明显上调bcl-2蛋白表达(P均<0.01),中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,明显下调bax蛋白表达(P均<0.01)。何首乌饮含药血清可下调颗粒细胞caspase-3活性,中、高剂量何首乌饮含药血清组与对照组比较有显著性差异(P均<0.01)。结论何首乌饮增加GC内凋亡抑制蛋白bcl-2表达及减少凋亡促进蛋白bax表达的作用,可能是其抑制GC凋亡,防止卵泡闭锁的作用途径之一;同时何首乌饮可能是在凋亡的较早阶段,通过阻断caspase-3的级联裂解即可开始起效,而发挥凋亡抑制作用。     

麒麟丸对卵巢颗粒细胞损伤的修复作用研究

【目的】在细胞水平探讨麒麟丸对卵巢储备功能下降的治疗作用及机制。【方法】培养人卵巢颗粒细胞KGN，采用雷公藤多苷诱导建立KGN细胞损伤模型，给予麒麟丸水提物干预，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察细胞增殖情况，Western Blot法检测细胞抗苗勒激素(AMH)、Smad2、Smad3蛋白表达水平，酶联免疫吸附分析(ELISA)检测细胞上清雌二醇(E2)水平。【结果】2.5～10 mg·L^-1麒麟丸均能促进受损KGN细胞的增殖活性(P<0.05)，上调AMH、Smad3蛋白表达，提高E₂分泌水平(P<0.01);2.5 mg·L^-1麒麟丸可促进Smad2蛋白表达水平(P<0.05)。【结论】麒麟丸对卵巢储备功能下降治疗作用可能是通过Smads信号通路保护卵巢颗粒细胞实现的。     

增生后期及分泌期子宫内膜基质的超微结构

应用 TEM 及 SEM 观察人、猫及大鼠有关周期子宫内膜基质细胞的生长、发育和分化,并从细胞超微结构的动态变化进行分析。发现人子宫内膜在分泌早期,即出现少量前蜕膜细胞和颗粒细胞。至分泌后期,两种细胞数目剧增。颗粒细胞按其形态和结构特点,可分三型。Ⅰ型为圆形颗粒细胞,在人、猫及大鼠子宫内膜均可见到。Ⅱ型为大多边形颗粒细胞,见于人及猫的子宫内膜。Ⅰ型为梭形或细长形细胞,只见于大鼠。此外,并发现全部颗粒细胞和前蜕膜细胞均与胶原蛋白的合成密切相关。并讨论了颗粒细胞的来源、机能以及与前蜕膜细胞之间的相互关系。     

调经活血汤对多囊卵巢大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究调经活血汤对多囊卵巢(PCO)大鼠的血清激素水平、卵巢质量、形态及卵巢颗粒细胞凋亡等的影响,探讨其治疗效果及作用机制.方法 大鼠造模成功后随机分成中药治疗组和对照组,观察动物体重增加幅度、血清激素水平变化情况,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)观察卵巢颗粒细胞凋亡,免疫组化法观察颗粒细胞凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax表达水平的变化.结果 治疗组动物体重增加幅度明显降低,中药治疗组血清T浓度较对照组、正常组显著性降低;血清E2较对照组明显降低;血清P水平较对照组明显升高,血清FSH、LH浓度与对照组无明显差异.中药治疗组卵巢镜下可见多个囊状扩张的卵泡,但体腔较对照组明显缩小,颗粒细胞层数增加至4～7层,并可见少量黄体形成;中药治疗组卵巢颗粒细胞凋亡率较对照组显著降低,卵巢颗粒细胞Bcl-2表达的OD值较对照组显著增高,Bax表达的OD值显著降低.结论 调经活血汤能使多囊卵巢大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2表达明显升高,Bax表达明显降低,巢颗粒细胞凋亡率显著性降低;卵巢颗粒细胞层数增加,黄体形成增加:体重、血清T、E2激素水平明显下降,血清P激素水平明显升高,其作用可能与调节卵巢颗粒细胞上Bcl-2和Bax蛋白表达,影响两蛋白的比例关系,增加Bcl-2/Bax的比值,使Bax与Bcl-2蛋白形成异源二聚体,发挥其抗细胞凋亡的作用有关.     

一氧化氮——环鸟苷酸通路与鼠小脑颗粒细胞存活的关系

目的：研究一氧化氮－环鸟苷酸通路（NO-cGMP)通路与鼠小脑颗粒细胞（GGC）存活的相关性。方法：通过光学显微镜观察N－甲基－D－天门冬氨酸（NMDA），一氧化氮释放剂2‘，2‘－（hydroxy-nitrosohydrazono)bisethanamine(Deta-NONOate）和环鸟苷酸类物质8－溴鸟苷－3‘，5‘－环单磷（cGMP)通过NO-cGMP通路而对CGC存活所产生的影响。以及一氧化氮酶抑制剂N^G－硝基－L－精氨酸（NAME），可溶性鸟苷酰环化酶抑制剂6－Anilinoquinoline-5,8-quinolinedione(LY83583)，环鸟苷酸蛋白激酶G抑制剂Guanosine3‘,5‘-cyclic monoplosphorothioate,8-(4-Cholrophenylthio)-,mRp-Isomer,Trithylammonium salt(Rp-8-8pCPT-cGMPS)对通路的阻断作用，结果：NMD，Deta-NONOate和cGMP均能在无酒精的环境下，促进细胞的生存。并能不同程度地对CGC产生保护作用，减轻酒精对细胞的毒性作用。但NAME和LY83583却分别能抑制NMDA和Deta-NONOate的作用,而Rp-8-pCTP-cGMPS则能消除cGMP对细胞的影响。结论：NO-cGMP通路在促进鼠小脑颗粒细胞的存活和抵抗酒精的神经毒性过程中起到关键的作用。     

