β2糖蛋白I(β2GPI)在卵泡液中的表达水平及其与卵泡发育的关系

目的:探讨β2糖蛋白I(β2GPI)与卵泡发育的关系。方法:选取体外受精/卵胞质内单精子注射(IVF/ICSI)助孕治疗的卵巢功能正常者100例(NC组)、多囊卵巢综合征(PCOS)患者85例(PCOS组),卵巢储备功能低下(DOR)患者62例(DOR组),长方案促排卵,收集人绒毛膜促性腺激素(h CG)注射日血清及取卵日优势卵泡的卵泡液,应用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定各组卵泡液中β2GPI的水平;电化学发光法测定h CG注射日血清E2水平,并对IVF/ICSI周期卵泡液中β2GPI水平与h CG注射日血清E2水平、获卵数以及卵成熟率进行相关性分析。结果:各组卵泡液中β2GPI浓度相比均无统计学差异(P0.05);NC组IVF/ICSI周期中卵泡液中β2GPI的水平与h CG注射日血清E2水平、获卵数及卵成熟率均呈负相关(r=-0.279,P0.05;r=-0.243,P0.05;r=-0.711,P0.01)。结论:卵泡液中β2GPI的水平与卵巢功能无显著相关性,卵泡液中β2GPI的表达水平与IVF/ICSI周期中卵泡的发育存在负相关。     

燃煤型氟中毒对雌性大鼠卵巢颗粒细胞的影响

目的动态观察燃煤型氟中毒对雌性大鼠卵巢颗粒细胞的影响。方法将清洁级SD雌性大鼠90只随机分为对照组、中氟组、高氟组,每组30只,对照组大鼠食用非病区玉米饲料(含氟量5.2 mg/kg),中氟组和高氟组分别在饲料中添加45%和75%的某病区原煤加拌泥煤烘烤的玉米饲料(含氟量分别为47.8、96.0 mg/kg)。每组分别于60、120、180 d动态观察雌鼠氟斑牙变化情况,测定尿氟、骨氟水平,采用透射电镜观察卵巢颗粒细胞超微结构变化,末端转移酶标记技术(TUNEL法)检测卵巢颗粒细胞凋亡情况。结果成功建立燃煤型氟中毒雌鼠模型。透射电镜下发现,对照组卵巢颗粒细胞形态结构正常;染氟组可见颗粒细胞核膜皱缩,内质网、核糖体逐渐减少,线粒体肿胀,胞浆内出现较多的脂滴,随染氟剂量的增加逐渐出现颗粒细胞凋亡特征。除中氟组染氟60 d时卵巢颗粒细胞凋亡率与对照组差异无统计学意义外(P0.05),各染氟组雌鼠颗粒细胞凋亡率均高于同期对照组(P0.05),且随染氟时间的延长和剂量的增加,颗粒细胞凋亡率逐渐增加。结论氟中毒可能通过影响大鼠卵巢颗粒细胞结构,诱导和促进卵巢颗粒细胞凋亡,且颗粒细胞超微结构的损伤程度和凋亡率与染氟时间及剂量有关。     

双氢睾酮对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素表达的影响

目的 探讨双氢睾酮（DHT）对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素（AMH）表达的影响。方法 从95只21 d SD雌性大鼠中提取颗粒细胞原代培养48 h后,先用HE染色检测细胞形态,卵泡刺激素受体（FSHR）细胞免疫荧光检测细胞纯度;然后根据干预方法和实验的不同,随机将细胞分为对照组（无药物干预）、10^-8mol/L DHT组、10^-5mol/L DHT组,2×10^-5mol/ L蛋白激酶B(Akt)抑制剂（MK-2206 2Hcl）组和10^-8mol/L DHT+2×10^-5mol/L MK-2206 2Hcl组,分别使用相应浓度的试剂干预细胞3 h。干预完成后,细胞免疫荧光染色观察AMH表达的部位和变化;Western blotting测定不同组的AMH、Akt、p-Akt蛋白表达量。结果 大鼠原代卵泡颗粒细胞的纯度为93.33%±3.09%,AMH表达在大鼠原代卵泡颗粒细胞膜和细胞质中;与对照组相比,10-8 mol/L DHT和10-5 mol/L DHT均可使颗粒细胞AMH表达增加（P<0.05）,但这两个浓度的DHT对颗粒细胞AMH的表达影响差异无显著性（P>0.05）;与对照组相比,10^-8 mol/L DHT可以使p-Akt、AMH表达升高,2×10^-5 MK-2206 2Hcl使AMH表达降低（P<0.05）;与2×10^-5MK-2206 2Hcl相比,10^-8mol/L DHT+2×10^-5 MK-2206 2Hcl处理组AMH表达升高（P<0.05）。结论 DHT可以上调大鼠原代卵泡颗粒细胞AMH的表达,这种作用可能与Akt信号通路有关。     

白藜芦醇拮抗卵泡颗粒细胞氧化应激的损伤

目的 探讨白藜芦醇是否可以拮抗过氧化氢诱导的卵泡颗粒细胞氧化应激损伤。方法 收集体外受精/单精子卵泡浆内注射（IVF/ICSI）患者捡卵后卵泡液中的颗粒细胞并进行培养。将培养后的颗粒细胞分为4组：对照组,损伤模型组,10 μmol/L白藜芦醇组和50 μmol/L白藜芦醇组。采用CCK-8法测定细胞活性,硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（MDA）含量,水溶性四氮唑-1（WST-1）法测定超氧化物歧化酶（SOD）水平,竞争ELISA 法测定孕酮分泌量,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞仪测定细胞凋亡,Western blotting测定Bcl-2、Caspase-3和沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）蛋白表达。结果 与对照组比较,损伤模型组的细胞活性、SOD水平、孕酮分泌量和Bcl-2蛋白表达均明显降低,而MDA含量、细胞凋亡率和Caspase-3凋亡蛋白表达均明显增加（P<0.05）。与损伤模型组比较,10 μmol/L白藜芦醇组各项指标未显示出统计学差异;而50 μmol/L白藜芦醇组的细胞活性、SOD水平、孕酮分泌量和Bcl-2及SIRT1蛋白表达均明显升高,MDA含量、细胞凋亡率和Caspase-3凋亡蛋白表达均明显下降（P<0.05）。结论 50 μmol/L白藜芦醇可以通过增加SIRT1的活性,增强颗粒细胞的抗氧化及抗凋亡能力,改善颗粒细胞的功能。     

不同组织膜蛋白及二甲基亚砜对小脑颗粒细胞突起生长的影响

目的探讨不同组织膜蛋白提取物和二甲基亚砜对大鼠小脑颗粒细胞（CGC）突起生长的影响。方法提取成年大鼠肝、坐骨神经和脑白质的组织膜蛋白包被盖片,接种CGC于盖片上,同时将二甲基亚砜（DMSO）作为添加剂加入培养液,观察CGC突起的生长。结果①脑白质膜蛋白能明显抑制CGC突起的生长,随浓度增加抑制效应更加明显;坐骨神经膜蛋白对CGC突起生长抑制不明显,肝组织膜蛋白则能促进突起生长;②随DMSO浓度升高CGC突起生长逐渐受到抑制,当DMSO浓度小于1％时,CGC突起长度与对照对照差别不大。结论脑白质膜蛋白对CGC突起生长有明显抑制作用,而DMSO添加到培养液中在低浓度时不会显著影响神经元突起生长,可用于检测药物及疏水性分子对体外培养的神经细胞突起生长的作用。     

环鸟苷酸依赖性蛋白激酶拮抗酒精性中枢神经细胞毒性机制研究

目的 探讨环鸟苷酸依赖性蛋白激酶对酒精致鼠小脑颗粒细胞(cerebellar granule cells,CGC)毒性作用的影响机制.方法 通过光学显微镜观察一氧化氮(NO)释放剂,环鸟苷酸及环鸟苷酸依赖性蛋白激酶抑制剂对鼠小脑颗粒细胞存活的影响.结果 NO释放剂,环鸟苷酸在无酒精组中促进细胞的生存,并能对CGC产生保护作用,减少酒精对细胞的杀死.环鸟苷酸依赖性蛋白激酶抑制剂可抑制二者对细胞的作用.结论 环鸟苷酸依赖性蛋白激酶在NO释放剂和环鸟苷酸促鼠小脑颗粒细胞的存活和抵抗酒精性神经毒性过程中具有重要的作用.     