表皮干细胞的研究进展

表皮干细胞（epidermal stem cells）主要位于表皮基底层和毛囊外根鞘膨凸部（bugle）。表皮干细胞通过不对称分裂完成自我更新,同时形成一个新的子代细胞——短暂扩增细胞（transit amplifying cells,TA cells）。TA细胞继续分裂扩增、上移从而形成其他各细胞层如颗粒细胞层、棘细胞层等。随着时间的推移,颗粒层细胞、棘层细胞发育成熟行使组织功能,并逐渐老化失去细胞器,被细胞自身分泌的角质蛋白所替代，形成透明层或者角质层直至脱落。这个过程又可称为：生长期、衰退期和静止期。表皮就是遵循这个不断循环往复的生理过程，自我更新，自我修复。     

类PCOS激素环境对颗粒细胞E2、P分泌功能的影响

目的:研究类PCOS的激素环境对正常颗粒细胞分泌功能的影响.方法:体外培养颗粒细胞按不同激素环境雄烯二酮(A)组、黄体生成素(LH)组、胰岛素(INS)组、A LH INS组分为四组,每组分设高浓度(类PCOS环境)和低浓度(类生理环境)组.检测不同激素环境下各组培养液中颗粒细胞E2、P水平的变化.结果:组内比较,类PCOS环境中A组及A LH INS组E2、P水平较低(P＜0.01),LH组及INS组E2、P水平较高(P＜0.01).组间比较显示,两种浓度的激素环境中,E2、P水平在LH组、INS组及A LH INS组均明显高于A组,且E2水平在INS组最高而P水平在LH组最高(P＜0.01),类PCOS环境下,A LH INS组的E2水平较INS组明显低而P水平较LH组明显降低(P＜0.01);生理浓度环境下,A LH INS组E2、P水平与INS组、LH组相比无明显差异.结论:体外类PCOS浓度下,A有抑制正常颗粒细胞合成及分泌E2、P分泌的作用,并可能抑制LH、INS对颗粒细胞合成E2、P;生理浓度下,A对LH及INS刺激颗粒细胞分泌E2、P的无明显抑制作用.     

超排卵周期中卵泡不同反应组钙粘素的表达研究

目的研究超排卵周期中卵巢不同反应组患者的卵泡液E-cadherin、N-cadherin、雌二醇、孕酮的表达及相互关系.方法对70例因输卵管、男性因素不孕患者行体外受精-胚胎移植,按取卵时卵泡发育数目不同分为低反应组、高反应组及正常反应组.用ELISA法及CL法分别测定各组卵泡液中E-cadherin、N-cadherin、雌二醇、孕酮水平,并作比较分析.结果高反应组N-cadherin显著高于正常反应组(P<0.05).低反应组E-cadherin显著高于正常反应组(P<0.05).低反应组FSH用量明显高于正常反应组及高反应组(P<0.05),且与E-cadherin呈正相关.高反应组雌二醇水平明显高于其余各组(P<0.05),低反应组孕酮水平明显高于其余各组(P<0.05).结论高反应组患者卵泡群发可能与卵泡局部N-cadherin的高表达有关,而低反应组卵泡发育受阻可能与高E-cadherin水平有关,使卵泡对FSH反应性降低并有黄素化倾向.     

睾酮对体外培养小鼠卵巢颗粒细胞分泌抗苗勒管激素的影响

目的 探讨睾酮对体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞抗苗勒管激素（anti-Mullerian hormone,AMH） 分泌的影响。方法 小鼠卵巢颗粒细胞原代培养,添加不同浓度睾酮,ELISA 法检测颗粒细胞AMH 的表达。结果 ELISA 法证实颗粒细胞中有AMH 表达,不同浓度（10-8 mmol/L、10-7 mmol/L、10-6 mmol/L） 睾酮作用24 h 可促进颗粒细胞分泌AMH,且随睾酮浓度的增加、作用时间延长,AMH 分泌明显增加（P ＜ 0.01）。结论 睾酮促进小鼠卵巢颗粒细胞分泌AMH,高浓度比低浓度作用更强。     

不同分离方法对人卵巢颗粒细胞体外培养的影响

目的 比较人卵巢颗粒细胞不同分离方法.方法 取体外受精-胚胎移植(ⅣF-ET)采卵时的卵泡液,用裂解法、密度梯度离心法、酶解法分离纯化并原代培养人卵巢颗粒细胞.比较不同的分离方法获得的卵巢颗粒细胞数量、形态及其对早期培养的影响.结果 裂解法得到的颗粒细胞数较密度梯度离心法、酶解法多(P＜0.005,P＜0.001);比较3种分离方法获得的卵巢颗粒细胞的活性和孕激素分泌量差异无统计学意义;接种24h后,酶解法得到的卵巢颗粒细胞存活量最多(P＜0.05),裂解法得到的存活细胞最少(P＜0.05);裂解法获得的卵巢颗粒细胞继续培养48、72及96h均较培养24h有明显细胞增殖(P＜0.05),且与其他组存活的细胞量差异无统计学意义.结论 裂解法得到的颗粒细胞数量多,细胞生长较好,操作简单,是较理想的分离人卵巢颗粒细胞的方法.