基于线粒体能量代谢途径探讨资癸益冲方改善早发性卵巢功能不全小鼠卵巢功能的作用机制

目的：探讨资癸益冲方通过线粒体能量代谢途径改善早发性卵巢功能不全(POI)模型小鼠卵巢功能的作用与机制。方法：80只SPF级雌性C57BL/6N小鼠随机分为正常组、模型组、西药(辅酶Q10)组和中药(资癸益冲方)组,每组20只。除正常组外,腹腔注射环磷酰胺(CTX)建立POI模型小鼠,造模成功后,各组灌胃给予相应药物。HE染色观察卵巢组织形态学,放射免疫法检测血清雌二醇(E₂)、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)水平,透射电镜观察卵巢颗粒细胞线粒体结构,比色法测定颗粒细胞三磷酸腺苷(ATP)含量,免疫组化法和Western Blot法检测与线粒体能量相关的过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF1)和线粒体转录因子A(TFAM)蛋白表达水平。结果：与正常组比较,模型组小鼠卵巢各级卵泡颗粒细胞层数减少,闭锁卵泡增多,E₂水平下降(P<0.05),FSH、LH水平升高(P<0.01),颗粒细胞线粒体数量减少,出现嵴断裂及空泡化改变,外膜不完整,ATP含量下降(P<0.05),PGC-...     

8-Br-cAMP和血小板衍生生长因子对多囊卵巢综合征患者颗粒细胞E2生成的影响

目的:探讨8-溴-环磷酸腺苷(8-Br-cAMP)和血小板衍生生长因子(PDGF)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者离体卵巢黄素化颗粒细胞雌二醇(E2)生成的影响.方法:收集体外授精-胚胎移植(IVF-ET)时PCOS患者(n=6)和正常对照(n=8)的黄素化颗粒细胞进行体外原代培养,在其培养的不同时间(0 h、48 h、120 h)以睾酮(10-7mol/L)作为底物,分别添加8-Br-cAMP(2 mmol/L)和(或)PDGF(10μg/L)于无血清培养液(TCM199)中,共培养3h后收集培养上清、细胞.用放射免疫法测定颗粒细胞分泌E2量;用考马斯亮蓝G250/BSA测颗粒细胞蛋白含量,以校正E2含量.结果:与对照组比较,8-Br-cAMP和PDGF在0 h、48 h和120 h均显著刺激PCOS组颗粒细胞分泌E2(P＜0.05);8-Br-cAMP和PDGF联合作用在48 h、120 h显著刺激PCOS组颗粒细胞分泌E2(P＜0.05).结论:8-Br-cAMP和PDGF均可加速PCOS患者卵巢颗粒细胞内雄激素向雌激素的转化;8-Br-cAMP和PDGF对颗粒细胞芳香化酶活性的调节作用是一致的.     

长期酒精摄入对小鼠小脑颗粒层场电位的影响及其机制

目的:建立小鼠长期酒精注射中毒模型,探讨长期酒精摄入对小鼠小脑皮层苔藓纤维-颗粒细胞感觉信息突触传递的影响机制。方法:20只6～8周龄的健康雄性ICR小鼠按照随机数字表法分为生理盐水组(对照组)和酒精摄入组(酒精组),每组10只。酒精摄入组每日腹腔注射浓度为20%的酒精,对照组则注射同等剂量的生理盐水,注射周期均为28...     

大鼠卵泡颗粒细胞透射电镜制样的简便取材方法

近年来,在很多妇科或更年期疾病的实验研究中,实验动物大鼠卵泡中颗粒细胞的超微结构观察是一个重要指标。由于大鼠卵巢卵泡都很小,而颗粒细胞又是半游离在卵泡液中,数量更少,因此,要得到足量的颗粒细胞进行电镜制样,并及时固定,显然取材比较困难。本实验